脱保护，洗漆，抽掉NMP，加入IOml的 Ac20、DIEA和NMP (三者体积比I :3 :16)的混合液，鼓氮气lh，必要时可进行两次乙酰化，获 得N-端乙酰化的五肽树脂。
[0082] 5.侧链构建：首先构建含硫醚侧链的五肽，具体地，将上述N-端乙酰化的五肽树 脂溶胀于IOmL二氯甲烷DCM中20min，抽去DCM，加入配置好的3%(v/v)三氟乙酸TFA的 DCM溶液，5% (v/v)三异丙基硅烷TIPS的DCM溶液（v/v代表体积百分比)，脱去半胱氨酸三 苯甲基Trt保护基，IOminX 4。洗涤后将树脂抽干，溶胀于50mL除水DMF中，加入一当量光 引发剂安息香二甲醚DMPA以及一当量光敏剂对甲氧基苯乙酮MAP，置换氮气后置于365nm 光反应器中光照2h。
[0083] 6.抽掉反应液，将树脂依次用氮甲基吡咯烷酮（NMP) (10ml)，二氯甲烷（DCM) (10ml)，甲醇（MeOH) (IOml)交替洗漆，抽干保存或用于下一步反应。
[0084] 7.将多肽从树脂上剪切下：取IOOmg树脂于2ml EP管中，加入0. 5ml的TFA、TIPS 和H20(体积比9. 5 :0. 25 :0. 25)震荡反应lh，树脂过滤除去，用氮气把剪切液吹干，然后加 入冷的Iml的乙醚和正己烷(二者体积比4 :1)的混合液；离心去上清，沉淀于空气中挥干残 余溶剂。
[0085] 8.多肽纯化：将上述沉淀加入10%(v/v)(体积百分比）的乙腈水溶液后用高效液 相色谱进行纯化，250*10mm C18反相色谱，A液：0. 1%体积百分比的TFA的H2O溶液，B液： 0. 1%体积百分比的TFA的乙腈溶液；溶剂梯度：0-31min内2-30%体积百分比的B液的梯度 洗脱。
[0086] 9.琉盐制备：将已纯化环肽Ac_cyclo(l, 5)-monoS5AAAC_NH2lmg溶于Iml三氟乙 酸（TFA)中，加入IOeq碘甲烷，室温下搅拌48h，然后用氮气吹干三氟乙酸后，加入ImL水 溶解反应物后用高效液相色谱HPLC纯化，得到含有手性锍盐侧链的环肽非对应异构体:Ac -cyclo (I, 5) -monoS5AAAC-NH2sulfonium CH3A和 Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2sulfonium CH3B。
[0087] 10.圆二色谱表征：将 Ac-cyclo (1，5) IionoS5AAAC-NH2CH3 两种异构体 CH3A 和 CH3B 溶于IOmM PBS溶液中测定⑶图谱：取0. 1-0. 5mg样品分别溶于0. 5mlIOmmol PBS中测⑶ 波长为190nm-250nm处的色谱图，然后根据以下公式计算螺旋含量；
[0088] alpha螺旋计算公式：
[0089] fH=([0]obs215-[0 ]〇)/([ 9 ]=〇2i5-[ 0Ic)
[0090] [Θ Lbs215= θΛ?0*0Νρ*υ)
[0091] [ Θ ] ^5=(-44000+25010 (1-κ/Np)
[0092] [ Θ ]C=2220-53T=1054
[0093] T=22°C，κ =4. 0, Np=6 (对于五肽），U=0.1 (cm)，C为样品摩尔浓度M，fH为平均螺 旋含量，[9 Lbs215为215nm下实际摩尔椭圆率，[Θ ] ^215为215nm下极大摩尔椭圆率，[Θ ] c为无规卷曲摩尔椭圆率，Θ为椭圆率。
[0094] 其结果是，圆二色谱结果表明锍盐B异构体在50%TFE下并未显著提高，说明这一 侧链稳定方法已经将该五肽α螺旋提高到了最佳值，即化合物2B呈现稳定的α-螺旋，如 图1、图2、图3、图4所示。
[0095] 图1的具体结果如表1所示
[0096] 表 lAc-cyclo (1，5) -monoS5AAAC_NH2Sulfonium A 和 B 的 HPLC 分析结果
[0097]
[0098] 含手性锍盐侧链的五肽在HPLC上可分离到两个不同保留时间的异构体A和B，其 中分别对这两种异构体进行圆二色谱表征二级结构发现异构体A在IOmM的磷酸盐缓冲液 PBS中呈现无规卷曲构象，而异构体B在相同条件下呈现特征的α螺旋吸收(请参见表2和 图2)，同时异构体B在50%(v/v)TFE下其螺旋并未显著提高(请参见图3)。
[0099] 表2多肽III在pH=7. 4,22°C，10mM PBS中圆二色谱数据
[0100]
[0101] 多肽α螺旋二级结构用圆二色谱表征，其特征为190nm处正峰，同时[Θ ]215、 [Θ ]2(17为负峰且[Θ ]215/[ Θ ]2(17比例越接近1其螺旋含量越高，而上述结果说明含有手性 锍盐侧链的五肽的构象与手性锍盐的手性密切相关，其中R构型可以显著稳定多肽的α螺 旋二级结构。
[0102] 图4为在不同温度下含手性锍盐侧链的稳定多肽的构象变化情况，说明在一定温 度范围内，含有手性锍盐侧链稳定的多肽均保持螺旋的构象。
[0103] 图8、图9为该多肽化合物LC-MS结果，可找到对应分子量m/z515。
[0104] 实施例2
[0105] 苄基化手性琉盐侧链稳定多肽α -螺旋分别为Ac-cyclo (1，5)-monoS5AAAC_NH2s ulfonium tBu_B 以及 Ac-cyclo(l，5)-monoS5AAAC-NH2sulfonium CF3-B 的合成，即结构式 (IV)和（V)的合成：
[0106]
[0107] 将甲基锍盐替换为苄基锍盐，实验步骤与实施例1的甲基锍盐相同，终产物经过 高效液相色谱纯化亦可以得到保留时间不同的两个异构体，且保留时间稍长的异构体(化 合物2B)在PBS磷酸盐缓冲溶液中有稳定的α -螺旋二级结构。
[0108] 含手性锍盐侧链的五肽在HPLC上可分离到两个不同保留时间的异构体A和Β，其 中分别对这两种异构体进行圆二色谱表征二级结构发现异构体A在IOmM的磷酸盐缓冲液 PBS中呈现无规卷曲构象，而异构体B在相同条件下呈现特征的α螺旋吸收，同时异构体B 在50%(v/v)TFE下其螺旋并未显著提高(结构式（IV)的圆二色谱图请参见图5、结构式（V) 的圆二色谱图请参见图6)。
[0109] 表3多肽在IV、V在pH=7. 4, 22°C，IOmM PBS中圆二色谱数据
[0110]
[0111] 多肽α螺旋二级结构用圆二色谱表征，其特征为190nm处正峰，同时[Θ ]215、 [Θ ]2(17为负峰且[Θ ]215/[ Θ ]2(17比例越接近1其螺旋含量越高，而上述结果说明含有手性 锍盐侧链的五肽的构象与手性锍盐的手性密切相关，其中R构型可以显著稳定多肽的α螺 旋二级结构。
[0112] 图10、图11为多肽化合物IV的LC-MS结果，可找到对应分子量m/z 647。
[0113] 图12、图13为多肽化合物V的LC-MS结果，可找到对应分子量m/z 727。
[0114] 实施例3
[0115] 手性甲基琉盐侧链稳定多肽 α -螺旋 Ac_cyclo(l, 5)-monoS5ARAC_NH2 sulfonium CH3的合成，即结构式（VI)的合成：
[0116]
[0117] 实验步骤与实施例1的甲基锍盐相同，终产物经过高效液相色谱纯化亦可以得到 保留时间不同的两个异构体，且保留时间稍长的异构体(化合物2B)在PBS磷酸盐缓冲溶液 中有稳定的α-螺旋二级结构。
[0118] 含手性锍盐侧链的五肽在HPLC上可分离到两个不同保留时间的异构体A和B，其 中对异构体B进行圆二色谱表征二级结构发现异构体A在IOmM的磷酸盐缓冲液PBS中呈 现特征的α螺旋吸收