菌、乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、芽孢杆菌、双岐杆菌、米曲霉、蜜环菌、虫草菌、灵芝菌、朱红菌等一种或多种能够用于食物或药物发酵的菌种。
[0033]用于本发明固体发酵的培养基是用于食物或药物常见的培养基如包括但不限于麦芽汁固体培养基、水果培养基、谷物培养基等。所述培养基中可以加入糖类、氮源和无机盐。所述糖类包括但不限于白糖、红糖、低聚糖类、糖醇类、冰糖、蜂蜜等。作为优选，所述糖类的加入量为原料总重量的0-8%。所述氮源包括但不限于酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉、玉米浆、鱼粉、蚕蛹粉、麸皮等。作为优选，所述氮源的加入量为原料总重量的0-10%。所述无机盐包括但不限于硫酸铵、氯化锰、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等。作为优选，所述无机盐的加入量为原料总重量的0-3%。优选地，在发酵过程中，根据菌种的不同分阶段植入培养基。
[0034]用于本发明固体发酵的方法包括如下步骤:
[0035](I)对原材料进行杀菌处理，此处的杀菌处理包括低温杀菌、射线杀菌、化学杀菌等不破坏原材料品质的杀菌处理方法；
[0036](2)制备培养基:采用本领域常规方法制备各种固体发酵培养基，包括但不限于麦芽汁固体培养基、水果培养基、谷物培养基。
[0037]作为优选，所述麦芽汁固体培养基是将麦芽经过筛选、清洗、干燥，制得的干麦芽经糖化、糊化、过滤等工序，最后加入琼脂制成。作为优选，所述麦芽为大麦麦芽或小麦麦芽。作为优选，所述干燥为晒干或烘干。作为优选，所述糖化采用酸法、酶法或酸酶结合法糖化。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5% (g/100mL)，或2-4% (g/100mL)、或3 %(g/10mL)ο
[0038]作为优选，所述水果培养基是取水果可食用部分，经清洗、打浆(加水或不加水)、过滤、浓缩，最后加入琼脂制得。作为优选，所述浓缩至浆液中固含量为3-15% (g/100mL)、或5-10% (g/100mL)、或8% (g/100mL)。作为优选，所述琼脂的加入量为1_5% (g/100mL)，或 2-4% (g/100mL)、或 3% (g/100mL)。
[0039]作为优选，所述谷物培养基是将谷物去杂、清洗、研磨后，加水煮沸、过滤，加入琼脂而得。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5% (g/100mL)，或2-4% (g/100mL)、或3 %(g/10mL)ο
[0040]作为优选，所述培养基在使用前需经灭菌处理。
[0041]作为优选，所述麦芽汁固体培养基适于仅以中药材为发酵基质；当发酵基质中含有水果时可以选择水果培养基；如果发酵基质中含有谷物类物质时可以选择谷物培养基。这种原则仅做一般性指导，当发酵基质中碳水化合物和水含量足够用于发酵菌生长时，则可以使用发酵基质作为培养基。
[0042](3)制备发酵基质:在灭菌培养基中，加入肉苁蓉原料，优选加入切成适宜大小的片状、条状或粒状的肉苁蓉原料。作为优选，所述肉苁蓉原料的加入量为培养基的0.5-8%(w/w)、或1-5% (w/w)、或2.5% (w/w) ο进一步优选加入其他中药材粉末，更进一步优选加入谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物等其中的一种或多种。其他中药材或谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物可以粉末形式依据常规用量加入，一般为0-10% (w/w)。
[0043](4)菌种植入并发酵:将选择的菌种进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行发酵。作为优选，所述菌种为厌氧菌种、好氧菌种或厌氧与好氧菌种兼用。所述厌氧、好氧菌种的植入量为发酵基质5-16% (w/w)，或8-12% (w/w)、或10% (w/w)。作为优选，所述扩大培养包括固体斜面培养、摇瓶培养和/或种子罐培养。作为优选，所述固体斜面培养的培养基组成包括葡萄糖2-4 %、蛋白胨1-3 %、豆粉1-2 %、琼脂2-4 %、硫酸镁0.05-0.08 %、磷酸二氢钾0.2-0.3%、氯化钠0.1-0.3%。作为优选，所述摇瓶培养的培养基包括葡萄糖2-3%，蛋白胨1-4%，豆粉0.5-2%，麸皮0.5-2%，硫酸镁0.01-0.1 %，磷酸二氢钾0.1-0.4%、磷酸氢二钾0.1-0.2%。作为优选，所述摇瓶的转速为200转/min。作为优选，所述种子罐培养的培养基为牛肉膏0.5% -1.5%、蛋白胨1% -2%、玉米浆0.5% -1.0%,磷酸二氢钾0.03% -0.05%、硫酸锌0.02% -0.07%、氯化镁0.04% -0.08%，其余为水。
[0044]作为优选，当选择厌氧菌种时，在厌氧条件下于25_40°C密封静置培养15-40天，或发酵温度为28-35 °C、30-32 °C或31 °C，发酵时间为21-35天、25-28天或27天。
[0045]进一步优选，当选择好氧菌种时，在通气条件下于22_35°C发酵7_30天，或发酵温度为25-30°C或28°C，发酵时间为14-25天或18-22天或20天。所通气体为无菌空气，通气量为 2.5-5.0L/min。
[0046]更进一步优选，所述发酵分阶段进行，第一阶段为好氧发酵，选择好氧菌种，发酵温度为22-35°C，无菌空气通气量为2.5-5.0L/min,好氧发酵时间为7_30天；第二阶段转为厌氧发酵，选择厌氧菌种，关闭通气，控制发酵温度为25-40?，厌氧发酵时间为15-40天。
[0047](5)收取发酵后的培养基，得到肉苁蓉酵素。
[0048]本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
[0049](I)本发明在制备过程中没有损失或破坏肉苁蓉原料营养成分，且制得的肉苁蓉酵素显著提高了营养与保健价值；
[0050](2)本发明的制备工艺简单，制备过程可控，得到的酵素产品质量稳定，可常温保存，适于规模化生产，具有良好的市场前景。
[0051]本发明制备获得的肉苁蓉酵素可以作为肉苁蓉饮片的替代品直接入药或保健品，所述剂型为液体制剂、颗粒剂、胶囊制剂、粉剂或片剂；本发明制备获得的肉苁蓉酵素也可以独自制备为保健品或加入营养食品中，所述保健品可以制备为液体制剂、颗粒剂、胶囊制剂、粉剂或片剂；所述营养食品包括饮料、牛奶、奶制品、刨冰制品、酒及含酒精饮品、豆浆饮品、肉类、五谷杂粮制品、食用油类、面包、小麦制品、蜂蜜和奶茶。
【具体实施方式】
[0052]实施例1
[0053](I)取新鲜的肉苁蓉净选后打磨成浆液，低温杀菌处理。
[0054](2)麦芽汁培养基的制备:将大麦麦芽经过筛选、清洗、自然晒干，制得干麦芽经酸法糖化、糊化、过滤等工序而成；并加入3%的葡萄糖，灭菌。
[0055](3)制备发酵基质:在上述灭菌麦芽汁培养基中，加入步骤(I)所得的肉苁蓉浆液，所述肉苁蓉浆液的加入量为培养基的5% (v/v)。
[0056](4)菌种植入并发酵:选择乳酸菌为发酵菌种，经固体斜面培养进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行发酵。所述固体斜面培养的培养基组成包括葡萄糖4%、蛋白胨1%、豆粉2%、琼脂4%、硫酸镁0.06%、磷酸二氢钾0.2%、氯化钠0.1%。所述乳酸菌的植入量为发酵基质8% (w/w) ο所述发酵是在厌氧条件下于30°C密封静置发酵40天。
[0057](5)抽取发酵后的液体，经过滤后得到肉苁蓉酵素。
[0058]实施例2
[0059](I)取新鲜的肉苁蓉净选后打磨成浆液，射线杀菌处理。
[0060](2)苹果果浆培养基的制备:将苹果去皮、去核后，经清洗、打浆、过滤制得，并灭菌。
[0061](3)制备发酵基质:在上述灭菌的苹果果浆培养基中，加入步骤(I)所得的肉苁蓉浆液，所述肉苁蓉浆液的加入量为培养基的8% (v/v)。
[0062](4)菌种植入并发酵:选择保加利亚乳杆菌为发酵菌种，经固体斜面培养和种子罐培养进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行发酵。所述固体斜面培养的培养基组成包括葡萄糖4 %、蛋白胨I %、豆粉2 %、琼脂4 %、硫酸镁0.06 %、磷酸二氢钾0.2%、氯化钠0.1%。所述种子罐培养的培养基为牛肉膏0.8%、蛋白胨2%、玉米浆0.5%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸锌0.05%、氯化镁0.06%，其余为水。所述保加利亚乳杆菌的植入量为发酵基质10% (w/w) O所述发酵是在厌氧条件下于28°C密封静置发酵25天。
[0063](5)抽取发酵后的液体，经过滤后得到肉苁蓉酵素。
[0064]实施例3
[0065](I)取新鲜的肉苁蓉净选后打磨成浆液，化学杀菌处理。
[0066](2)谷物水溶液培养基的制备:将玉米去杂、清洗、研磨后，加水煮沸、过滤后，加入