一种海洋肽类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，具体的说是一种海洋肽类化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 放线菌是一类最重要的药源微生物。100年来，放线菌资源的研究和开发利用取得 了极其辉煌的成就。从放线菌发现的生物活性物质大约有12000种，占整个天然生物活性 物质的50%左右，其中从链霉菌一个属就发现近万种。目前临床和农业上使用的150多种 抗生素中，有100至120种是由放线菌产生的。（文献l:Jdinos B6rdy. Bioactive microbial metabolites, a personal review. J Antibiot. 2005, 58 (1):1-26.)
[0003] 海洋生态环境的特殊性造就了巨大的生物多样性和独特的化学多样性，由此而形 成的次生代谢产物复杂独特的结构及其特异高效的活性，使得海洋生物资源已成为创新药 物发现的重要源泉，海洋已经成为发现新种甚至新属微生物的重要场所，并且是新颖生物 活性物质的新来源。美国哥伦比亚大学斯克里普斯海洋研究所海洋生物技术与生物药物研 究中心的Fenicial等2005年报道了第一株专性海洋放线菌，为一个新属Salinispora属。 同时，对100多株Salinispora属的放线菌进行了生物活性评估，发现80%具有抑制人体 肿瘤细胞的生长的作用，35%对人类病原体耐药菌具有抑制作用。并成功的从S.tropica CNB-392的发酵液中分离到了一个新颖结构的潜在的抗肿瘤药物salinisporamideA。 salinisporamideA与蛋白酶抑制剂omuralide结构相似，但是抑制20S蛋白酶的活性是 后者的35倍（IC5(]= 1.3nM)，目前已经作为抗多发性骨髓瘤药物进入I期临床阶段（文 献 2 :Fenical,W. &Jensen,P.R.Developinganewresourcefordrugdiscovery:marine actinomycetebacteria.Nat.Chem.Biol. 2006 (2) : 666-673.)。因此，海洋放线菌是新颖的 活性先导化合物的新的重要来源。
[0004] 二酮哌嗪类化合物（DKPs)的基本结构是由两个氨基酸缩合而成的环二肽， 因其骨架具有稳定的六元环结构，且有两个氢键给体和两个氢键受体，使得DKPs具有 广泛而显著的生物活性和药理活性，如：抗肿瘤、抗病毒、抗真菌、抗菌及抗心律失常、 抗高血压等，在药物化学中成为一个重要的药效团。（文献3 :C.Cornacchia,etal.， 2, 5-Diketopiperazinesasneuroprotectiveagents,Mini-ReviewsinMedicinal Chemistry，2012, 12 (1) : 1-11)。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种海洋放线菌来源的肽类化合物及其制备方法和应用。
[0006] 为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
[0007] -种海洋环肽类化合物，有如下化学结构，如式1 :
[0008]
[0009] 其制备方法如下：
[0010] 1)将海洋链霉菌Str印tomycessp. 223划线接种于M2+固体培养基上，28~35°C 培养3~4d，直至长出白色的孢子；
[0011] 2)取步骤1)中所述白色孢子丝到400液体培养基，28~35°C温度下进行摇床培 养，转速为90~220r/min，培养4~8d收获发酵产物；
[0012] 3)将步骤2)中发酵产物过滤，发酵液经大孔吸附树脂吸附，甲醇洗脱，收集洗脱 液，浓缩后直接用乙酸乙酯萃取3次，收集的菌丝体用乙酸乙酯萃取3次，合并以上乙酸乙 酯浸提液，浓缩蒸干，即得膏状粗提物；
[0013] 4)取步骤3)中的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱 液，洗脱液经薄层层析检测；
[0014] 5)收集步骤4)中以洗脱液体积比98:2梯度的洗脱组分，将收集的洗脱组分进行 凝胶柱层析、硅胶柱层析和制备型薄层层析分离纯化，收集Rf值为〇. 2~0. 3的组分，即得 肽类化合物1。
[0015] 步骤1)中的M2+固体培养基组成为每升含麦芽浸粉10g，酵母浸粉4g，葡萄糖4g， 海水500mL，去离子水500mL，琼脂15g，pH值7. 8。步骤2)中所述400液体培养基组成为 每升含葡萄糖l〇g，蛋白胨3g，牛肉浸膏3g，酵母浸提物5g，可溶性淀粉20g，CaC033g，海水 500mL，去离子水500mL，pH值7. 8。步骤3)中所述大孔吸附树脂为AmberbliteXAD16聚 苯乙烯型大孔吸附树脂。步骤4)中的有机溶剂为二氯甲烷-甲醇。步骤5)所述凝胶柱层 析洗脱液为甲醇；硅胶柱层析洗脱液为水和甲醇体积百分比为100/0~0/100。步骤5)所 述凝胶柱层析时收集经TLC检测为深褐色斑点的组分；硅胶柱层析时收集水和甲醇体积百 分比为60/40的洗脱液；制备型薄层层析展开剂为体积比98/2的二氯甲烷-甲醇。
[0016] 本发明具有以下优点：
[0017] 1.本发明充分利用尚未深入开发的丰富的海洋放线菌资源，本发明化合物是一个 海洋来源的新颖肽类化合物。
[0018] 2.本发明化合物具有抗肿瘤活性，在1. 66mM时，对人肝癌细胞株SMCC7721和人结 肠癌细胞Colon38的抑制率分别为97. 5%和98. 75%，为临床提供了新型药物或先导化合 物。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施实例对本发明做进一步的阐述。
[0020] 实施例一
[0021] 如1所示的环二肽类化合物的制备方法：
[0022] 从烟台莱州湾采集海泥样品，在实验室利用高氏一号培养基，通过梯度稀释培养 法纯化到一株链霉菌Streptomyces sp.223。所述高氏一号培养基组成为每升含可溶性淀 粉 2.0g，MgS04·7Η200· 05g，Κ2ΗΡ040· 05g，ΚΝ030· lg，FeS04·7Η200· 001g，琼脂粉15g，海水 500mL，去离子水500mL，调整pH值为7·8。
[0023]将菌株Streptomyces sp. 223划线接种于Μ2+固体培养基上，28°C恒温培养3d，直 到长出白色孢子；取8-10mm2大小的菌苔2块接入已灭菌的装有200mL M22培养基的1000mL 三角瓶中，共计20L，28°C，以180r/min转速，摇床培养6d，收集发酵产物。
[0024] 发酵产物经过滤