在提高的金属离子浓度下发酵环肽的制作方法
【专利摘要】本发明涉及在提高的离子浓度下发酵环肽(例如纽莫康定)的方法，其中所述离子是钙离子、铜离子、铁离子、镁离子、锰离子、钼离子和锌离子中的任一或全部。
【专利说明】在提高的金属离子浓度下发酵环肽 发明领域
[0001] 本发明涉及在提高的离子浓度下发酵环肽（例如纽莫康定（pneumocandin))的方 法，其中所述离子是钙离子、铜离子、铁离子、镁离子、锰离子、钥离子和锌离子中的任一或 全部。
[0002] 发明背景
[0003] 环肽是末端氨基和末端羧基形成内部肽键的多肽。因此，环肽没有末端氨基或 末端羧基，但可能存在来自于单个氨基酸（例如天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等）的非末端 氨基或羧基。一些环肽由于它们有益的药用性能而被人们所知。一个很好的实例是棘 白菌素（echinocandin)类，其是有效的抗真菌剂。环肽可以是天然存在的化合物，但 也可以通过全合成或者通过对天然存在或天然产生的前体进行合成修饰或酶法改性获 得，其中后一类被称为半合成环肽。医药方面有用的棘白菌素类的实例是环状六肽：阿 尼芬净（anidulafungin)、卡泊芬净（caspofungin)、西洛芬净（cilofungin)和米卡芬 净（micafungin)，它们对治疗真菌感染是有益的，特别是由Aspergillus、Blastomyces、 Candida、Coccidioides和Histoplasma引起的真菌感染。这些环状六肽的特征在于其包 含苏氨酸和脯氨酸衍生物，例如3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸和/或3-羟基-4-甲基脯氨 酸。阿尼芬净、卡泊芬净和米卡芬净都是可由天然存在的棘白菌素类（例如棘白菌素 B、纽 莫康定或纽莫康定Β(!)衍生得到的半合成环肽。
[0004] 在US 5, 202, 309中被首次公开的纽莫康定BQ(Pneumocandin Β。，式1，其中札 =C(0) (C-H2)8CH(CH3)CH2CH(CH 3)CH2CH3)是能够通过发酵获得的化合物，例如在Glarea lozoyensis中发酵，如在W0 00/08197中所描述的。该化合物是制备有治疗活性的半合成 环肽（例如卡泊芬净）的重要中间体，如在W0 2010/128096和其引用的参考文献中所描述 的。
[0005]
【权利要求】
1. 制备环肽的方法，所述环肽包含选自3-羟基脯氨酸、3-羟基-4-甲基脯氨酸、 4_羟基脯氨酸和脯氨酸的氨基酸，所述方法包括在营养物存在时，发酵Aspergillus sp.、 Coleophoma sp.或Glarea sp.的培养物，所述营养物包含興离子、铜离子、铁离子、镁离子、 锰离子、钥离子和锌离子，其特征在于金属离子中所述钙离子的浓度为0. 4-lmg. kg<和/或 所述铜离子的浓度为〇. 15-0. 5mg. kg_1和/或所述铁离子的浓度为3-10mg. kg_1和/或所述 镁离子的浓度为70-200mg. kg_1和/或所述锰离子的浓度为5-15mg. kg_1和/或所述钥离子 的浓度为〇· 15-0. 5mg. kg4和/或所述锌离子的浓度为0· 7-2mg. kg'
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述钙离子、铜离子、铁离子、镁离子、锰离子、钥 离子和锌离子的浓度都在所述金属离子浓度范围内。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述培养物是Aspergillus aculeatus，Aspergillus nidulans，Aspergillus rugulosus，Aspergillus sydowii, Coleophoma empetri F-11899 或 Glarea lozoyensis。
4. 根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述环肽是阿枯菌素、棘白菌素 B、 FR901379、L-671329、牡仑康定、纽莫康定A。、纽莫康定Ai、纽莫康定A2、纽莫康定A3、纽莫康 定A 4、纽莫康定A5、纽莫康定A6、纽莫康定仏、纽莫康定&、纽莫康定B 2、纽莫康定B5、纽莫康 定B6、纽莫康定〇!、纽莫康定Dd、纽莫康定D 2、纽莫康定Ed、S31794/F1或孢利芬净。
5. 根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述环肽是纽莫康定仏，所述培养物 是 Glarea lozoyensis。
6. 根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述方法还包括随后分离所述环肽。
7. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述环肽是纽莫康定仏，所述方法还 包括将所述纽莫康定^转换为卡泊芬净或其药学上可接受的盐。
8. 根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中在所述发酵过程中加入氨和/或氢氧 化铵以维持氨浓度在0. l-5g. Γ1的范围内。
9. 一种微生物，其是 Glarea lozoyensis CBS131548。
【文档编号】C07K7/64GK104145021SQ201380005477
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2013年1月7日 优先权日:2012年1月13日
【发明者】沃特·阿德里安努斯·温登·范, 鲁道夫·珀范德 申请人:中化帝斯曼制药有限公司荷兰公司