治疗性的拟肽大环化合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了用于治疗细胞增殖疾病如癌症和免疫增殖疾病的生物活性拟肽大环化合物。
【专利说明】治疗性的拟肽大环化合物
[0001] 本申请是申请日为2009年02月09日和发明名称为"治疗性的拟肽大环化合物" 的200980108027. X号发明专利申请的分案申请。
[0002]夺叉参考
[0003] 本申请要求2008年2月8日提交的美国临时申请61/027, 326和2008年12月5 日提交的美国临时申请61/120, 380的优先权，本文通过引用引入各该申请。
[0004] 发明背景
[0005] 不受控制的细胞增殖涉及从癌症到免疫增殖疾病的许多种疾病。例如，仅在美国， 癌症已超过心脏病成为大部分人口中死亡的首要原因（Journal of the National Cancer Institute,第97卷，第5期，2005年3月2日，第330页），并且每年造成死亡超过50万。 尽管几十年来这一领域进行了深入的研宄，但细胞增殖疾病的治疗仍是一个挑战。
[0006] 癌症的治疗方法（如手术或化学治疗）在效力、副作用特征（profile)和成本方 面仍然受到限制。特别是，现有治疗选择的效力和适用性对于特定类型的肿瘤和疾病差异 很大。因此，仍然需要治疗细胞增殖疾病和其他疾病的组合物和方法。
[0007] 发明概沐
[0008] 本发明满足了这个方面和其他方面的需要。本发明基于以下令人吃惊的发现提供 了组合物和治疗方法：当用于治疗细胞增殖疾病时，某些拟肽大环化合物（peptidomimetic macrocycle)表现出令人意外的特异性、效力和效能。
[0009] 在一个方面，本发明提供了治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患 者施用拟肽大环化合物，其中，所述癌症选自小细胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、肾 癌、乳腺癌、胰癌和Ph+急性淋巴细胞性白血病（Ph+ALL)。在一个实施方式中，拟肽大环 化合物包含a-螺旋。在另一个实施方式中，拟肽大环化合物包含BH3结构域。拟肽大 环化合物可以是，例如，BM多肽。在某些情况下，BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%，其中，*为栓系氨基酸（tethered amino acid)。或者，BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性 高于大约80%，其中，*为栓系氨基酸。此外，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸。在某些实施 方式中，如在体外细胞活性分析中所测量的，癌症对于使用对应的交联BID多肽的治疗的 敏感性至少低2倍。在其他的实施方式中，如在体外细胞活性分析中所测量的，癌症对于使 用对应的交联BID多肽的治疗的敏感性至少低5倍。在更其他的实施方式中，如在体外细 胞活性分析中所测量的，癌症对于使用对应的交联BID多肽的治疗的敏感性至少低8倍。
[0010] 在所选定的实施方式中，癌症为乳腺癌，例如，浸润性乳腺癌，如浸润性导管癌。或 者，癌症为前列腺癌。在其他的实施方式中，癌症为卵巢癌。在更其他的实施方式中，癌症 为胰癌。在进一步的实施方式中，癌症为肾癌。或者，癌症为Ph+急性淋巴细胞性白血病 (Ph+ALL)〇
[0011] 本发明还提供了治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大 环化合物，其中，癌症为结肠癌。在一个实施方式中，拟肽大环化合物包含a-螺旋。在另 一个实施方式中，拟肽大环化合物包含BH3结构域。拟肽大环化合物可以是，例如，BID多 肽。在某些情况下，BID多肽的氨基酸序列与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高 于大约60%，而且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。或者，BID多肽的氨基酸序列 与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约80%，其中，*为栓系氨基酸和Nle 为正亮氨酸。此外，所述BID多肽的氨基酸序列与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一 性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。在某些实施方式中，如在 体外细胞活性分析中所测量的，癌症对于使用对应的交联BIM多肽的治疗的敏感性至少低 2倍。在其他的实施方式中，如在体外细胞活性分析中所测量的，癌症对于使用对应的交联 BIM多肽的治疗的敏感性至少低5倍。在更其他的实施方式中，如在体外细胞活性分析中所 测量的，癌症对于使用对应的交联BIM多肽的治疗的敏感性至少低8倍。
[0012] 本发明还提供了治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大 环化合物，其中，当在针对源自所述癌症的细胞系的体外细胞活性分析中进行测试时，所述 拟肽大环化合物显示出低于大约5 y M的EC5tl。在某些实施方式中，EC5tl可能低于大约4 y M。 在其他的实施方式中，EC5tl可能低于大约3 y M。在更另外的实施方式中，EC 5(|可能低于大约 2 yM。在更另外的实施方式中，EC5tl可能低于大约Iy M。在某些实施方式中，体外分析在血 清的存在下进行。例如，所述分析可以在10%人血清中进行。在某些方面，癌症选自卵巢 癌、皮肤癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、胰癌、小细胞肺癌、结肠癌、多发性骨髓瘤、伯基特淋巴 瘤（Burkitt' s lymphoma)、T细胞谱系或B细胞谱系或混合谱系的急性淋巴细胞性白血病 (ALL)、慢性淋巴细胞性白血病（CLL)、皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL)、急性骨髓性白血病（AML)、 慢性骨髓性白血病和滤泡性淋巴瘤。
[0013] 在一个方面，本发明提供了治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者 施用拟肽大环化合物，其中，癌症选自卵巢癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、胰癌和Ph+急性淋 巴细胞性白血病。在一个实施方式中，拟肽大环化合物包含a-螺旋。在另一个实施方式 中，拟肽大环化合物包含BH3结构域。拟肽大环化合物可以是，例如，BIM多肽。在某些情况 下，BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%， 其中，*为栓系氨基酸。或者，BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR 的同一性高于大约80%，其中，*为栓系氨基酸。此外，所述BM多肽的氨基酸序列可以与 氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸。 [0014] 在某些实施方式中，癌症选自结肠癌、小细胞肺癌、肝癌、卵巢癌、皮肤癌、前列腺 癌、肾癌、乳腺癌、胰癌、神经胶质瘤、伯基特淋巴瘤、T细胞谱系或B细胞谱系或混合谱系的 急性淋巴细胞性白血病（ALL)、慢性淋巴细胞性白血病（CLL)、皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL)、 急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白血病和滤泡性淋巴瘤。在一个实施方式中，拟肽 大环化合物包含a-螺旋。在另一个实施方式中，拟肽大环化合物包含BH3结构域。拟 肽大环化合物可以是，例如，BID多肽。在某些情况下，BID多肽的氨基酸序列与序列 DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约60%，而且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正 亮氨酸。或者，BID多肽的氨基酸序列与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大 约80%，其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。此外，所述BID多肽的氨基酸序列与序 列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸和Nle为 正亮氨酸。
[0015] 本发明另外提供了治疗需要治疗的人类患者的病症的方法，包括向患者施用拟肽 大环化合物，该方法包括：a)通过在多肽的两个氨基酸残基之间引入交联制备拟肽大环化 合物；b)测试拟肽大环化合物是否存在免疫原性反应；和c)如果所述免疫原性反应不会 引起实质性的副作用，那么向患者施用拟肽大环化合物。非免疫原性可以在啮齿类动物 (如小鼠）、非人类灵长类动物或人类的体内分析中以最小抗体反应（minimal antibody response)加以证明。当向人类患者施用时，非免疫原性的化合物可能不会在患者中诱 导与其免疫原性有关的实质性的或最小的副作用。所述病症可能是，例如，癌症、代谢障 碍、心血管疾病、炎性疾病或变性疾病（degenerative disease)。在一个实施方式中，拟 肽大环化合物包含a-螺旋。在另一个实施方式中，拟肽大环化合物包含BH3结构域。 拟肽大环化合物可以是，例如，BID多肽。在某些情况下，BID多肽的氨基酸序列与序列 DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约60%，而且其中，*为栓系氨基酸和Nle为 正亮氨酸。或者，BID多肽的氨基酸序列与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于 大约80%，其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。此外，所述BID多肽的氨基酸序列 与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸和 Nle为正亮氨酸。拟肽大环化合物也可以是，例如，BM多肽。在某些情况下，BM多肽的 氨基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%，其中，*为栓 系氨基酸。或者，BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性 高于大约80%，其中，*为栓系氨基酸。此外，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸。
[0016] 在另一个方面，本发明提供了治疗需要治疗的人类患者的免疫增殖疾病的方法， 包括向患者施用拟肽大环化合物。在体外hPBL BrdU掺入分析（BrdU incorporation assay)中，拟肽大环化合物可以减少活化hPBL的增殖超过大约5 %、10 %、20 %、30 %、40 % 或50 %。免疫增殖疾病可能是，例如，淋巴增殖疾病或自身免疫性疾病，例如，系统性红斑 狼疮。拟肽大环化合物可以是，例如，BID多肽。在某些情况下，BID多肽的氨基酸序列与 序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约60%，而且其中，*为栓系氨基酸和Nle 为正亮氨酸。或者，BID多肽的氨基酸序列与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高 于大约80%，其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。此外，所述BID多肽的氨基酸序列 与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸和 Nle为正亮氨酸。拟肽大环化合物也可以是，例如，BM多肽。在某些情况下，BM多肽的氨 基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%-致，其中，*为 栓系氨基酸。或者，BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一 性高于大约80%，其中，*为栓系氨基酸。此外，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性可以高于大约95%，其中，*为栓系氨基酸。
[0017] 对于上述公开的任何拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物中的a -碳原子可能 另外被式R-的独立取代基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯基、炔基、 芳基烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基。在某些实施方式中，交联剂与其连接的a-碳 原子另外被式R-的取代基取代。在其他的实施方式中，交联剂未与其连接的碳原子另 外被式R-的取代基取代。或者，拟肽大环化合物中的两个a-碳原子另外被式R-的独立 取代基取代。在某些实施方式中，交联剂与其连接的两个a-碳原子另外被式R-的独立取 代基取代。在其他的实施方式中，交联剂未与其连接的两个a_碳原子另外被式R-的独 立取代基取代。R-可能是，例如，烷基，如甲基、乙基、丙基或异丙基。交联剂可以连接两个 a-碳原子。在某些实施方式中，R-与交联剂的任何部分一起形成环状结构。在其他的实 施方式中，交联剂由连续的碳碳键形成。在更另外的实施方式中，交联剂包含大约6、7、8、 9、10、11、12或13个连续的键。在更其他的实施方式中，交联剂包含至少大约5、6、7、8或9 个碳原子。
[0018] 本发明还提供了治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大 环化合物，其中，所述拟肽大环化合物与Mcl-I相互作用。在某些实施方式中，拟肽大环化 合物诘抗Mcl-I与促凋亡蛋白（如Bid、Bim、Bax或Bak)之间的相互作用。在其他的实施 方式中，本发明的拟肽大环化合物用于治疗人类患者的癌症，其中，所述癌症对ABT-737或 其类似物具有抗性，或对于具有大于1、2、5或10 y M的对Mcl-I的亲和力的化合物具有抗 性。
[0019] 本发明进一步提供了治疗需要治疗的人类患者的ABT-737抗性小细胞肺癌的方 法，包括向患者施用拟肽大环化合物，其中拟肽大环化合物包含BH3结构域。本发明还提供 了治疗需要治疗的人类患者的前列腺癌的方法，包括向患者施用拟肽大环化合物，其中，拟 肽大环化合物包含BH3结构域。
[0020] 在本文所述的任何治疗方法中，拟肽大环化合物与标准的治疗方法结合施用。标 准的治疗方法可以是，例如，化学疗法。或者，标准的治疗方法可以是放射疗法。在进一步 的实施方式中，标准的治疗方法是手术。
[0021] 具体地，本发明涉及以下各项：
[0022] 1. 一种治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大环化合 物，其中，所述癌症选自卵巢癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、胰癌和Ph+急性淋巴细胞性白血 病。
[0023] 2.根据第1项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a _螺旋。
[0024] 3.根据第1项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0025] 4.根据第1项的方法，其中，所述拟肽大环化合是BM多肽。
[0026] 5.根据第4项的方法，其中，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0027] 6.根据第4项的方法，其中，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0028] 7.根据第4项的方法，其中，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0029] 8.根据第1项的方法，其中，所述癌症为乳腺癌。
[0030] 9.根据第8项的方法，其中，所述乳腺癌是浸润性乳腺癌。
[0031] 10.根据第9项的方法，其中，所述浸润性乳腺癌是浸润性导管癌。
[0032] 11.根据第1项的方法，其中，所述癌症为前列腺癌。
[0033] 12.根据第1项的方法，其中，所述癌症为卵巢癌。
[0034] 13.根据第1项的方法，其中，所述癌症为胰癌。
[0035] 14.根据第1项的方法，其中，所述癌症为肾癌。
[0036] 15.根据第1项的方法，其中，所述癌症为白血病。
[0037] 16.根据第1项的方法，其中，所述癌症为Ph+急性淋巴细胞性白血病。
[0038] 17. -种治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大环化合 物，其中，所述癌症为结肠癌。
[0039] 18.根据第17项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a -螺旋。
[0040] 19.根据第17项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0041] 20.根据第19项的方法，其中，所述拟肽大环化合物是BID多肽。
[0042] 21.根据第20项的方法，其中，所述BID多肽的氨基酸序列与序列 DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮 氨酸。
[0043] 22.根据第20项的方法，其中，所述BID多肽的氨基酸序列与序列 DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮 氨酸。
[0044] 23.根据第20项的方法，其中，所述BID多肽的氨基酸序列与序列 DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮 氨酸。
[0045] 24. -种治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大环化合 物，其中，当在针对源自所述癌症的细胞系的体外细胞活性分析中进行测试时，所述拟肽大 环化合物显示低于5 y M的EC5tl。
[0046] 25.根据第24项的方法，其中，EC5tl低于3 yM。
[0047] 26.根据第24项的方法，其中，所述癌症选自卵巢癌、皮肤癌、前列腺癌、肾癌、乳 腺癌、胰癌、小细胞肺癌、结肠癌、肝癌、多发性骨髓瘤、伯基特淋巴瘤、T细胞谱系或B细胞 谱系或混合谱系的急性淋巴细胞性白血病（ALL)、慢性淋巴细胞性白血病（CLL)、皮肤T细 胞淋巴瘤（CTCL)、急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白血病和滤泡性淋巴瘤。
[0048] 27.根据第26项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a -螺旋。
[0049] 28.根据第26项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0050] 29.根据第26项的方法，其中，所述拟肽大环化合物是BM多肽。
[0051] 30.根据第29项的方法，其中，所述BM多肽与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0052] 31.根据第29项的方法，其中，所述BM多肽与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0053] 32.根据第29项的方法，其中，所述BM多肽与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0054] 33.根据第24项的方法，其中，所述癌症选自结肠癌、小细胞肺癌、肝癌、卵巢癌、 皮肤癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、胰癌、多发性骨髓瘤、伯基特淋巴瘤、T细胞谱系或B细胞 谱系或混合谱系的急性淋巴细胞性白血病（ALL)、慢性淋巴细胞性白血病（CLL)、皮肤T细 胞淋巴瘤（CTCL)、急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白血病和滤泡性淋巴瘤。
[0055] 34.根据第33项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a -螺旋。
[0056] 35.根据第33项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0057] 36.根据第33项的方法，其中，所述拟肽大环化合物是BID多肽。
[0058] 37.根据第36项的方法，其中，所述BID多肽与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的 同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。
[0059] 38.根据第36项的方法，其中，所述BID多肽与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的 同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。
[0060] 39.根据第36项的方法，其中，所述BID多肽与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的 同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。
[0061] 40. -种治疗需要治疗的人类患者的病症的方法，包括：
[0062] a)通过在多肽的两个氨基酸残基之间引入交联制备拟肽大环化合物；
[0063] b)测试该拟肽大环化合物是否存在免疫原性反应；和
[0064] c)如果所述免疫原性反应不引起实质性的副作用，那么向患者施用该拟肽大环化 合物。
[0065] 41.根据第40项的方法，其中，所述免疫原性反应由啮齿类动物的体内分析中的 最小抗体反应证明。
[0066] 42.根据第40项的方法，其中，所述病症是癌症。
[0067] 43.根据第40项的方法，其中，所述病症是代谢障碍。
[0068] 44.根据第40项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a -螺旋。
[0069] 45.根据第40项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0070] 46. -种治疗需要治疗的人类患者的免疫增殖疾病的方法，包括向患者施用拟肽 大环化合物。
[0071] 47.根据第46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a -螺旋。
[0072] 48.根据第46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0073] 49.根据第46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物是BID多肽。
[0074] 50.根据第49项的方法，其中，所述BID多肽与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的 同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。
[0075] 51.根据第49项的方法，其中，所述BID多肽与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的 同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。
[0076] 52.根据第49项的方法，其中，所述BID多肽与序列DIIRNIARHLA*VGD*NleDRSI的 同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸和Nle为正亮氨酸。
[0077] 53.根据第46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物是BM多肽。
[0078] 54.根据第53项的方法，其中，所述BM多肽与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0079] 55.根据第53项的方法，其中，所述BM多肽与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0080] 56.根据第53项的方法，其中，所述BM多肽与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸。
[0081] 57.根据第46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物减少活化hPBL的增殖。
[0082] 58.根据第57项的方法，其中，在体外BrdU掺入分析中，所述拟肽大环化合物减少 活化hPBL的增殖超过20 %。
[0083] 59.根据第46项的方法，其中，所述免疫增殖疾病是淋巴增殖疾病。
[0084] 60.根据第1、17、24、40或46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物中的a -碳原 子另外被式R-的独立取代基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯基、炔 基、芳基烧基、环烧基烧基、杂烧基或杂环烧基。
[0085] 61.根据第60项的方法，其中，交联剂与其连接的a-碳原子另外被式R-的取代 基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂 烧基或杂环烧基。
[0086] 62.根据第60项的方法，其中，交联剂未与其连接的a -碳原子另外被式R-的取 代基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、 杂烧基或杂环烧基。
[0087] 63.根据第1、17、24、40或46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物中的两个 a _碳原子另外被式R-的独立取代基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯 基、块基、芳基烧基、环烧基烧基、杂烧基或杂环烧基。
[0088] 64.根据第63项的方法，其中，交联剂与其连接的两个a -碳原子另外被式R-的 独立取代基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯基、炔基、芳基烷基、环烷 基烧基、杂烧基或杂环烧基。
[0089] 65.根据第63项的方法，其中，交联剂未与其连接的两个a-碳原子另外被式 R-的独立取代基取代，其中，R-为未取代的或被卤素取代的烷基、链烯基、炔基、芳基烷基、 环烧基烧基、杂烧基或杂环烧基。
[0090] 66.根据第60或63项的方法，其中，R-是烷基。
[0091] 67.根据第60或63项的方法，其中，R-是甲基。
[0092] 68.根据第60或63项的方法，其中，所述交联剂连接两个a-碳原子。
[0093] 69.根据第60或63项的方法，其中，R-与交联剂的任何部分一起形成环状结构。
[0094] 70.根据第60或63项的方法，其中，所述交联剂由连续的碳碳键形成。
[0095] 71.根据第60或63项的方法，其中，所述交联剂包含大约9个连续的键。
[0096] 72.根据第60或63项的方法，其中，所述交联剂包含大约12个连续的键。
[0097] 73.根据第60或63项的方法，其中，所述交联剂包括至少大约6个碳原子。
[0098] 74.根据第60或63项的方法，其中，所述交联剂包括至少大约9个碳原子。
[0099] 75.根据第1、17、24、40或46项的方法，其中，拟肽大环化合物与标准的治疗方法 结合施用。
[0100] 76.根据第75项的方法，其中，所述标准的治疗方法是化学疗法。
[0101] 77.根据第75项的方法，其中，所述标准的治疗方法是放射疗法。
[0102] 78.根据第75项的方法，其中，所述标准的治疗方法是手术。
[0103] 79.根据第1、17、24、40或46项的方法，其中，所述拟肽大环化合物是细胞渗透性 的。
[0104] 80.根据第24项的方法，其中，所述分析在存在10%血清的情况下进行。
[0105] 81.根据第80项的方法，其中，所述血清是人血清。
[0106] 82.根据第24项的方法，其中，所述拟肽大环化合物对于Mcl-I具有小于10yM的 亲和力。
[0107] 83.根据第82项的方法，其中，所述拟肽大环化合物拮抗Mcl-I和促凋亡蛋白之间 的相互作用。
[0108] 84.根据第24项的方法，其中，所述癌症对于具有大于IOyM的对Mcl-I的亲和力 的化合物具有抗性。
[0109] 85.根据第84项的方法，其中，所述癌症对于ABT-737或其类似物具有抗性。
[0110] 86. -种治疗需要治疗的人类患者中的ABT-737抗性小细胞肺癌的方法，包括向 所述患者施用拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0111] 87. -种治疗需要治疗的人类患者的前列腺癌的方法，包括向所述患者施用拟肽 大环化合物，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
[0112] 通讨引用引入
[0113] 本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用方式结合在本文中， 就好像各个单独的出版物、专利或专利申请明确地和单独地表明通过引用结合在本文中一 样。
[0114] 附图简沐
[0115] 在所附的权利要求书中详细地阐明了本发明的新特征。通过参考下面的阐述利用 本发明原理的说明性实施方式的详细说明和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好 的理解，附图中：
[0116] 图1显示24种不同的肿瘤细胞系对于用20 UM的SP-I治疗的敏感性。
[0117] 图2显示7种人类白血病/淋巴瘤细胞系对于用5 yM的SP-I或SP-4治疗的敏 感性。
[0118] 图3显示12种人类实体瘤细胞系对于用20 y M的SP-I或SP-4治疗的敏感性。
[0119] 图4显示SP-I或SP-4对于多种细胞系进行测试的EC5tl曲线。
[0120] 图5-15描述SP-l、SP-2、SP-3、SP-4、SP-5和SP-6对于几种单独的细胞系进行测 试的EC 5tl曲线。
[0121] 图16表明SP-I没有诱导静息的人类外周血淋巴细胞（hPBL)的程序性细胞死亡。
[0122] 图17举例说明SP-I在阻止由PMA+离子霉素（ionomycin)+LPS处理活化的hPBL 的增殖方面与雷帕霉素一样有效。
[0123] 图18和19表明，SP-I在SEMK2人白血病异种移植模型中减少肿瘤负荷。
[0124] 图20显示SP-I没有在啮齿类动物中引发抗体反应。
[0125] 图21说明SP-I非常稳定，并在温度升高达64°C时保持其螺旋构象。
[0126] 图22描述本发明的一系列拟肽大环化合物的人血浆稳定性。
[0127] 图23描述本发明的一系列拟肽大环化合物的小鼠血浆稳定性。
[0128] 图24显示在大鼠中表现的SP-I和SP-4的药代动力学性质。
[0129] 图25描述了本发明的拟肽大环化合物在缺乏人血清的情况下在Jurkat肿瘤细胞 中诱导程序性细胞死亡，并比较了本发明的BH3拟肽大环化合物与BCL-2/BCL-XL-特异性 拮抗剂（如ABT-737)的效能。
[0130] 图26描述了在存在10%人血清的情况下本发明的拟肽大环化合物在Jurkat肿瘤 细胞中诱导程序性细胞死亡，并比较了本发明的BH3拟肽大环化合物与BCL-2/BCL-XL-特 异性拮抗剂（如ABT-737)的效能。
[0131] 图27比较本发明的几种BH3拟肽大环化合物与ABT-737对于Bcl-Xp Bcl-2和 Mcl-I的结合亲和力。
[0132] 图28显示拟肽大环化合物对于许多种恶性血液病的效力。
[0133] 图29说明对本发明组合物的治疗敏感的细胞系的不同的Bcl-2家族蛋白表达谱。
[0134] 图30比较了拟肽大环化合物与ABT-737在Raji (ABT-737抗性的伯基特淋巴瘤细 胞株）的效力。
[0135] 图31说明BH3拟肽大环化合物对于多种实体瘤细胞系的效力。
[0136] 图32描述了本发明的拟肽大环化合物在ABT-737抗性的小细胞肺癌细胞系 (NCI-H82)中诱导程序性细胞死亡。
[0137] 图33显示本发明的化合物对NOD-SCID小鼠中SEMK-2肿瘤进展的抑制。
[0138] 图34描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的卵巢肿瘤细胞系 (0VCAR8)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0139] 图35描绘本发明的拟肽大环化合物在2%人血清存在下处理的卵巢肿瘤细胞系 (0VCAR8)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0140] 图36描绘本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的黑素瘤细胞系（A375) 中对程序性细胞死亡的诱导。
[0141] 图37描绘本发明的拟肽大环化合物在2%人血清存在下处理的黑素瘤细胞系 (A375)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0142] 图38描绘本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的乳腺肿瘤细胞系 (MDA-MD-231-Met)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0143] 图39描绘本发明的拟肽大环化合物在2 %人血清中处理的乳腺肿瘤细胞系 (MDA-MD-231-Met)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0144] 图40描绘本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的前列腺肿瘤细胞系 (PC3)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0145] 图41描绘本发明的拟肽大环化合物在2%人血清中处理的前列腺肿瘤细胞系 (PC3)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0146] 图42描绘本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的小细胞肺癌细胞系 (NCI-H-82)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0147] 图43描绘了显示在对于本发明的拟肽大环化合物敏感的癌症中各种BCL-家族蛋 白的变化的表达的蛋白质印迹分析（Western Blot)。
[0148] 图44描绘在前列腺癌原位异种移植模型中小鼠治疗的时间表（timeline)。
[0149] 图45描绘本发明的拟肽大环化合物在前列腺癌原位异种移植模型中的效力。
[0150] 图46描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的T细胞白血病细胞系 (Jurkat)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0151] 图47描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的混合谱系T/B-细胞白 血病细胞系（SEMK2)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0152] 图48描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的T-细胞白血病细胞系 (M0LT-4)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0153] 图49描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的弥漫性大B细胞淋巴 瘤细胞系（DHL-6)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0154] 图50描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的混合谱系T/B-细胞白 血病细胞系（RS4;11)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0155] 图51描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的伯基特淋巴瘤细胞系 (Raji)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0156] 图52描述本发明的拟肽大环化合物在无血清条件下处理的多发性骨髓瘤细胞系 (MMlS)中对程序性细胞死亡的诱导。
[0157] 图53描绘了按照治疗的动物中减少的肿瘤负荷所计量的本发明的拟肽大环化合 物在SEMK2白血病原位异种移植模型中的效力。
[0158] 图54描绘了按照治疗的动物中减少的肿瘤负荷所计量的本发明的拟肽大环化合 物在SEMK2白血病原位异种移植模型中的效力。
[0159] 图55描绘了按照治疗动物的提高的存活率所计量的本发明的拟肽大环化合物在 SEMK2白血病原位异种移植模型中的效力。
[0160] 图56显示了如用装订的（stapled) SP-4肽的免疫沉淀所表明的，本发明的拟肽大 环化合物对于多发性骨髓瘤（MMlS)细胞裂解液中的促凋亡靶蛋白BAX的序列特异性和结 构特异性的结合。
[0161] 发明详沐
[0162] 如本文所用的，术语"治疗"（"treating〃和"to treat")意思是暂时或永久地减 轻症状、消除病因，或防止或减缓症状的出现。术语"治疗"（"treatment")包括缓解、消除 病因（临时或永久），或防止与任何状况相关的症状和疾病。治疗可以是预处理，以及症状 出现时的治疗。
[0163] 术语"标准的治疗方法"是指作为对于特定适应症的治疗标准的一部分的任何治 疗性的或诊断性的方法、化合物或措施。"治疗标准"可以由任何权威机构（例如健康护理 提供者或国家性或地区性的研宄所）针对临床医生对于特定类型的患者、疾病或临床情况 应该遵循的任何诊断或治疗过程来建立。对于各种癌症的示例性的治疗方法标准由例如美 国国家癌症研宄所提供。
[0164] 如本文所用，术语"细胞增殖疾病"包括癌症、过度增殖疾病、肿瘤疾病、免疫增殖 疾病和其他疾病。"细胞增殖疾病"涉及，具有自发生长能力的细胞，即，以快速增殖的细胞 生长为特征的异常状态或状况。过度增殖和肿瘤疾病状态可划分为病理性的，即表现为或 构成疾病状态，或可划分为非病理性的，即偏尚正常状态但与疾病状态无关。该术语意思是 包括癌性生长或致癌过程、转移性的组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而无论其组织病 理类型或侵袭阶段。转移性的肿瘤可以由许多原发肿瘤类型引起，包括但不限于乳腺癌、肺 癌、肝癌、结肠癌和卵巢癌起源的类型。"病理性过度增殖的"细胞发生于以恶性肿瘤生长和 免疫增殖疾病为特征的疾病状态中。非病理性过度增殖细胞的例子包括与创伤修复相关的 细胞的增殖。细胞增殖和/或分化疾病的例子包括癌症，如癌瘤、肉瘤或转移性疾病。
[0165] 用于描述细胞系和相关的癌症之间的关系的术语"源自"表示，该细胞系可以由特 定大类癌症中的任何癌症建立。
[0166] 如本文所用，术语"大环化合物"指具有包含由至少9个共价键合的原子形成的环 或环形的化学结构的分子。
[0167] 如本文所用，术语"拟肽大环化合物"、"交联的多肽"或"装订的肽"指包含通过多 个肽键连接的多个氨基酸残基和至少一个形成大环的连接体的化合物，所述连接体在第一 天然存在的或非天然存在的氨基酸残基（或类似物）与同一分子中的第二天然存在的或非 天然存在的氨基酸残基（或类似物）之间形成大环。拟肽大环化合物包括其中形成大环的 连接体连接第一氨基酸残基（或类似物）的a碳和第二氨基酸残基（或类似物）的a碳 的实施方式：。拟肽大环化合物任选地包含在一个或多个氨基酸残基和/或氨基酸类似物 残基之间的一个或多个非肽键，且除了形成大环化合物的任意残基外，还任选地包含一个 或多个非天然存在的氨基酸残基或氨基酸类似物残基。
[0168] 如本文所用，术语"稳定性"指如通过圆二色光谱、NMR或另一种生物物理测量法 测量的本发明的拟肽大环化合物在溶液中维持特定的二级结构，或对体外或体内蛋白水解 降解作用具有抗性。本发明所预期的二级结构的非限制性的例子是a-螺旋、￠-转角和 0 _ 折叠片（pleated sheet) 〇
[0169] 如本文所用，术语"螺旋稳定性"指如通过圆二色光谱或NMR测量的本发明的拟肽 大环维持a-螺旋结构。例如，在某些实施方式中，本发明的拟肽大环化合物相比于对应的 非交联的多肽，如通过圆二色光谱测定的在a -螺旋度方面显示至少1. 25、1. 5、1. 75或2 倍的增加。
[0170] 术语" a -氨基酸"或简称为"氨基酸"指含有结合到被称为a -碳的碳上的氨基 和羧基的分子。合适的氨基酸包括但不限于天然存在的氨基酸的D-和L-异构体以及通过 有机合成或其他代谢途径制备的非天然存在的氨基酸。除非上下文特别地指出，本文所用 的术语氨基酸包括氨基酸类似物。
[0171] 术语"天然存在的氨基酸"指自然界合成的肽中通常发现的20种氨基酸中的任一 种，单字母缩写表示为 A、R、N、C、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y 和 V。
[0172] 术语"氨基酸类似物"或"非天然氨基酸"指其结构上类似于氨基酸，且在形成拟 肽大环化合物时可代替氨基酸的分子。如本文所定义的，氨基酸类似物包括但不限于在结 构上与此处所定义的氨基酸相同的化合物，除了在氨基和羧基之间包括一个或多个额外的 亚甲基基团（例如，a-氨基0-羧酸）或以类似反应性的基团取代氨基或羧基（例如，用 仲胺或叔胺取代伯胺，或用酯取代羧基）以外。
[0173] "非关键"氨基酸残基是可从多肽的野生型序列（例如，BH3结构域或p53MDM2结 合结构域）发生改变而不消除或实质改变其基本的生物学或生物化学活性（例如，受体结 合或活化）的残基。"关键"氨基酸残基是，当从多肽的野生型序列发生改变时，导致消除或 基本消除多肽的主要生物学或生物化学活性的残基。
[0174] "保守氨基酸取代"是其中氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替代的取代。 现有技术已定义了具有类似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基 酸（例如，K、R、H)、具有酸性侧链的氨基酸（例如，D、E)、具有不带电的极性侧链的氨基酸 (例如，G、N、Q、S、T、Y、C)、具有非极性侧链的氨基酸（例如，A、V、L、I、P、F、M、W)、具有0 分支的侧链的氨基酸（例如，T、V、I)和具有芳香族侧链的氨基酸（例如，Y、F、W、H)。因 此，例如，BH3多肽中预测的非关键氨基酸残基优选被来自同一侧链家族的另一种氨基酸残 基所替代。可接受的取代的其他例子是基于电子等排考虑（例如，正亮氨酸取代甲硫氨酸） 或其他性质（如2-噻吩丙氨酸取代苯丙氨酸）的取代。
[0175] 如本文中使用的与大环化合物或形成大环的连接体相关的术语"元"是指形成 或可以形成大环化合物的原子，并且取代基或侧链原子除外。以此类推，环癸烷、1，2-二 氟-环癸烷和1，3-二甲基-环癸烷都被认为是十元大环化合物，因为氢或氟取代基或甲基 侧链没有参与形成大环。
【权利要求】
1. 一种治疗需要治疗的人类患者的癌症的方法，包括向患者施用拟肽大环化合物，其 中，所述癌症选自卵巢癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、胰癌和Ph+急性淋巴细胞性白血病。
2. 根据权利要求1的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含a -螺旋。
3. 根据权利要求1的方法，其中，所述拟肽大环化合物包含BH3结构域。
4. 根据权利要求1的方法，其中，所述拟肽大环化合是BIM多肽。
5. 根据权利要求4的方法，其中，所述BIM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约60%，且其中，*为栓系氨基酸。
6. 根据权利要求4的方法，其中，所述BM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约80%，且其中，*为栓系氨基酸。
7. 根据权利要求4的方法，其中，所述BIM多肽的氨基酸序列与氨基酸序列 IWIAQELR*I⑶*FNAYYARR的同一性高于大约95%，且其中，*为栓系氨基酸。
8. 根据权利要求1的方法，其中，所述癌症为乳腺癌。
9. 根据权利要求8的方法，其中，所述乳腺癌是浸润性乳腺癌。
10. 根据权利要求9的方法，其中，所述浸润性乳腺癌是浸润性导管癌。
【文档编号】A61K38/16GK104474529SQ201410541607
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2009年2月9日 优先权日:2008年2月8日
【发明者】H·M·纳什, D·A·安妮斯, R·卡佩勒-利伯曼, T·K·索耶, N·卡瓦哈塔, 韩佳文 申请人:爱勒让治疗公司