，粉碎；（2)按IOL80%乙醇/kg半边莲药 材的比例，回流提取2h，将液体用滤纸滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓缩，干燥；（3) 向上述（2)所得的半边莲干燥所得固体中加3%盐酸充分溶解，加等体积乙醚进行萃取，弃 去乙醚层，合并水层，加NaHCO3后碱化药液，用等体积氯仿进行萃取，弃去氯仿层，挥干，既 得半边莲生物碱。
[0029] 夏枯草总黄酮的制备：（1)取夏枯草药材，粉碎；（2)按15L60%乙醇/kg夏枯草 药材的比例，回流提取2h，将液体用滤纸滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓缩，直至得到 1000 mL液体/kg生药的夏枯草浓缩药液；（4)取处理好的HPD-100型树脂，加入上述（3)所 得的夏枯草浓缩药液，用6BV80%乙醇进行洗脱，即得到夏枯草总黄酮。 制备得到的有效组分纯度分别为半枝莲总黄酮的纯度不得少于40%，半枝莲多糖的纯 度不得少于50%，边莲总黄酮的纯度不得少于50%，半边莲生物碱的纯度不得少于30%，夏枯 草总黄酮的纯度不得少于50%。
[0030] 1 ? 2有效组分溶液的制备。
[0031] 精密称取纯化后的各有效组分各4mg，用去离子水超声溶解，加0. 2%二甲基亚砜 (DMSO)助溶，均配制成浓度为0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1.Omg/ml的溶液，0. 22ym滤膜过滤，即 得，用时摇匀。
[0032] 2、各抗肿瘤有效组分对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。
[0033] 取处于对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721，调整浓度为5XIO4个/mL，接种于96 孔培养板，每孔100ML，置于37°C、5%C02的培养箱中培养约24h待细胞贴壁完全。实验设 为加药组(半枝莲总黄酮、半枝莲多糖、半边莲总黄酮、半边莲生物碱以及夏枯草总黄酮）和 空白对照组，每组均设给药浓度0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、I.Omg/ml，每个浓度设3个复孔。放入 37°C、5%C02培养箱中继续培养24h，每孔加入细胞增殖与活性检测试剂(简称CCK-8) 10沿， 置培养箱内避光培养3h后，应用酶标仪于450nm处测吸光度（OD)值(均数土标准差)，计 算药物对细胞的抑制率（％)，结果如表1所示。其中，细胞的抑制率=(I-OD给药组/OD空 白组）X100%。实验结果显示不同浓度的各有效组分干预24h后对肝癌细胞SMMC-7721的 增殖均有一定的抑制作用。通过SPSS数据处理软件，计算各组分抗肝癌细胞SMMC-7721的 半数致死量IC5tl，结果如表2所示。
[0034] 表1 :各有效组分对肝癌细胞SMMC-7721的吸光度值。
【主权项】
1. 一种抗肝癌中药组合物，其特征在于，是由半枝莲提取物、半边莲提取物、夏枯草提 取物组成；所述半枝莲提取物为半枝莲总黄酮、半枝莲多糖，所述半边莲提取物为半边莲总 黄酮、半边莲生物碱，所述夏枯草提取物为夏枯草总黄酮；所述半枝莲总黄酮、半枝莲多糖、 半边莲总黄酮、半边莲生物碱、夏枯草总黄酮五种组分的浓度比（mg/ml)为（4-6) : (6-8): (7-9) : (12-15) : (0?5-2)〇
2. 如权利要求1所述的抗肝癌中药组合物，其特征在于，所述半枝莲总黄酮、半 枝莲多糖、半边莲总黄酮、半边莲生物碱、夏枯草总黄酮五种组分的浓度比（mg/ml)为 4. 81:7. 6:7. 8:13. 5:1〇
3. 如权利要求1所述的抗肝癌中药组合物，其特征在于，所述半枝莲总黄酮、半枝莲多 糖、半边莲总黄酮、半边莲生物碱和夏枯草总黄酮五种组分均用回流法进行提取；所述半枝 莲总黄酮、半边莲总黄酮以及夏枯草总黄酮经大孔树脂进行纯化；所述半枝莲多糖和半边 莲生物碱分别运用醇沉法和萃取法进行纯化。
4. 如权利要求3所述的抗肝癌中药组合物，其特征在于： 所述半枝莲总黄酮的制备：取半枝莲药材，粉碎；按15L50%乙醇/kg半枝莲药材的 比例，回流提取2次，每次2h，将每次提取液体用滤纸滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓 缩；两次加药浓缩所得的醇提药液混合后继续加热浓缩，直至得到1000 mL液体/kg生药的 半枝莲浓缩药液；取处理好的HPD-400型树脂，加入半枝莲浓缩药液，用8BV、80%乙醇进行 洗脱，得到半枝莲总黄酮； 半枝莲多糖的制备：取半枝莲药材，粉碎；按40L水/kg半枝莲药材的比例，回流提取 3次，每次2h，将每次提取的液体用纱布滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓缩；三次加药 浓缩所得的水提药液混合后继续加热浓缩，直至得到1000 mL液体/kg生药的半枝莲浓缩药 液；向半枝莲浓缩药液中加入乙醇，使药液出浓度为70%，醇沉时间36h，抽滤，得到滤渣，即 为半枝莲多糖； 半边莲总黄酮的制备：取半边莲药材，粉碎；按30L60%乙醇/kg半边莲药材的比例， 回流提取3次，每次lh，将液体用滤纸滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓缩；三次加药浓 缩所得的醇提药液混合后继续加热浓缩，直至得到1000 mL液体/kg生药的半边莲浓缩药 液；取处理好的HPD-100型树脂，加入半边莲浓缩药液，用IOBV70%乙醇进行洗脱，即得到 半边莲总黄酮； 半边莲生物碱的制备：取半边莲药材，粉碎；按IOL80%乙醇/kg半边莲药材的比例， 回流提取2h，将液体用滤纸滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓缩，干燥；向干燥所得固 体中加3%盐酸充分溶解，加等体积乙醚进行萃取，弃去乙醚层，合并水层，加NaHCO3后碱化 药液，用等体积氯仿进行萃取，弃去氯仿层，挥干，既得半边莲生物碱； 夏枯草总黄酮的制备：取夏枯草药材，粉碎；按15L60%乙醇/kg夏枯草药材的比例， 回流提取2h，将液体用滤纸滤出，分别得药渣与药液，药液加药浓缩，直至得到1000 mL液体 /kg生药的夏枯草浓缩药液；取处理好的HPD-100型树脂，加入夏枯草浓缩药液，用6BV80% 乙醇进行洗脱，即得到夏枯草总黄酮。
5. 如权利要求4所述的抗肝癌中药组合物，其特征在于，所述半枝莲总黄酮的纯度不 得少于40%，所述半枝莲多糖的纯度不得少于50%，所述半边莲总黄酮的纯度不得少于50%， 所述半边莲生物碱的纯度不得少于30%，所述夏枯草总黄酮的纯度不得少于50%。
6.如权利要求1所述的抗肝癌中药组合物，其特征在于，所述抗肝癌中药组合物可以 加药学上可接受的辅料，制成临床上或药学上可接受的任一剂型。
【专利摘要】一种抗肝癌中药组合物，是由半枝莲提取物、半边莲提取物、夏枯草提取物组成；所述半枝莲提取物为半枝莲总黄酮、半枝莲多糖，所述半边莲提取物为半边莲总黄酮、半边莲生物碱，所述夏枯草提取物为夏枯草总黄酮。本发明提供的抗肝癌中药组合物，依据中药有效组分配伍规律，将半枝莲、半边莲及夏枯草的抗肿瘤有效组分进行配伍，排除了非药效物质的干扰，得到高效的抗肝癌中药组合物，克服了中医临床实践中常采用的将若干种单味中药复方配伍药效低的问题，通过观察该有效组分及配伍组分对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡影响，为该中药组合物的开发提供临床研究前的体外药效学实验依据。
【IPC分类】A61K36-539, A61P35-00
【公开号】CN104758356
【申请号】CN201510150969
【发明人】孟宪生, 包永睿, 王帅, 郑阳阳, 陈宇
【申请人】辽宁中医药大学
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年4月1日