5min后，冷却膏体至40°C，加入香精，搅勾脱气； (3) 继续缓慢搅拌至完全乳化形成膏体，冷凝即得含松果菊苷的高原防晒霜； (4) 将膏体分别装入包装容器，每盒20g。
[0016] 实施例2实施例1制备得到的高原防晒霜外观检查及含量测定 性状：本品为白色乳膏剂，细腻，粘稠度适宜，微有香气。
[0017] 含量测定： 1.试药和仪器 松果菊苷对照品(购置于中国药品生物制品检定所） BSA124S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司）；紫外-可见分光光度计 SPEC0RD-2000 (德国耶拿仪器股份公司）；微孔滤膜0. 45Mm (北京满仓科技有限公司） I. 1松果菊苷标准液的配制：精密称取经105°C干燥至衡重的松果菊苷对照品0. 02g， 置IOOmL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度（200mg/mL)。精密称取稀释液25mL，置IOOmL容 量瓶中，加水至刻度摇匀，备用（50mg/mL)。
[0018] 1. 2测定波长的选择：量取标准溶液适量，在200-700nm波长范围内扫描，结果显 示在334nm处有最大吸收。
[0019] 1.3空白基质溶液的制备：按处方工艺制备空白基质，精密量取25mL，置IOOmL容 量瓶中加水至刻度线，摇匀，在200-700nm波长范围内扫描，结构显示在334nm波长处无吸 收。可见，此法制备的基质溶液对测定无干扰。
[0020] 1. 4供试品溶液的制备：精密称取本品25mL，加水溶解并移置IOOmL容量瓶，稀释 至刻度，摇勾，即得（50 Pg/mL)。
[0021] 1. 5标准曲线的建立：精密量取上述标准溶液5、10、20、30、40、50mL，置50mL容 量瓶中，配成每ImL含5、10、20、30、40、50 yg系列溶液，过微孔滤膜过滤，于334 nm处 测定吸收度（A)。将浓度（C，yg/mL)与对应的A (吸光度）进行线性回归，得回归方程： A=0. 0115A+0. 2515 (r=0. 99936)，结果表明松果菊苷在5~50 μ g/mL范围内具有良好的线性 关系。
[0022] 1. 6测定方法 精密称取本品3批不同样品各20mg，加水溶解并移置IOOmL容量瓶，稀释至刻度，摇匀， 照分光光度法分别在334nm处测定吸收度，计算，结果显示各批样品中含松果菊苷的含量 分别为 98. 8%、98. 2%、99. 3%。
[0023] 实施例3 实施例1制备得到的高原防晒霜的药理活性研宄 下面通过具体的细胞和动物实验说明实施例1制备得到的高原防晒霜及其所含天然 产物松果菊苷的抗紫外线辐射能力。
[0024] 1.松果菊苷对UVB所致HaCaT细胞损伤的作用 1.1细胞：人永生化表皮细胞（HaCaT)(中国医学科学院基础医学研宄所细胞资源中 心，由第四军医大学西京医院皮肤科惠赠）； 1. 2材料及仪器：96孔培养板(丹麦NUNC公司），DMEM培养基、10% FBS(美国GIBCO公 司），四甲基偶氮唑盐（MTT)、二甲亚砜（DMS0)、碘化丙啶（PI)、胰酶(美国Sigma公司），超纯 水(美国 millipore 公司），PBS (Sigma 公司）； LDH试剂盒(南京建成A0202) SOD试剂盒(南京建成A001-1 )，CAT试剂盒(南京建成 A007)，GSH-Px试剂盒(南京建成A005)，MDA试剂盒(南京建成A003-1) BIO-RAD model 680酶标仪（日本BIO-RAD公司）;HF90型二氧化碳细胞培养箱(上海智 城分析仪器有限公司）；LEB-180L中波紫外线照射仪(美国路阳，深圳伟峰仪器仪表有限公 司）;ST_513紫外线测量仪(先驰光电股份有限公司）;CKX41SF电子显微镜（日本奥林巴斯株 式会社)。
[0025] 1. 3 实验方法 1. 3. 1细胞培养 将人的永生化角质形成细胞系HaCaT细胞在37 °C、5% 0)2条件下培养于细胞培养 箱中。待完全融合时用〇. 25%胰酶消化，用含10%胎牛血清的培养基调整细胞浓度至 I. 5X IO5个/ml，定量接种于96孔板上以及直径为IOnm的培养皿。将细胞分为6组(正常 组；松果菊苷组；UVB照射组；25 μ M松果菊苷+UVB组；50 μ M松果菊苷+UVB组；50 μ M松果 菊苷+UVB )组继续培养24 h。
[0026] L 3. 2给药及紫外线照射 HaCaT细胞生长至70 %融合时，弃去各孔培养基，将松果菊苷用无血清培养基配成浓 度为25、50、100 μ M的溶液，每孔加200 μ L，继续培养12h。给予300 mj/cm2 UVB照射，照射 前先弃去各孔细胞培养液，PBS清洗2遍后留少量PBS覆盖细胞，照射组距离辐照灯管20cm 照射30min，非照射组用锡纸包裹同样放在灯管下20 cm，然后弃覆盖液，换回常规培养液培 养 12h〇
[0027] 1. 3. 3 MTT法测定细胞增殖活性 在96孔板中将UVB照射后的各组细胞中每孔加入MTT溶液（5mg/ml)20 μ 1，37 °C，继 续孵育4h。终止培养后，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150 μ I DMS0,振荡IOminJi 结晶物充分溶解，选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度，记录结果。
[0028] L 3. 4细胞LDH含量检测 收集各孔的细胞培养液上清，按照试剂盒说明书的方法测定LDH。
[0029] L 3. 5细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量测定 细胞经消化，裂解，并按照试剂盒说明书的方法测定细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性和 MDA含量。
[0030] 1. 4统计学分析 以SPSS 18.0统计学软件对实验数据进行统计分析，数据均采用均数土标准差（X 土 s)表示，两组间比较采用?检验、多组间比较采用单因素方差分析，认为^〈 0.05为差异 有统计学意义。
[0031] L 5实验结果 1. 5. 1松果菊苷对UVB所致HaCaT细胞毒性的影响 经MTT和LDH检测（图1A、B)发现，单纯给药组细胞活性与空白对照组相比差异无显著 性（巧0. 05 )，说明松果菊苷对正常HaCaT细胞无毒性作用。而经UVB照射的细胞活性明显 低于空白对照组，差异有统计学意义（K0. 01 )，说明UVB可抑制HaCaT细胞活性。而松果菊 苷的加入可改善由UVB造成的细胞活性的降低（K0. 01)，并且这种作用呈现一定的浓度依 赖性。同时我们观察了各组细胞的形态变化（图1C)，通过对比发现，UVB照射可造成细胞皱 缩变圆，而加入松果菊苷的各组细胞的皱缩程度随着浓度的升高逐渐减弱。综上所述，松果 菊苷可一定程度上抑制UVB引起的细胞毒性，缓解由此造成的细胞损伤。
[0032] 1. 5. 2松果菊苷对细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量的影响 经检测（图2)发现，UVB照射可引起细胞内S0D、CAT、GSH-Px活性降低和MDA含量的增 高，与对照组相比差异有统计学意义（K0. 01);而与UVB组相比，给予HaCaT细胞不同浓度 的松果菊苷可以增加 SOD、CAT、GSH-Px活性，降低MDA含量，差异有统计学意义（K0. 05)。
[0033] 2本发明中的防晒霜对在模拟高原低压低氧环境下UVB所致小鼠皮肤损伤的作 用 2.1动物：Balb/c小鼠40只，5-8周，由第四军医大学动物实验中心提供，动物合格证 号：SCXK-(军）2007-007。
[0034] 2. 2材料及仪器：松果菊苷(成都曼思特生物科技有限公司，含量彡98%)，纳米氧 化锌(北京博宇高科新材料技术有限公司），甲氧基肉桂酸辛酯（成都思天德生物科技有限 公司)，硬脂酸(成都市科龙化工试剂厂)，单硬脂酸甘油酯(成都市联合化工试剂研宄所)，凡 士林(天津市风船化学试剂有限公司），三乙醇胺（天津市天力试剂有限公司），甘油（天津市 天力试剂有限公司），氮酮(砀山县胜龙精细化工有限公司），尼泊金乙酯（天津市福晨化学 试剂厂)，维生素 C (天津市天新精细化工开发中心)，戊巴比妥钠(北京普博斯生物科技有限 公司），硫化钠（四川新欣源化工有限公司）。
[0035] 临用前将所用制剂按照制备工艺制成霜剂。所制霜剂分为三种：（1)基质：不加入 任