博落回总生物碱作为外用杀精子剂的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及博落回总生物碱的一个新用途，具体来说就是以博落回总生物碱为主 要成分，制备女性外用（阴道）杀精子避孕药物，属生物医学领域。
【背景技术】
[0002] 避孕药的开发一直是计划生育的重要内容，目前已面市避孕药的品种很多，主要 有外用杀精子剂、口服避孕药及宫内节育器等。近年来，随着对口服避孕药及宫内节育器 的深入研究与广泛应用，发现了更多的毒副作用，尽管不断有新型口服避孕及宫内节育器 出现，但人们仍强烈期待着更安全，副作用更小的，特别是兼具有多种治疗功能的新型避孕 药品的出现，因此毒副作用更低的外用杀精剂获得了人们更多的关注。通常的外用杀精剂 一般不干扰女性的内分泌功能，不会造成不孕不育风险，且价格便宜、使用方便，若与避孕 套合用则效果更佳，并在临床应用中得到了很高的评价。目前，源自天然药物的外用杀精剂 开发一直都是避孕药物研发的热点，植物源杀精剂如茶皂素、苦参/白头翁的提取物、印楝 油等亦有相关报道，但基于生物碱的外用杀精剂却少有报道。我们在研究中药博落回中的 生物碱时发现从该植物中提取的博落回总生物碱(用酸水渗漉其果荚提取）具有较好的体 外杀精效果，且对人体的毒性很低，具有开发成女性外用避孕药的良好前景，经检索发现基 于博落回总生物碱的杀精子剂目前未见报道。博落回是一种生物活性极强的药用植物，其 全草中富含多种生物碱如血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐品碱等异喹啉类生物碱(见 图1)，均对人类精子具有一定的杀灭作用。我们对其中的血根碱杀精子剂进行了深入研究 并申请了专利。但由于血根碱的纯化工艺复杂，纯化成本较高，使得血根碱作为杀精子剂的 应用受到一定的限制。而博落回总生物碱因含有多种异喹啉类生物碱而具有良好的杀精效 果，且分离制备的成本低，原料来源广，因此基于博落回总生物碱的杀精子剂的开发更有价 值。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供博落回总生物碱的一个新用途，即作为女性外用杀精、避 孕药的开发。其显著的特点是：能低浓度、快速杀灭精子，价格便宜、安全可靠。
[0004] 本发明药物可以按多种药剂学上的常规方法制备成适合女性外用（阴道中使用） 的凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、膜剂、栓剂、泡腾片剂、缓释制剂等。
[0005] 为了更好地理解本发明的实质和验证其临床效果，进行了博落回总生物碱的体外 杀灭人精子的实验研究，但本发明的内容并不仅限如此。试验方法如下： 1.博落回总生物碱的制备及其制剂 试验中所采用的博落回总生物碱按照钟明（博落回总生物碱对钉螺生殖腺超微结构的 影响研究，中国病原生物学杂志，2009,4 (10) :758-761)论文提供的方法，从博落回果荚或 全草中提取博落回总生物碱，并应用于下述实验。
[0006] 将博落回总生物碱溶于pH为4.5 (同于女性阴道正常的pH值）的酸水中，并采用 生理盐水将其稀释成0. 50、0. 40、0. 30、0. 20、0. 10 mg/L系列浓度的溶液备用。
[0007] 制备博落回总生物碱凝胶制剂时采用羟甲基丙基纤维素（HPMC)为基质，将博落 回总生物碱溶于稀盐酸后与基质一起配制成博落回总生物碱为I. 6、0. 8、0. 4、0. 2、0. 1、 0. 05 mg/kg的系列凝胶备用。
[0008] 2.人精子悬混液制备 按照WHO规定的标准(世界卫生组织.人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室 检验手册.北京：人民卫生出版社，2001，5-28)，收集并筛选出20份正常健康且年龄在 20-25周岁男性的精液。取样前禁欲一周，2天内禁酒与咖啡，手淫法取精。精液分析采用 WHO推荐的方法，试验所用精液符合以下条件：体积大于3 ml，液化时间〈30 min，精子密 度>60X IO6 /ml，活动率70% -80%，活动力为IV，a + b级精子彡50%，畸形精子〈10%，无精 子凝集现象，不符合以上质量标准的精液不采用。精液液化后经Percoll梯度离心法优化， 然后用生理盐水（NS)稀释精液浓度至（60-80) X IO6 /ml。
[0009] 3.体外杀精 体外杀精试验采用改进的Sander-Cramer方法（同于申请者本人申请的专利：血根碱 及其盐作为杀精子剂的应用，【申请号】201410004442. 3)进行。试验设立了空白对照组(调 pH值为7. 4±0. 5的NS组)、对照组试验药物组(含不同浓度的博落回总碱组）和阳性药物 组(壬苯醇醚-9, NP-9)。本试验之所以选用NP-9作为阳性药物，主要是考虑到NP-9是目 前世界上使用最多的阴道杀精剂，且现在市售的杀精剂的活性成分主要是NP-9,有关它的 杀精实验研究最多，效果也最为确切，故选择NP-9作为博落回总碱杀精试验的阳性药物， 以便比较。将制备好的人精子悬混液，置于37°C水温箱中恒温孵育，然后取0.2ml的人精 子悬混液与制备好的博落回总碱系列溶液等量混合均匀，取一滴于载玻片上进行显微观察 (200X)，分别观察并记录20 s，40 s，l min, 2 min和3 min的杀精效果。每个样品观察10 个视野，如果有一个及以上的活精子则记为" + "，活动精子为30% -50%记为活动精子 为50%则记为"+++"，无活精记为"一"，并依此判断最低的有效杀精浓度。每组实验用20 位供精者的精液，且每份标本连续检测3次，取其平均值。将与药物作用后的精子按精子活 力恢复法进行处理：加入NS后离心，弃上清液，再加入0.5ml F-IO精子营养液，37C°孵育 30 min，观察1小时内精子的活力恢复情况。结果如表1所示。
[0010] 表1博落回总生物碱浓度与杀精时间的关系
【主权项】
1. 一种具有杀灭精子作用的生物碱药物(博落回总生物碱)，其特征在于其主要成分为 博落回植物中提取的总生物碱。
2. 其主要组分有血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱与别隐品碱等，其化学结构式见图1 ; 如权利1所述的药物，其特征在于由血根碱与药剂学上允许的水溶性溶剂或凝胶剂、乳膏 齐U、软膏剂、膜剂、栓剂、泡腾片剂、缓释制剂混合制备而成。
【专利摘要】本发明公开了中药博落回中提取的博落回总生物碱作为女性外用杀精子剂的应用。其显著的特点是能低浓度、快速杀灭精子，且制备简单，价格便宜、安全可靠。博落回总生物碱水溶液（pH=4.5）20s的最低杀精浓度为0.50？mg/L,？3？min的最低杀精浓度为0.30？mg/L,？博落回总生物碱的羟甲基丙基纤维素凝胶在家兔抗生育试验中的低杀精浓度为0.8？mg/kg，ED50值为0.189？mg/kg。与常用的壬苯醇醚相比，博落回总生物碱的各项杀精指标优于或相似于壬苯醇醚，并兼有杀菌预防疾病的功效，且在制备方法与经济性方面更有优势，有望成为一种新型、高效的女性外用避孕药。
【IPC分类】A61K36-66, A61P15-18
【公开号】CN104547050
【申请号】CN201410823661
【发明人】钟明, 阎建辉
【申请人】湖南理工学院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月26日