人参皂苷Rg5在制备预防急性肾损伤药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明公开了人参皂苷Rg5在制备预防急性肾损伤药物的新用途，属于中药中化 合物的新生物活性的医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 顺铂（CDDP)对多种肿瘤具有良好的疗效，是临床使用的最有效和最常见的抗肿 瘤药物之一。目前，顺铂作为一种重要的化疗药物在临床广泛应用。顺铂作为一种广谱抗癌 药物，疗效与用药量成正比，但同时随着用量的增大，药物毒性也增大，容易引起多种不良 反应，如胃肠道反应、骨髓抑制、耳毒性等，尤其是它在肾脏中高聚集、高排泄、高代谢。其中 肾毒作用尤为突出，这对顺铂的剂量使用造成了影响，在一定程度上限制了它的应用。统计 显示，单用顺铂时，肾毒性发生率高达28- 36%，而临床化疗肾损害的发生率为25% - 35%。 这极大的限制了顺铂的用量和临床的应用。如何预防顺铂的毒副作用成为了人们关注的问 题。
[0003] 氧化应激已被证实是顺铂肾毒性的重要机制之一，顺铂进入机体后，通过抑制细 胞还原和清除活性氧簇（ROS)的能力，使细胞中ROS水平升高，使机体发生氧化应激，最终 导致机体组织器官的损伤。生物体内存在两类活性氧清除系统，一类是酶促防御系统，主要 包括超氧化物歧化酶（S0D)、过氧化氢酶（CAT)、谷胱甘肽氧过氧化物酶（GSH-Px)、谷胱甘 肽还原酶（GSH-R)等，另一类是非酶促反应系统，包括维生素A、C、E，半胱氨酸，辅酶Q、硒 等。在正常情况下，机体的活性氧代谢处于平衡状态，顺铂可以通过三种方式影响活性氧簇 打破机体的这种平衡：其一，顺铂经过水解后产物的活性物质可以迅速与机体内含巯基的 谷胱甘肽（GSH)、超氧化物歧化酶（SOD)等抗氧剂反应，使它们降解或失活，从而引发氧化 应激反应。其二，顺铂在机体内代谢的过程中会产生大量的氧自由基，自由基可以引起线粒 体膜脂质过氧化反应导致线粒体功能抑制，还可以使膜蛋白功能的受损，破坏核酸及染色 体。其三，在机体长成ROS的过程中，铁离子是重要的催化剂，而细胞内的铁离子的主要来 源为细胞色素P450 (CYP)系统，顺铂可以通过影响CYP系统诱导ROS的产生，进而引发机 体氧化过激反应。
[0004] 目前，中草药中获得提取物及活性成分对急性肾损伤具有一定的保护作用，人参 皂苷类成分作为预防和治疗肾损伤发挥了重要的作用（刘新文，等.三七总皂苷通过线粒 体途径抑制顺铂诱导的大鼠肾细胞凋亡，中国药理学通报，2015，31，216-21)，如单体人 参皂苷Rg3,Rh2,Rd等。但单纯探讨人参皂苷对顺铂肾损伤的保护作用的研宄为之甚少。
[0005] 人参皂苷Rg5是人参热处理后产生的一个次级皂苷，是原有二醇型人参皂 苷在C-20位脱糖及脱水异构后而产生的热裂解皂苷。研宄表明：Rg5具有广泛的 药理活性，如抗癌，抗炎，益智等（LeeKY,etal.，Ginsenoside_Rg5suppresses cyclinE-dependentproteinkinaseactivityviaup-regulatingp21Cip/WAFl anddown-regulatingcyclinEinSK-HEP-Icells.AnticancerRes. 1997， 17， 1067-1072.;LeeYYjetal.,Anti-InflammatoryEffectofGinsenosideRg5in Lipopolysaccharide-StimulatedBV2MicroglialCells.IntJMolSci. 2013， 14， 9820-9833;ChuS，etal. ,GinsenosideRg5improvescognitivedysfunctionand beta-amyloiddepositioninSTZ-inducedmemoryimpairedratsviaattenuating neuroinflammatoryresponses.IntInmunopharmacoL2014，19，317-326)〇
[0006] 到目前为止，未见有关该化合物对顺铂（CDDP)所致急性肾损伤保护作用的报道， 本发明创造性的提出并证明了该成分的急性肾损伤保护作用。人参皂苷Rg5可以通过高温 处理廉价易得的人参茎叶皂苷而获得，是一种非常有前途和开发价值的肾保护剂。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了人参皂苷Rg5在制备预防顺铂（CDDP)诱导的急性肾损伤药物中的 应用。
[0008] 本发明所述的人参皂苷Rg5在用于上述用途时，其口服或胃肠外给药，均是安全 的，在口服情况下，其可以以任何常规的形式给药，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂， 软胶囊，颗粒剂和贴剂等。
[0009] 本发明制备保护急性肾损伤药物是由有效单体或有效成分与固体或液体的赋形 剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个例子， 散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖，淀粉，糊精，碳酸钙，合成或天然硫酸铝，氧化镁， 硬脂酸镁，碳酸氢钠，干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水，甘油，1，2-丙二醇，单糖浆，乙醇， 乙二醇，聚乙二醇，山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、 蜂蜡、木蜡、液体石蜡等组合成的疏水剂或亲水剂。本发明的药物组合物可以按现有技术中 已知的方法如混合、制粒、压片来制备。本发明药物组合物还可以包括各种药学使用的任何 组分，如香味剂、着色剂、甜味剂等。
[0010] 本发明的有益效果在于，人参皂苷Rg5来自人参的热处理过程中，广泛存在于红 参（redginseng)，黑参（blackginseng)中，也可以利用富含人参阜苷的提取物热裂解产 生，其容易获得，工业化前景好，同时具有疗效显著和毒副作用小等优点。
[0011] 本发明可以通过下面的实验例进一步说明。
[0012] 实验例.人参皂苷Rg5对顺铂（DDDP)诱导的急性肾损伤的保护作用 1材料和方法 I. 1材料、试剂及仪器 人参皂苷Rg5，纯度 >98. 5% (HPLC);顺铂，（CDDP，纯度 >99%，Pt, 65%，CASNO. 15663-27-1)，美国Sigma公司 超氧化物歧化酶（SOD)试剂盒、苦味肌酐（Cre)、尿素氮（BUN)、还原型谷胱甘肽（GSH) 等均购自南京建成生物工程研宄所；肿瘤坏死因子a(TNF-a)、白介素10 (IL-10)试 剂盒均购自美国R&D公司，国内分装。
[0013] BP21ID电子天平，德国Sartorius公司；DK-98-1型电热恒温水浴锅，天津泰斯特 仪器有限公司；HC-2517高速离心机，安徽中科中佳公司；Epoch超微量微孔板分光光度计， 美国伯腾仪器有限公司；FSH-2A可调高速匀浆机，金坛市华城海龙实验仪器厂。
[0014] 1.2 动物 雄性ICR小鼠，SPF级，18~22g，购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。
[0015] 1.3 方法 I. 3. 1动物分组及给药 将适应性饲养1周的小鼠随机分为4组，每组8只，分别为正常对照组、模型组、RgdS剂量组（l〇mg/kg)和1^5高剂量组（20mg/kg)。
[0016] 给药组按剂量每天灌胃给药一次，连续7天，正常对照组和模型组灌胃等体积纯 净水。第7天末，在灌胃给药Ih后，对模型组和给药组小鼠一次性腹腔注射25mg/kg的顺 铂生理盐水溶液，继续观察。给药期间观察并记录各组小鼠摄食量，饮水量以及体重变化。 顺铂造模72h后依次对各组小鼠进行眼球取血，3000r/min离心IOmin分离血清，4°C保存备 用；迅速解剖取肾脏，肝脏及脾脏。经4°C生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重，取左肾于4%的甲 醛溶液中固定，待切片，右肾置于_80°C低温冰箱中保存。
[0017] 1.3.2脏器指数计算 计算公式：脏器指数=脏器重量（g) /体重（g)X100% 1. 3. 3血清生化检测 超氧化物歧化酶（S0D)，还原型谷胱甘肽（GSH)，尿素氮（BUN)和苦味肌酐（Cre)按试剂 盒说明书采用比色法测定，操作步骤按各自试剂盒给定说明书程序进行。
[0018] 1.3.4肾组织生化指标检测 取右肾脏组织称重，按照1:9的比例加入的生理盐水稀释，研磨成匀浆组织，4°C下 4200rpm离心10min，取上清液测定肾脏组织匀浆中TNF-a(肿瘤坏死因子）和IL-I0 (白介素-1 0 )含量，采用ELISA酶联免疫检测法，操作步骤按各自试剂盒给定说明书程序 进行。
[0019] 1.3.5肾组织病理学观察 取左肾脏组织置于4%的中性甲醛溶液中固定，低浓度到高浓度酒精脱水，二甲苯中透 明，常规石蜡包埋，切片，脱蜡后用染色，于光学显微镜下观察肾脏组织病理学变化。
[0020] 1. 3. 6数据处理 实验数据均用均数土标准差（f±s)表示，用SPSS22. 0统计软件进行分析，组间采 用单因素方差分析比较差异。K0. 05为有差异，K0. 01为有显著性差异，K0. 001为极显 著性差异。
[0021] 2 结果 2. 1实验动物整体水平的变化 与正常对照组小鼠相比，顺铂模型组小鼠毛色稀疏，摄食量和饮水量均减少，体重明显 减轻（#0. 05)，肾指数显著升高（#0. 05)，肾脏有膨大现象，代谢器官受损严重；人参皂苷 Rg5给药组，小鼠状态明显好转，体重下降得到缓解，可以明显改善顺铂所致的肾指数下降 (/X0. 05)，对肝和脾指数影响较小，结果如下表。
[0022] 表2-1人参皂苷1^5对顺铂致肾损伤小鼠体重、脏器指数的影响（n=8)
【主权项】
1. 人参阜苷Rg5 (ginsenoside Rg5)在制备预防急性肾损伤药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的肾损伤疾病为顺铂（CDDP)所致的 氧化应激损伤。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的人参皂苷Rg5纯度为85~99. 99%。
4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：将人参皂苷Rg5作为唯一活性成份或与 其它药物组合，与制药中可以接受的辅助和/或添加成份混合后，按常规的制药方法和工 艺要求，制成用于治疗或预防急性肾损伤的制药中可接受的任何剂型，如片剂，胶囊剂，粉 针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。
【专利摘要】本发明公开了人参皂苷Rg5（C42H70O12, CAS No. 186763-78-0）在制备保护顺铂（CDDP）诱导的急性肾损伤药物中的应用，属于医药产品研究开发领域。动物实验研究表明：与模型组相比，人参皂苷Rg5可以有效降低血清中肌酐（Cre）和尿素氮（BUN）水平，提高肾脏组织SOD和GSH水平，此外，人参皂苷Rg5能够显著抑制肾组织中TNF-α和IL-1β等炎症因子的升高。因此，可以把该化合物及含有该化合物的有效组分制备成预防急性肾损伤的药物。其药物形式可以是现有的任何剂型，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。
【IPC分类】A61P13-12, A61K31-704
【公开号】CN104800233
【申请号】CN201510172314
【发明人】李伟, 王梓, 关大朋, 韩烨, 张桂山, 杨树宝, 王英平, 张瑞, 唐姗
【申请人】吉林农业大学
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年4月14日