一种中药蟾酥提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药蟾酥提取物及其制备方法，属于药品技术领域。
【背景技术】
[0002] 蟾酥是常用中药，早在汉代已有应用，《神农本草经》中记载为"味辛寒主那气，破 疙坚血，痈肿，阴疮，服之不患热病。"中医认为蟾酥性味为辛，温；有毒，归心经，具有解毒， 止痛，开窍醒神之功效。现代研宄表明蟾酥具有抗肿瘤、强心、升压等多种药理作用。特 别是对心血管领域及抗肿瘤领域的显著疗效，使得近年来中药蟾酥得到了广泛研宄和应 用，蟾酥化学成份主要有：①蟾蜍毒素类（bufotoxins)，包括蟾毒、蟾毒配基脂肪酸酯和蟾 毒配基硫酸酯等；②蟾毒配基类（bufogenins)，是蟾蜍毒素在加工炮制过程中的分解产 物，如脂蟾毒配基（resibufogenin)、华蟾毒精（cinobufagin)和蟾毒灵（bufalin)为蟾 酥的3种主要活性单体，并且在抗肿瘤及强心作用上以均以此类活性最强；③蟾毒色胺类 (bufotenines)，该类化合物均含有吲哚环，属蟾蜍加工炮制过程中分解产物的水溶性部 分，是具有一定生物活性的吲哚类生物碱；④其他化合物，蟾酥还含有氨基酸、有机酸、肾上 腺素、吗啡、多肽及多糖等。
[0003] 目前蟾酥提取物的常见提取方法：1、用一定浓度的乙醇加热回流提取、浓缩、干 燥；2、用一定浓度的乙醇加热回流提取后上硅胶柱，用有不同比例的机溶剂洗脱、收集洗脱 液、浓缩、干燥。按第1种方法回流提取，虽然操作简单，所得提取物的杂质多，有效成份（以 脂蟾毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵计）含量较低，很难满足载药量小的剂型的制剂要求；第 2中方法虽然能够得到含量较高成份或单体，可操作过程复杂，有机溶剂可能对环境产生污 染，所得到的各个单体中不可避免会存在有机溶剂的残留，制备成单体投料很难保证中药 各成份的协同作用。鉴于以上问题，本发明提出了一种蟾酥提取的新方法，应用低温提取降 低有效成份的降解和转化，在保留蟾酥原有有效成份基础上，尽量去除蛋白质及多糖等杂 质，能够较大限度的保留了蟾酥各成份间的协同作用，此法具有操作简单，所得提取物能保 留蟾酥的多种有效成份，且含量较高，不含有机溶剂残留等优点。用此方法提取的蟾酥提取 物保留原有功效的同时突破载药量的限制，适合制备成多种剂型，可较为广泛的应用。
【发明内容】
[0004] 本发明是提供一种操作简单，保留原有有效成份，转移率高，不含有机溶剂的蟾酥 提取物的制备方法，按此方法操作可直接干燥得到含蟾酥配基含量较高的提取物，以脂蟾 毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵总含量计可达35%以上。
[0005] 1.本发明所述的蟾酥提取物的制备方法包括以下步骤：
[0006] (1)蟾酥药材粉碎成中粉，加水研磨分散使过100目。
[0007] (2)将步骤（1)所得的含蟾酥的混悬液加乙醇至含醇量为60% -80%，药液在 2-10°C条件下低温冷藏提取；
[0008] (3)抽取步骤⑵的上清液加氯化钠盐析，在2-10°C条件下低温盐析12小时；
[0009] (4)吸取步骤（3)的上清液，减压浓缩至块状蟾酥提取物析出，50_75°C减压干燥； 或将步骤（3)的上清液减压浓缩至近干后真空干燥，再加入3-6倍量的乙醇重结晶。
[0010] 2、本发明的创新点
[0011] 2. 1蟾酥的提取方式：传统的用一定浓度的乙醇加热回流提取，提取药材的细度 要求为中粉或细粉，本发明改变为最细粉的冷藏提取，减少蟾酥各成份间的转化，减少提取 物中的杂质，同时降低能耗。
[0012] 2. 2蟾酥药材的粉碎方式：蟾酥粉碎过60目后加水4-10倍的水研磨分散，本发明 的蟾酥粉碎方法即非传统的直接粉碎也有别于通常的水飞操作，蟾酥加水研磨分散是蟾酥 提取的关键步骤，分散细度均对蟾酥的提取影响较大，本发明对分散细度进行了对比研宄。
[0013] 2. 3蟾酥提取物从浓缩液中的分离方式：蟾酥提取物在浓缩过程中能够聚集析 出，通过过筛的方式与浓缩液分离。蟾酥提取液中加入氯化钠后，除使蛋白质进一步沉淀除 去外，也增大了提取液的极性，通过浓缩回收乙醇使蟾酥提取物在浓缩过程中能够聚集析 出；对于由于药材研磨过细的提取物可干燥后加入3-6倍量的乙醇重结晶，也可得到含量 较高的提取物。
[0014] 3.本发明方法制备蟾酥提取物的试验摸索
[0015] 3. 1试验材料
[0016] 蟾酥：由临沂康宇中药饮片有限公司提供，产地山东。华蟾酥毒基对照品（批号： 110803-200605)，脂蟾毒配基（批号：110718-201108)均由中国药品生物制品检定所提供， 蟾毒灵（批号：131213)由成都普菲德生物技术有限公司提供。所用试剂中乙腈为色谱纯， 水为超纯水，其他为分析纯。
[0017] 3. 2试验仪器：
[0018] Agilent 1260高效液相色谱系统；色谱柱：ZORBAX SB-C18色谱柱 (4.6111111\25〇111111，54111)(48；[16111:公司）；1311011旋转蒸发仪（德国）；岛津詹1 20电子分析天 平（日本）。
[0019] 3. 3检验方法：
[0020] 药材检验：蟾毒灵对照品加甲醇配制成Iml中含蟾毒灵20 μ g的溶液，其它依照 《中国药典》2010年版蟾酥含量测定项下的方法检测。本发明提取物检验：样品制备：精密 称取25mg至25ml容量瓶中加甲醇适量超声处理30min，补足损失的重量，过滤，吸取续滤液 5ml至50ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得；其它同药材检测方法。
[0021] 3. 4提取条件的研宄：
[0022] 3. 4. 1原药材含量测定：蟾酥原药材经上述方法测定三种指标性成份的质量百分 含量（w/w):脂蟾毒配基2. 73%、华蟾酥毒基4. 87%、蟾毒灵2. 32%，
[0023] 3. 4. 2提取条件的单因素考察
[0024] 3. 4. 2. 1蟾酥加水研磨分散细度考察：蟾酥药材粉碎过60,取4份，每份IOg加水 5倍量用研钵研磨分散，分别使分散在60-80目；80-100目；100-200目以及200目以上， 得的不同粒度的蟾酥粉悬浊液，加乙醇至含醇量为70%，在2°C条件下冷藏24小时，取上 清液，加入1 %氯化钠，继续在上述温度下冷藏12小时，取上清液浓缩至固体析出物或浓缩 膏，干燥，得蟾酥提取物，按3. 3项下的方法测定各蟾酥提取物中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基 和蟾毒灵的含量见下表1 :
[0025] 表1 :不同粒度提取转移率考察表
【主权项】
1. 一种中药蟾酥提取物的制备方法，包括以下步骤： (1) 蟾酥药材粉碎成中粉，加水研磨分散使过100目； (2) 将步骤（1)所得的含蟾酥的混悬液加乙醇至含醇量为60% -80%，药液在2-10°C 条件下低温冷藏提取； (3) 抽取步骤（2)的上清液加氯化钠盐析，在2-10°C条件下低温盐析12小时； (4) 吸取步骤（3)的上清液，减压浓缩至块状蟾酥提取物析出，50-75°C减压干燥；或将 步骤（3)的上清液减压浓缩至近干后真空干燥，再加入3-6倍量的乙醇重结晶。
2. 根据权利要求1所述的蟾酥提取物的制备方法，其特征在于步骤（1)中蟾酥分散后 的细度应为100目以上。
3. 根据权利要求1所述的蟾酥提取物的制备方法，其特征在于步骤（2)中醇沉提取的 最佳时间为18-30小时，最长不可超过48小时；温度为2-10°C。
4. 根据权利要求1所述的蟾酥提取物的制备方法，其特征在于步骤（2)中，乙醇的浓度 控制在70% -80%，最低不得低于60%。
5. 根据权利要求1所述的蟾酥提取物的制备方法，其特征在于步骤（4)，所得提取物有 效成份较低时可重结晶提高有效成份的含量。
6. 根据权利要求1所述的蟾酥提取物的制备方法，其特征在于步骤（3)所得上清液也 可经硅胶柱分离，得到纯度更高的提取物或单体。
【专利摘要】本发明为一种中药蟾酥提取物及其制备方法，属药品技术领域。该提取物制备方法为：蟾酥药材粉碎成中粉，加4-10倍水研磨分散；加乙醇醇沉，低温冷藏；上清液加氯化钠低温盐析；减压浓缩至块状蟾酥提取物析出，减压干燥或浓缩至近干后真空干燥，加入乙醇重结晶，得到的蟾酥提取物含酯蟾毒配基、华蟾酥毒基及蟾毒灵三种蟾毒配基混合物的转移率约为80％，且三种蟾毒配基的重量百分比之和≥35％。该方法提取蟾酥转移率及有效成份含量高，无有机溶剂残留，操作简便，能耗低，产品质量易于控制，适合工业化生产。
【IPC分类】A61P9-04, A61K35-65, A61P35-00, A61P9-00, A61P9-02
【公开号】CN104840488
【申请号】CN201510242294
【发明人】周定君, 刘晓燕, 郭冠男, 赵文军
【申请人】内蒙古康恩贝药业有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月13日