一种南瓜花水提物在治疗糖尿病方面的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种南瓜花水提物在治疗糖尿病方面的新用途，属于生物技术领 域。
【背景技术】
[0002] 南瓜 Cucurbita moschata (Duch. ex Lam. ) Duch. ex Poiret 为萌芦科南瓜属草本 植物，世界各地普遍栽培。南瓜是我国夏秋季的主要蔬菜之一，随着人民生活水平的提高以 及对营养和健康食品的日益关注，发现南瓜不仅营养丰富，长期食用还具有食疗保健和药 用功能。资料显示，南瓜产品的综合开发与利用已日益受到国内外学者的重视，被认为是特 效保健食品。
[0003] 现代药理学研宄证实，南瓜具有降血糖、调血脂、降血压等功效，已公开的专利 CN201210466672. 2、CN201210180114. X、CN201110423905. 6 均指出南瓜作为其中主要原料 之一的组合物对糖尿病具有预防、治疗作用；截止目前，对南瓜中的化学活性物质基础研宄 相对较少，其中的南瓜多糖被认为是预防糖尿病的活性成分之一，它直接参与了降血糖、调 血脂等有关活动，对大鼠、家兔、人等有非常显著的降血糖作用（彭红，欧阳友生，黄小茉， 等.南瓜多糖的生物活性及其开发前景，中草药，2002 :33(7):附5-7)
[0004] 南瓜花是南瓜的花，一般为杏黄色，雌雄同株，6-7月南瓜开花时采收，新鲜或晒 干可作药用，具有清湿热，消肿毒之功效；南瓜花化学成分及其应用于糖尿病治疗的报道极 少，已公开的专利CN200910221844. 8提出了一种能防治糖尿病的养生茶，其制备方法包含 有南瓜花等五种植物组合而成的组合物。单用南瓜花用于糖尿病的治疗，目前未见研宄报 道。
[0005] 糖尿病（Diabetes mellituS，DM)是一种多病因的代谢性疾病，其特点是慢性高血 糖，伴随因胰岛素（Insulin)分泌及/或作用缺陷所引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。糖 尿病主要分为1型、2型及妊娠期糖尿病，其中2型糖尿病占患者群体的90%以上。目前， 糖尿病已经成为严重威胁人类健康与生命的主要疾病，世界卫生组织报告2014年全球糖 尿病患者人数已达3. 87亿，而到2035年将增至5. 92亿，增幅将达53%。此外，中国成为全 球糖尿病患者最多的国家，目前病人数已超过9600万，2014年80周岁以下死亡的中国人数 中，源于糖尿病相关的疾病约占44%。
[0006] 糖尿病分为1型和2型，2型糖尿病的主要特征是胰岛素抵抗，肝脏、骨骼肌、月旨 肪等靶组织对葡萄糖的摄取减少，造成血液中葡萄糖水平升高，形成高血糖。因此，提高胰 岛素效能，包括促进器官组织对葡萄糖的摄取成为2型糖尿病药物研宄重要的研宄课题。 HepG2细胞源于人肝胚胎瘤细胞，是分化较好的人肝癌细胞，仍有肝细胞的形态和功能。 HepG2细胞可以表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子的代谢反应，能全面模拟肝细胞对周 围环境中葡萄糖的摄入和消耗，因此检测南瓜花水提物干预下H印G2细胞的葡萄糖消耗， 探讨其对糖代谢的影响，可以评价南瓜花的降血糖作用，对防治糖尿病及其并发症有积极 意义。
[0007] 本发明以罗格列酮为阳性对照药，研宄南瓜花水提物的抗糖尿病功能，所得提取 物可作为辅助治疗糖尿病的药物或保健品进一步研宄开发。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种具有显著促进人肝癌 细胞（HepG2)的葡萄糖消耗活性从而达到降血糖效果的南瓜花提取物及其制备方法，为南 瓜花在药物制备或保健品方面的研宄开发提供新的用途。
[0009] 为了达到上述目的，本发明提供了一种南瓜花水提取物，以萌芦科南瓜的干燥花 为原料，通过加热回流提取方法制备得到。
[0010] 所述加热回流提取方法为采用蒸馏水作为溶剂进行提取，用量为6-10倍药材质 量体积，提取次数为1-3次，提取时间为1-3小时；提取液过滤，经减压浓缩、干燥，得到该水 提物。
[0011] 上述南瓜花水提物在一定浓度下可以显著促进人肝癌细胞（HepG2)的葡萄糖消 耗，在高糖状态下可促进细胞对葡萄糖的消耗量，在胰岛素刺激下对葡萄糖消耗量增加有 协同作用，提示南瓜花水提物具有降低血糖的活性，可以应用于制备抗糖尿病药物或保健 品。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0013] 实施例1 :南瓜花水提物A的制备
[0014] 南瓜花干燥样品100g，置于三角玻璃瓶中，加入10倍质量体积蒸馏水，水浴100°C 回流提取2次，每次2小时；提取液合并过滤，经旋转蒸发仪减压浓缩、回收溶剂，再经真空 干燥，得到南瓜花水提物粉末A。
[0015] 实施例2 :南瓜花水提物B的制备
[0016] 南瓜花干燥样品100g，置于三角玻璃瓶中，加入8倍质量体积蒸馏水，水浴100°C 回流提取3次，每次3小时；提取液合并过滤，经旋转蒸发仪减压浓缩、回收溶剂，再经真空 干燥，得到南瓜花水提物粉末B。
[0017] 实施例3 :南瓜花水提物C的制备
[0018] 南瓜花干燥样品100g，置于三角玻璃瓶中，加入6倍质量体积蒸馏水，水浴100°C 回流提取1次，提取1小时；提取液过滤，经旋转蒸发仪减压浓缩、回收溶剂，再经真空干燥， 得到南瓜花水提物粉末C。
[0019] 实施例4 :南瓜花水提物A、B、C的体外降血糖活性测定-HepG2葡萄糖消耗实验
[0020] 细胞株及培养：人肝癌细胞株H印G2购于中科院上海细胞所，接种于含10%小牛 血清的中高糖DMEM培养基中（含葡萄糖11. lmmol/L，补充青霉素、链霉素各100U/L)，置于 37°C含5%的细胞培养箱中培养。！fepG2细胞呈贴壁生长，0. 25%胰酶消化，每3天按1 :3 的比例传代1次，取对数生长期的细胞用于实验。试验时将细胞悬液以0. 5X IO4的密度接 种于96孔培养板中，置培养箱中培养使之形成单层贴壁细胞。
[0021] 实验方法：接种24h后细胞已完全贴壁形成单层细胞层，将细胞分为对照组（加或 不加胰岛素）、实施例1~3中的南瓜花水提物A，B和C组（0. 01mg/mL、0. lmg/mL)和阳性 药物组（罗格列酮，4Μ/πιυ，其中胰岛素浓度为lOyg/mL。在培养箱中孵育24h，将培养 液移出，用葡萄糖试剂盒测葡萄糖含量。用各组空白孔含糖量的平均值减去其余各孔的含 糖量，即是24h各孔细胞的葡萄糖消耗量。
[0022] 表1南瓜花水提物对H印G2细胞葡萄糖消耗的影响
[0023]
【主权项】
1. 一种南瓜花水提物，以药食两用植物南瓜的干燥花为原料，通过水加热回流提取方 法制备得到。
2. 根据权利要求1所述的南瓜花水提物，其特征在于：所述水加热回流提取方法为采 用蒸馏水作为溶剂进行提取，用量为6-10倍药材质量体积，提取次数为1-3次，提取时间为 1-3小时；提取液过滤，经减压浓缩、干燥，得到该南瓜花水提物。
3. 权利要求1所述的南瓜花水提物在治疗糖尿病方面的新用途在于：该提取物在一定 浓度下具有促进高糖状态下H印G2细胞葡萄糖消耗作用，对胰岛素刺激的H印G2细胞的葡 萄糖消耗量增加有协同作用，可以应用于制备抗糖尿病药物或保健品。
【专利摘要】本发明公开了一种南瓜花水提物在治疗糖尿病方面的新用途。该南瓜花水提物以药食两用植物南瓜的干燥花为原料，通过水加热回流提取方法制备得到。本发明制备的南瓜花水提物在一定浓度下具有促进高糖状态下HepG2细胞葡萄糖消耗作用，对胰岛素刺激的HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加有协同作用，可作为辅助治疗糖尿病的药物或保健品进一步研究开发。
【IPC分类】A61K36-42, A61K133-00, A61P3-10
【公开号】CN104814993
【申请号】CN201510245611
【发明人】赵建斌, 周如初, 李仁明, 赵燕梅, 赵正竹, 王年鹤, 张寒, 陈剑
【申请人】苏州神良生物科技有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月13日