用于治疗疾病的化合物的制作方法
【专利说明】用于治疗疾病的化合物
[0001] 本申请是申请日为2011年01月28日、国际申请号为PCT/AT2011/000050、发 明创造名称为"用于治疗疾病的化合物"的PCT申请进入中国国家阶段的中国申请号为 201180016552. 6的发明专利申请的分案申请。
[0002] 本发明涉及用于治疗与嗜酸性粒细胞过氧化物酶（eosinophil peroxidase)相关 的炎性疾病的化合物。
[0003] 人的过氧化物酶类是非特异性免疫防卫的一部分。在防卫病原性微生物时它们以 高浓度被释放出来，并且催化多种生物分子的氧化反应，由此使入侵者如细菌和病毒失活。 然而，由于这些蛋白质的过量生产，经常会存在对身体内组织的氧化性损伤，并导致炎症。
[0004] 因此，这些酶与许多文明史上重要疾病相关。这些被称为"自溶酶诱导"的疾病， 其中特别是身体内自身的蛋白质MP0(髓过氧化物酶）和EP0(嗜酸性粒细胞过氧化物酶； EC号：1. 11. 1. 7)与许多炎性疾病的致病机理相关（参见表1)。此外，乳（milk)中含有乳 过氧化物酶（LP0)，其具有抗微生物性和抗氧化性。
[0005] 表1 :"自溶酶诱导"的疾病的实例，在该疾病的病程中通过过量生产涉及过氧 化物酶（同样参见 Davies, MJ.et al.Antioxidants&Redox Signaling 10(2008) 1199 -1234)〇
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[0008] 因此，有利的是开发出针对MP0和EP0 (这类酶中最强效且最具侵略性的代表)的 特异性抑制剂，其中该抑制剂接着可以作为炎性疾病的新的药物和疗法的基础。
[0009] EP0被认为是许多疾病的主要成因，特别是慢性病程的支气管哮喘。作为耐受性好 的抑制剂，首次向慢性支气管哮喘提供了有效的治愈方法。类似地应用于多发性硬化、溃疡 性结肠炎、囊性纤维化和其他涉及EP0作为主要病因的炎性过程。这些严重的且在西方世 界高速增长的疾病更多地表现为慢性的过程，并且到目前为止其成功治疗仅非常有限。
[0010] 一旦嗜酸性粒细胞（白细胞，即白血球）受到刺激（即，病原性物质或寄生物渗透 侵入时，即感染时），就释放出身体内自身的蛋白质嗜酸性粒细胞过氧化物酶（EP0)。同时， 氧进入吞噬体的吸收在结合膜的NADHP-氧化酶-复合物处增加（"呼吸爆发"），由此释放 出大量的反应性氧物质（主要是超氧化物）。接着，这些物质歧化成过氧化氢（H 202)，并通 过嗜酸性粒细胞过氧化物酶还原成水（Mitra，SN.et al. Redox Report 5(2000)215-224)。
[0011] 通过该EP0/H202体系，一方面，酶的生理学作用发挥作用（防卫病原体），另一方 面，导致非特异性和特异性细胞损坏。
[0012] 非特异性组织损伤包括细胞/细胞壁的破坏，这是因为EP0由于其非常高的正电 荷（pl>ll)能够穿透细胞的脂质壁。因此，在EP0至靶向位置的路径上，破坏细胞以及组织， 并因此导致炎症。
[0013] 此外，嗜酸性粒细胞参与了变性原控制疾病如支气管哮喘的发病机理。支气管哮 喘是支气管粘膜的炎症或敏感性增加，其导致了气道变窄。这种临床表现基于经由细胞因 子如白介素5(IL 5)对一些防卫细胞（所谓的肥大细胞）的刺激。在哮喘的情况中，肥大 细胞和嗜酸性粒细胞被吸引至支气管区域。这些细胞释放出接触气道肌肉并刺激肺中粘液 产生的物质（主要是组胺）。该反应大部分发生地非常快，在与出发物质和/或应激接触后 的15至30分钟之内。稍后（在2至4小时内），炎性细胞（嗜酸性粒细胞）然后迀移进入 支气管壁，并在此因此慢性形式（炎症）。如果这些细胞受到刺激，那么它们释放出细胞毒 性的蛋白质，会引起多种哮喘的病理学特征：肺上皮组织的变性、上皮组织形貌的破坏、微 血管渗透性的增加和浮肿。但是，在慢性炎症期间，分子同样被释放出来，这涉及到组织的 "重建（remodelling) "（再生）。由此，被破坏的组织得以再生，并且防止了"非弹性"结缔 组织的累积。
[0014] 特异性细胞损坏是由大量的在EP0/H202的酶反应体系中生成的EP0的侵入性氧化 产物和扩散性自由基所造成。由于酶中间体（化合物I)具有非常的氧化还原势，EP0能够 氧化多种小分子。这些生理相关的酶底物包括亚硝酸根（NCV)、溴根（Bi〇以及伪卤化物 硫氰酸根（SCN0。接着分别形成了高度反应性物质，如二氧化氮自由基（N0 2.)、次溴酸根 r〇Br)以及次硫氰酸根（hypothiocyanate) C0SCN)或氰酸根C0CN)。此外，必须指出的是 EP0/H202体系的生物学结果是高度底物特异性的。因此，SC^T的生理学血清浓度高（或可 以有利地受营养物质影响）于阶_或勵 2_的生理学血清浓度。因此，例如，氧化产物_0SCN 活化了转录因子NF- k B，基本比N02.更强烈，并因此在MAP激酶体系中具有更强烈的促炎 症作用效果（Wang, J.et al. Arch Biochem Biophys 445(2006)256-260)。目前，这些高度 活性的反应产物起到被动免疫防卫的一部分的作用并攻击渗透入体内的大的寄生物，由此 它们实现了 EP0的生理学作用。
[0015] 另一方面，这些物质在非酶性反应中会攻击大的生物分子（如，脂质、蛋白质、 DNA、RNA)，其中这些生物分子的结构和/或官能性被改性。溴或硝基被整合，特别是在羟 基和氨基（溴-酪氨酸和硝基酪氨酸，溴醇（bromohydrines)，溴醛（bromoaldehydes)，溴 核苷酸（bromonucleotides),脂质过氧化物）处。这样，例如，在哮喘患者的痰中，可以 检测到 3_ 溴酪氨酸（生物标记）（Aldridge, CJ. et al. Free Radical Biology&Medicine 33(2002)6, 847-856) 〇
[0016] 在其他情况中，可以检测到慢性感染/炎症和癌症发病机理的重要一致性，这可 以归咎于DNA的氧化性损坏（例如埃及血吸虫（Schistosoma haematobium)和膀胱癌，或 者Opisthorcis vicerrini和胆管癌（cancer of the bile duct) (Mitra, SN. et al. Redox Report 5(2000)215-224)〇
[0017] 此外，EP0涉及到血管作用的、即血管舒张的物质一氧化氮（NO)的生物化学中， 一氧化氮（N0)在血管形成、血压调节、支气管扩张（如在新生儿中）以及其他生理现象中 起重要作用。认为N0被EP0化合物I和化合物II氧化，并且释放出N0+，与超氧化物反应 成过亚硝酸根（0N0CT)。接着，该高度反应性化合物（氧化性应激的标记）供给脂质和蛋 白质，由此硝基酪氨酸和脂质过氧化物形成。另一方面，通过捕获N0,这种重要的调节性 二原子信号分子不再可得，由此重要的生物功能（如递质）不再能实现，或者仅部分实现 (Abu-Soud, HM. et al. Biochem 40(2001) 11866-11875) 〇
[0018] 这类症状的发生证实了嗜酸性粒细胞过氧化物酶或其在反应产物（如溴化脂 质和蛋白质）处的"指纹"的血浆或组织浓度分别与疾病程度相关。嗜酸性粒细胞以及 嗜酸性粒细胞过氧化物酶可以存在于哮喘患者的血液、痰、支气管组织和支气管肺泡灌洗 (bronchoalveolar lavage)中，并且其目前作为哮喘的直接定量标记以及炎症的间接指示 剂和患者对哮喘治疗的应答。
[0019] W0 2008/121670记载了嘧啶基酰肼及其治疗支气管哮喘的用途。
[0020] W0 00/073280记载了儿茶素取代的腙及其治疗支气管哮喘的用途。
[0021] W0 2009/145360分别涉及苯基或噻吩衍生物，它们同样地可用于治疗支气管哮 喘。
[0022] W0 2004/080377记载了苯基酰肼，其适于调节细胞中的钾通道，由此可以主要治 疗如支气管哮喘等疾病。
[0023] US 2003/0225102和W0 2002/006224记载了被杂环取代基取代的酰肼。这些化合 物可以用来治疗支气管哮喘。
[0024] TO 2007/026215、TO 2005/123688、DE 10 2006 005 179、US 5, 571，846、EP 0 323 590、W0 01/032156、W0 2005/085185 和 US 4, 082, 846 记载了具有肼结构的化合物，其 适合用于治疗许多不同的疾病。
[0025] 本发明的一个目的是提供能够显著或完全抑制嗜酸性粒细胞过氧化物酶活性的 化合物。
[0026] 出人意料地，发现一些化合物如酰肼能够抑制嗜酸性粒细胞过氧化物酶的活性。 因此，本发明涉及通式（III)化合物：
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[0028] 其用于治疗和/或预防与嗜酸性粒细胞过氧化物酶相关的疾病、特别是炎性疾 病，其中，
[0029] R$CH2、NH、0、S或单键，
[0030] R2、R3、R4、馬和R6彼此独立地为H、0H、F、C1、&、I或C連C5烷基，和
[0031] &为H、0H、NH2、順_順2或CH3。
[0032] 本发明的另一方面涉及通式（I)的酰肼：
[0033]
[0034] 其用于治疗和/或预防与嗜酸性粒细胞过氧化物酶相关的疾病、特别是炎性疾 病，其中，根据本发明，Rx为杂环化合物（杂环残基），如吡啶、吲哚、吡唑或嘧啶，或芳香族 化合物（芳香族残基），如萘酚、苯或苯基氨基乙烷。
[0035] 对于本发明化合物的抑制活性，起电子受体作用的末端游离氨基是有利的。
[0036] 此外，然而，该化合物的立体化学性质和/或电化学性质也影响该化合物与EP0的 结合和/或酶反应。药典模型显示本发明物质必须具有多种基序（motif)(如，氢键供体、 氢键受体、芳香环/区域、疏水区域）。由此产生了以下的实例性结构，该结构还考虑了键长 和结构域（II):
[0037] 芳香环/疏水区域
[0038] 距禧电子受体
[0039]
(II)
[0040] 本发明化合物，其中特别优选苯基氨基乙烷酰肼（PAEH's)，及其衍生物对应于该 模型，其中在该情况中，苯环和酸酰肼基团之间的距离为2.65 A，见（Ilia):
[0041]
[0042] 取代基&为CH2、NH、0、S或单键，取代基R2、R3、R4、R#PR6彼此独立地为H、F、C1、 Br、I或（^至C5烷基，R7为H、0H、NH2、順-順2或CH3。
[0043] 在这种侵入性、破坏细胞的物质的产生中，嗜酸性粒细胞过氧化物酶，EP0,起重要 作用，如开始已经讨论的。这些过程，特别是涉及EP0的炎性过程，可以通过使用本发明的 物质得到抑制，从而与嗜酸性粒细胞过氧化物酶相关的疾病可以被治疗。
[0044] 根据本发明的化合物对于嗜