一种利用手性锍盐侧链稳定多肽α-螺旋二级结构的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学生物学稳定多肽技术领域，涉及一种通过构建含手性锍盐侧链稳 定多肽α -螺旋二级结构的方法，尤其涉及一种含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物及其 合成方法。
【背景技术】
[0002] 多肽类药物由于其特殊的生理活性、特异性以及低毒性等特点在生物医药行业引 起了广泛兴趣。但同时多肽类药物存在稳定性差，易降解，难以穿透细胞膜等缺点。
[0003] 研究表明α-螺旋大约占蛋白质结构的近30%，很多跨膜蛋白跨膜区便采用 α-螺旋构象。而传统的肽类药物由于氨基酸残基数目有限，无法有效形成复杂结构，在生 理溶液中有很高自由度并呈无规则线性状态，不仅降低了其特异性同时容易被蛋白酶所降 解。
[0004] 自上世纪八九十年代以来，化学家期望通过各种化学修饰手段，来模拟蛋白多种 相互作用以稳定多肽α螺旋。相关技术包括利用酰胺键侧链，二硫键侧链，三唑键等共价 方式，或者通过静电相互作用如盐桥等方式稳定。侧链稳定简单讲就是通过侧链偶联氨基 酸的位置，一般为i/i+3, i/i+4, i/i+7, i/i+ΙΙ等共价连接形成位于α螺旋同一面上。其 中应用较多的是i/i+4与i/i+7。
[0005] 上述稳定方法在实际的生物学应用上均有不同的缺点，其中最大的问题便是侧链 共价键的稳定性问题，如酰胺键在体内容易被蛋白酶水解，二硫键容易被还原而打开，均不 利于多肽的生物学应用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种利用手性锍盐侧链稳定多肽的α -螺旋二级结构的方 法，尤其是提供一种含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物及其合成方法。本发明的手性硫 盐侧链可以有效稳定多肽二级结构，提高多肽稳定性，同时该合成方法简便高效，具有侧链 简单、序列耐受性好、能有效提高多肽溶解性等优点。
[0007] 为了实现上述目的及其他目的，本发明采用如下的技术方案：
[0008] 本发明首先提供了一种含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物。
[0009] -种含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物，其结构通式如式（I)所示，该含有手性 锍盐侧链修饰的多肽化合物，具有稳定的α-螺旋二级结构：
[0010]
[0011] 其中=R1, R5各自独立地为氢或甲基，R2, R3, R4各自独立地为任意氨基酸残基，η为 0~6的正整数，R6为任意烷基、苄基及其衍生物，Γ代表任意抗衡阴离子，所述含手性锍盐 侧链修饰的多肽化合物中手性锍盐的构型为R型。当η优选为3时，对螺旋结构有更显著 的提升。
[0012] 较佳的，R6选自烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、苄基、杂环芳基、芳基衍生物、苄基 衍生物、烷基衍生物中的任一种。
[0013] 较佳的，X-选自 r、Cr、Br'r、Tf(T、BF4'Ts0'PF6'AsF6'SbF 6'CKV、TFA'S042lP hso4_中的任一种抗衡阴离子。
[0014] 较佳的，所述多肽的长度大于或等于5个氨基酸。
[0015] 本发明还提供了上述含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物的合成方法。
[0016] 一种含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物的合成方法，包括如下步骤：
[0017] 将i/i+4硫醚侧链修饰的多肽化合物烷烃化、芳基化或者苄基化，获得R型或者S 型手性锍盐侧链修饰的多肽化合物，其中的R型手性锍盐侧链修饰的多肽化合物即为所述 含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物。
[0018] 进一步的，所述含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物的合成方法，具体包括如下 步骤：
[0019] 将i/i+4硫醚侧链修饰的多肽化合物在酸性条件下，加入烷基化试剂或苄基化试 齐?，并室温下搅拌48h，所得的反应液冻干后用高效液相色谱分离纯化，获得所述含有手性 锍盐侧链修饰的多肽化合物；其中的酸性条件如在三氟乙酸或者〇. 2M甲酸水溶液中。
[0020] 上述的i/i+4硫醚侧链修饰的多肽化合物，其结构通式如式（II)所示：
[0021]
[0022] 其中=R1, R5各自独立地为氢或甲基，R2, R3, R4各自独立地为任意氨基酸残基，η为 0~6的正整数。
[0023] 优选的，所述含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物的合成路线如路线1或路线2 所示。
[0024] 路线 1 :
[0025]
[0026] 路线 2 :
[0027]
[0028] 其中，&选自烷基、苄基及其衍生物，Γ代表任意抗衡阴离子。
[0029] 所述含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物的合成方法，还具体包括如下步骤：
[0030] (1)含有非天然氨基酸的多肽固相合成；
[0031] (2)通过巯基-烯等反应获得i/i+4硫醚侧链修饰的多肽化合物（II);
[0032] (3)在固相或者液相条件下利用烷基化试剂或苄基化试剂将硫醚烷基化生成锍 盐；
[0033] (4)将步骤（3)的锍盐产物经分离纯化获得含R构型锍盐侧链修饰的多肽化合物 (I)，并通过圆二色谱等表征方法证明了利用手性锍盐侧链修饰对多肽α -螺旋二级结构 具有很好的稳定效果，该合成方法简单高效，对于多肽类药物修饰稳定有重要意义。
[0034] 本发明的含有手性锍盐侧链修饰的多肽化合物的合成方法可用作稳定多肽 α -螺旋二级结构的方法。
[0035] 本发明与现有技术相比具有如下有益效果：
[0036] 本发明的含有手性硫盐侧链修饰的多肽化合物，本发明的手性硫盐侧链可以有效 稳定多肽二级结构，提高了多肽的α -螺旋含量，提高多肽稳定性，同时该合成方法简便高 效，而且锍盐的形成可有效改善多肽的溶解性，这种利用手性锍盐侧链稳定多肽二级结构 的方法，其具有侧链简单、序列耐受性好、能有效提高多肽溶解性等优点，对于多肽类药物 修饰稳定有重要意义。
【附图说明】
[0037] 图1为η=3时Ac-cyclo (1，5) IionoS5AAAC-NH2与碘甲烷反应生成锍盐的HPLC图。
[0038] 图 2 为 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfonium 甲基琉盐异构体 A 与异构体 B 在PBS溶液里的⑶图
[0039] 图 3 为 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfonium 甲基琉盐异构体 B 在 PBS 和 50%TFE溶液里的CD图。
[0040] 图 4 为 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfonium 甲基琉盐异构体 B 在不同温度 下在PBS溶液里的⑶图。
[0041] 图 5 为 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfonium 对叔丁基苄基琉盐异构体 B 在 PBS和50%TFE溶液里的圆二色谱图。
[0042] 图 6 为 Ac-cyclo (1，5) -monoS5AAAC-NH2sulfonium3, 5_ 三氣甲基-苄基琉盐异构 体B在PBS和50%TFE溶液里的圆二色谱图。
[0043] 图 7 为 Ac-cyclo (I, 5) -monoS5ARAC_NH2sulfonium 甲基琉盐异构体 B 在 PBS 溶液 里的⑶图。
[0044] 上述的图2_7的横坐标代表波长（nm)，纵坐标代表椭圆率（mdeg。
[0045] 图 8 为多肤 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfonium 甲基琉盐异构体 B 的 LC 色 谱图。
[0046] 图 9 为多肤 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfo