专利名称：用于治疗肥胖的新的肽类的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的肽类化合物，它们是一种或多种黑皮质素受体的配体，且可以发挥延长的活性，涉及所述化合物在治疗中的应用，涉及包含将所述化合物施用给患者的治疗方法，还涉及所述化合物在制备药物中的应用。
背景技术：
肥胖是许多常见病(如动脉粥样硬化、高血压、II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM))、血脂障碍、冠心病、骨关节炎和多种恶性肿瘤)发展的熟知的危险因素。它还会通过减少的运动性和降低的生活质量引起显著的问题。肥胖的发生和由此引起的这些疾病正在所有的工业化国家中增长。迄今为止，仅可以得到少量的药理学治疗，即西布曲明(Abbot；通过5-羟色胺能机理和去甲肾上腺素机理发挥作用)和奥利司他(Roche Pharm；减少从肠的脂肪摄入)。但是，由于肥胖作为严重的(甚至致命的)和常见的疾病中的危险因素的重要作用，仍然需要用于治疗肥胖的药物化合物。
术语肥胖是指过量的脂肪组织。在本上下文中，最好将肥胖看作会导致健康风险的任意程度过量的肥胖。仅可以估计正常和肥胖个体之间的差异，但是肥胖导致的健康风险可能是具有增加的肥胖的统一体。但是，在本发明的上下文中，体重指数(BMI＝以千克计的体重/以米计的身高的平方)超过25的个体应当被视作肥胖。
即使轻微的肥胖也会增加早产儿死亡、糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、胆囊病和某些类型的癌症的风险。在工业化的西方国家，肥胖发病率在过去的数十年中显著增加。由于肥胖的高发病率和它的健康后果，它的治疗应当具有高度的公共卫生优先性。
当能量摄入超过能量消耗时，多余的卡路里会储藏在脂肪组织中，并且如果延长这样的净正平衡，则产生肥胖，即重量平衡有2个组成部分，任一方面(摄入或消耗)的异常都会导致肥胖。
阿黑皮素原(POMC)是β-内啡肽和黑皮质素肽(包括促黑激素(α-MSH)和促肾上腺皮质激素(ACTH))的前体。POMC在几种外周和中枢组织(包括黑素细胞、垂体和下丘脑神经元)中表达。POMC前体在不同的组织中进行不同的加工，导致依赖于表达部位的不同黑皮质素肽的表达。在垂体前叶中，主要生成ACTH，而在垂体中叶和下丘脑神经元中，主要的肽是α-MSH、β-MSH、去乙酰-α-MSH和β-内啡肽。已经证实了几种黑皮质素肽(包括ACTH和α-MSH)在通过脑室内注射给予大鼠后具有抑制食欲的活性[Vergoni等，European Journal ofPharmacology179，347-355(1990)]。使用人造的环状α-MSH类似物MT-II也得到了抑制食欲的效果。
已经鉴别出了5种黑皮质素受体亚型的家族(黑皮质素受体1-5，也称作MC1，MC2，MC3、MC4和MC5)。MC1，MC2和MC5主要在外周组织中表达，而MC3和MC4主要中枢性地表达，但是MC3也在外周组织中表达。除了参与能量体内稳态外，还已经证实MC3受体也参与几种炎性疾病。MC3激动剂对这些疾病(例如痛风性关节炎)也具有积极效果。MC5主要在外周表达，已经证实它参与外分泌和炎症。已经证实MC4参与体重和进食行为的调节，因为MC4敲除的小鼠会发展肥胖[Huzar等，Cell88，131-141(1997)]。另外，已经证实MC4受体参与能量消耗的调节[Fekete等，Journal of Neuroscience20，1550-1558(2000)]。此外，关于刺鼠蛋白(MC1，MC3和MC4拮抗剂)的异位中枢表达或在小鼠脑中内源性地产生的MC3和MC4拮抗剂(刺鼠基因相关肽，AGRP)的过表达的研究表明，这两种拮抗剂的过表达会导致肥胖的发展[Kleibig等，PNAS92，4728-4732(1995)]。而且，脑室内(icv)注射AGRP的C-末端片段会增加进食，并拮抗α-MSH对食物摄入的抑制作用。
在人类中，已经描述了推测是由于MC4中的移码突变导致的肥胖家族的几个案例[见例如，Yeo等，Nature Genetics20，111-112(1998)；Vaisse等，Nature Genetics20，113-114(1998)]。
总之，MC4激动剂可以用作食欲减退剂或能量消耗调节药，且可以用于治疗肥胖或肥胖相关疾病，以及用于治疗通过激活MC4得以改善的其它疾病、障碍或病症。
MC4拮抗剂可以用于治疗恶病质或厌食症，和用于治疗虚弱的老龄患者的waisting。而且，MC4拮抗剂可以用于治疗慢性疼痛、神经病和神经性炎症。
大量的专利申请公开了各种类别的作为黑皮质素受体调节剂的非肽小分子，其中的实例是WO03/009850、WO03/007949和WO02/081443。
许多专利文件中还公开了肽作为黑皮质素受体调节剂的应用，例如WO03/006620，US 5731,408和WO98/27113。Hadle[Pigment CellRes.，4，180-185，(1991)]报告了与脂肪酸缀合的特定促黑色素激素肽的延长的作用，所述的持久作用通过由缀合的脂肪酸造成的调节剂从可逆作用向不可逆作用的转化来实现。
发明概述本发明的发明人已经惊奇地发现，特定的肽缀合物对一种或多种黑皮质素受体(即MC1，MC2，MC3、MC4或MC5受体)具有高调控作用。因此，本发明涉及式I化合物R1-S-Z1-Z2-Z3-His-Z4-Z5-c[X1-Hyp-X2-Arg-X3-X4]N(R’)2[I]其中R1代表直链、支链的和/或环状的C14-22烷酰基、C14-22烯酰基或C14-22炔酰基，其可以任选地被一个或多个选自卤素、羟基和芳基的取代基取代，或R1代表C9-17-C(O)-NH-S(O)2-(CH2)3-C(O)-；S代表一个键，4-氨基丁酸残基，Gly，β-Ala，或由式II代表的结构
Z1代表Gly，β-Ala，Ser，D-Ser，Thr，D-Thr，His，D-His，Asn，D-Asn，Gln，D-Gln，Glu，D-Glu，Asp，D-Asp，Ala或D-Ala；Z2代表Ser，Thr，Gln，Asn，Glu，Asp或His；Z3代表Gln或Asn；Z4代表Ser，Thr，Dab，Dap，Glu或Asp；Z5代表Ala，Val，Leu，Ile，Met或Nle；X1代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；X2代表D-Phe，其中D-Phe中的苯基可以任选地被一个或多个选自下述的取代基取代卤素，羟基，烷氧基，硝基，甲基，三氟甲基和氰基；X3代表Trp，2-Nal，(3-苯并[b]噻吩基)丙氨酸残基或(S)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-甲酸残基；X4代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；其中X1和X4过由均独立地为Cys、高Cys或Pen的X1和X4衍生的二硫键，或通过X1的侧链中的羧酸和X4的侧链中的氨基之间形成的酰胺键，或通过X4的侧链中的羧酸和X1的侧链中的氨基之间形成的酰胺键，连接到一起，使式I化合物成为环状；每个R’独立地代表氢或C1-6烷基，其可以任选地被一个或多个氨基或羟基取代；条件是，式I化合物不为十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十八烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，
2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十四烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2或十六烷酰基-Gly-Glu-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2；和其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物。
本发明还涉及本发明的化合物在治疗中的应用，涉及包含本发明的化合物的药物组合物，涉及包含给有此需要的患者施用本发明的化合物的治疗方法，还涉及本发明的化合物在制备药物中的应用。
定义使用在基团名称前面的“Cx-y”型前缀，如在Cx-y烷基(例如C14-22烷基)中，表示具有x至y个碳原子的指定类型的基团。因而，直链、支链的和/或环状的C14-22烷酰基、C14-22烯酰基或C14-22炔酰基当作为本发明的化合物中的取代基R1而存在时，包括具有14，15，16，17，18，19，20，21或22个碳原子(即C14，C15，C16，C17，C18，C19，C20，C21或C22)的直链、支链的和/或环状的烷酰基、烯酰基或炔酰基。
如本文所使用的术语“烷基”是指直链、支链的和/或环状的饱和单价烃基。其实例包括甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，2-丁基，叔丁基，环丙基，环丁基，环戊基和环己基。
如本文所使用的术语“链烯基”指直链、支链的和/或环状的包含至少一个碳-碳双键的单价烃基。其实例包括乙烯基，丙-1-烯-1-基，丙-2-烯-1-基和丙-2-烯-2-基。
如本文所使用的术语“炔基”指直链、支链的和/或环状的包含至少一个碳-碳三键的单价烃基，且它可以任选地另外包含一个或多个碳-碳双键。其实例包括乙炔基，丙-1-炔-1-基和丙-2-炔-1-基。
如本文所使用的术语“烷酰基”意指式-C(O)-R’的基团，其中R’是如上所述的烷基。
如本文所使用的术语“烯酰基”意指式-C(O)-R”的基团，其中R”是如上所述的链烯基。
如本文所使用的术语“炔酰基”意指式-C(O)-R的基团，其中R是如上所述的炔基。
如本文所使用的术语“烷氧基”意指式-OR’的基团，其中R’是如上所述的烷基。其实例包括甲氧基和乙氧基。
在本上下文中，术语“芳基”意指碳环芳环基团或稠合的芳环系统基团，其中至少一个环是芳族的。典型的芳基包括苯基，联苯基，萘基等。
术语“卤素”意指元素周期表的第7主族的成员，它包括氟、氯、溴和碘(分别与氟、氯、溴和碘取代基相对应)。
当提到2个氨基酸成桥时，意指2个分别的氨基酸的侧链中的官能团已经反应形成共价键。
在本上下文中，术语“激动剂”意指可以激活正在讨论的受体类型的物质(配体)。
在本上下文中，术语“拮抗剂”意指可以阻断、中和或消除激动剂作用的物质(配体)。
更具体地，受体配体可以分成下述类别受体激动剂，其可以激活受体；部分激动剂也可以激活受体，但是具有比完全激动剂更低的功效。部分激动剂也可以起受体部分拮抗剂的作用，部分地抑制完全激动剂的作用。
受体中性拮抗剂，其可以阻断激动剂的作用，但是不会影响受体-构成活性(receptor-constitutive activity)。
受体逆转激动剂，其可以阻断激动剂的作用，并同时减弱受体-构成活性。完全逆转激动剂可以完全减弱受体-构成活性；部分逆转激动剂可以将受体-构成活性减弱至更小的程度。
如本文所使用的术语“拮抗剂”包括中性拮抗剂和部分拮抗剂，以及逆转激动剂。术语“激动剂”包括完全激动剂以及部分激动剂。
在本上下文中，术语“药学上可接受的盐”意指对患者无害的盐。这样的盐包括药学上可接受的酸加成盐、药学上可接受的金属盐、铵和烷基化的铵盐。酸加成盐包括无机酸和有机酸的盐。合适的无机酸的代表性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸和硝酸等。合适的有机酸的代表性实例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、羟基乙酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗坏血酸、扑酸、双亚甲基水杨酸、乙二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。药学上可接受的无机酸或有机酸的酸加成盐的其它实例包括在这里引作参考的J.Pharm.Sci.(1977)66，2中列出的药学上可接受的盐。相关的金属盐的实例包括锂、钠、钾、镁盐等。烷基化的铵盐的实例包括甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、乙基铵、羟乙基铵、二乙基铵、丁基铵、四甲基铵盐等。
如本文所使用的，化合物的″治疗有效量″指足以治愈、减轻或部分地阻止指定疾病和/或其并发症的临床表现的量。将足以实现该目的的量定义为″治疗有效量″。每个目的的有效量取决于疾病或损伤的严重性，以及对象的体重和总体病症。应当理解，通过构建矩阵(matrix)值并测试矩阵中的不同点，使用常规实验可以确定适当的剂量，其均属于熟练的医生或兽医的常识范围之内。
如本文所使用的术语“治疗(treatment)”，“治疗(treating)”和它的其它变体指为抵抗病症(例如疾病或障碍)的目的而管理和护理患者。该术语意在包括针对患者患有的指定病症的全谱治疗，例如施用正在讨论的活性化合物来减轻症状或其并发症，延迟疾病、障碍或病症的进展，治愈或消除疾病、障碍或病症，和/或预防病症，其中预防应当理解为抵抗疾病、病症或障碍的目的而管理和护理患者，还包括施用正在讨论的活性化合物来预防症状或并发症的发作。待治疗的患者优选地是哺乳动物，特别是人类，但是其它动物如狗、猫、牛、马、绵羊、山羊或猪等的治疗，也在本发明的范围内。
如本文所使用的，术语“溶剂化物”指溶质(in casu，根据本发明的化合物)和溶剂形成的确定化学计量的络合物。溶剂可以包括，例如，水、乙醇或乙酸。
在本上下文中使用的氨基酸缩写具有下面的含义
以D-开始、后面跟着3字母代码的氨基酸缩写，如D-Ser，D-His等，指对应氨基酸的D-对映体，例如D-丝氨酸，D-组氨酸等。在3字母代码或氨基酸名称前面没有字母D的情况下，如在例如Ser(丝氨酸)、His(组氨酸)等中，应当理解，指正在讨论的氨基酸的L-对映体。
发明详述如上面已经指出的，本发明的一个方面涉及式I化合物R1-S-Z1-Z2-Z3-His-Z4-Z5-c[X1-Hyp-X2-Arg-X3-X4]N(R’)2[I]其中R1代表直链、支链的和/或环状的C14-22烷酰基、C14-22烯酰基或C14-22炔酰基，其可以任选地被一个或多个选自卤素、羟基和芳基的取代基取代，或R1代表C9-17-C(O)-NH-S(O)2-(CH2)3-C(O)-；S代表一个键，4-氨基丁酸残基，Gly，β-Ala，或由式II代表的结构
Z1代表Gly，β-Ala，Ser，D-Ser，Thr，D-Thr，His，D-His，Asn，D-Asn，Gln，D-Gln，Glu，D-Glu，Asp，D-Asp，Ala或D-Ala；Z2代表Ser，Thr，Gln，Asn，Glu，Asp或His；Z3代表Gln或Asn；Z4代表Ser，Thr，Dab，Dap，Glu或Asp；Z5代表Ala，Val，Leu，Ile，Met或Nle；X1代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；
X2代表D-Phe，其中D-Phe中的苯基可以任选地被一个或多个选自下述的取代基取代卤素，羟基，烷氧基，硝基，甲基，三氟甲基和氰基；X3代表Trp，2-Nal，(3-苯并[b]噻吩基)丙氨酸残基或(S)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-甲酸残基；X4代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；其中X1和X4通过由均独立地为Cys、高Cys或Pen的X1和X4衍生的二硫键，或通过X1的侧链中的羧酸和X4的侧链中的氨基之间形成的酰胺键，或通过X4的侧链中的羧酸和X1的侧链中的氨基之间形成的酰胺键，连接到一起，使式I化合物成为环状；每个R’独立地代表氢或C1-6烷基，其可以任选地被一个或多个氨基或羟基取代；条件是，式I化合物不是十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十八烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十四烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2或十六烷酰基-Gly-Glu-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2；
和其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物。
在本发明的化合物的某些实施方案中，式I中的R1是C14-18-烷酰基，且S是一个键或由式II代表的结构。
在本发明的化合物的进一步的实施方案中，式I中的R1是4-(C14-18烷酰基-氨磺酰基)丁酰基，如4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基，且S是一个键。
在本发明的化合物的其它实施方案中，式I中的Z1是Gly，Glu或Asp，且Z5是Nle或Ala。
在本发明的化合物的其它实施方案中，式I中的Z2是Glu，Asp，Ser，Thr，Gln或Asn，如Ser，Thr或Gln，例如Ser。
在本发明的化合物的某些实施方案中，式I中的Z3是Gln。在其它实施方案中，Z3是Asn。
在本发明的化合物的更进一步的实施方案中，式I中的Z4是Glu，Asp，Ser，Thr，Dab或Dap，如Ser，Thr或Dab。
在本发明的化合物的一组实施方案中，式I中的X1是Glu，式I中的X2是D-Phe，式I中的X3是Trp，且式I中的X4是Lys。在另一组实施方案中，X1是Asp，X2是D-Phe，X3是Trp且X4是Lys。
在本发明的化合物的某些其它实施方案中，式I中的X1和X4独立地是Cys，高Cys或Pen，式I中的X2是D-Phe，且式I中的X3是Trp。
在本发明的化合物的一组特别的实施方案中，基团N(R′)2是NH2(即氨基)。在另一组实施方案中，基团N(R′)2是NH-CH2-CH2-NH2[即(2-氨基乙基)氨基]。
令人感兴趣的本发明化合物的具体类型包括下列化合物R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO1)，R1-S-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO2)，
R1-S-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO3)，R1-S-Gly-Ser-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO4)，R1-S-Gly-Thr-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO5)，R1-S-Gly-Gln-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO6)，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO7)，R1-S-Gly-Thr-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO8)，R1-S-Gly-Gln-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO9)，R1-S-Gly-Ser-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO10)，R1-S-Gly-Thr-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-ATg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO11)，R1-S-Gly-Gln-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO12)，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO13)，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2(SEQ ID NO14)，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2(SEQ ID NO15)，R1-S-Glu-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO16)，
R1-S-Glu-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO17)，R1-S-Gly-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO18)，R1-S-Glu-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO19)，R1-S-Gly-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO20)，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO21)和R1-S-Glu-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO22)，其中R1和S可以如上所述变化。
本发明令人感兴趣的化合物的具体实例是2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO23)，十六烷酰基-Gly-Thr-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO24)，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO25)，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Dab-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO26)，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-氨基乙基)酰胺(SEQ ID NO27)，十四烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO28)，
十八烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO29)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO30)，十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Dap-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO31)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Dap-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO32)，十四烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO33)，十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO34)，十八烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO35)，十六烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO36)，十八烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO37)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO38)，2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO39)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO40)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2(SEQ ID NO41)，十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2(SEQ ID NO42)，
4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO43)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO44)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO45)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO46)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO47)，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO48)，和4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO49)。
本发明也包括如上所述的本发明的化合物的两个或多个实施方案的组合。
在本发明的一个方面，本发明的化合物是黑皮质素受体的激动剂，尤其是MC4的激动剂。在本发明的另一个方面，所述化合物是MC4的选择性激动剂。在此上下文中，选择性应当理解为化合物相对于MC1、MC3和/或MC5的活性。如果化合物作为MC4激动剂比作为MC1、MC3和/或MC5激动剂明显更有效，则视其为选择性MC4激动剂。通过对比下面“测定IV”(MC1)所述的MC1结合测定和下面“测定III”(MC4)所述的功能MC4测定，可以确定化合物相对于MC1和MC4的激动效力。如果化合物对于MC4的效力比对于MC1的效力大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，则将其视为相对于MC1的选择性MC4激动剂。在如“测定II”(MC3和MC5)和“测定III”(MC4)所述的功能测定中，可以确定化合物对于MC3、MC4和MC5的激动效力。如果化合物对于MC4的效力比对于MC3的效力大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，则将其视为相对于MC3的选择性MC4激动剂。如果化合物对于MC4的效力比对于MC5的效力大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，则将其视为相对于MC5的选择性MC4激动剂。在一个具体的方面，本发明的化合物是相对于MC1、相对于MC3、相对于MC5、相对于MC1和MC3、相对于MC1和MC5、相对于MC3和MC5或相对于MC1、MC3和MC5的选择性MC4激动剂。
在本发明的另一个方面，本发明的化合物是选择性的MC4激动剂和MC3拮抗剂。在此上下文中，如果化合物是如上所述的相对于MC1和MC5的选择性MC4激动剂，且如“测定II”所述测得其能拮抗MC3，则将其视为选择性MC4激动剂和MC3拮抗剂。在后一测定中，将表现出小于100nM、例如小于10nM、例如小于5nM、例如小于1nM的IC50值的化合物视为MC3拮抗剂。
在本发明的另一个方面，本发明的化合物是选择性MC3激动剂和选择性MC4激动剂。在此上下文中，如果化合物作为MC3和MC4激动剂比作为MC1和MC5激动剂明显更有效，则将其视为选择性MC3和MC4激动剂。通过对比如“测定IV”所述测得的MC1的效力和如“测定II”所述测得的MC3的效力，可以确定化合物对于MC1和MC3的选择性。如果化合物对于MC3的效力与对于MC1相比大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，将其视为相对于MC1的选择性MC3激动剂。通过对比如“测定II”所述测得的效力，可以确定化合物对于MC3和MC5的选择性。如果化合物对于MC3的效力与对于MC5相比大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，将其视为相对于MC5的选择性MC3激动剂。如上所述，可以确定化合物相对于MC3和MC5的MC4选择性。
本发明的化合物可以发挥长效作用，即可以延长它们发挥生物活性的时间期限。在略作修改的“测定I”中，通过对比本发明的化合物和其中R1是氢且S是一个键的对应化合物，可以评价延长效果。该实验允许持续时间段T，直到大鼠已经吃得与实验前一样多。测量本发明的化合物和其中R1是氢且S是一个键的对应化合物的T值，并计算差异ΔT。认为产生超过3小时、例如超过7小时、例如超过12小时、例如超过24小时、例如超过48小时、例如超过72小时的ΔT的本发明的化合物会发挥长效作用(protracted effect)。
本发明的化合物能调控黑皮质素受体，因此认为它们特别适用于治疗可以通过调控黑皮质素受体活性来治疗的疾病或状态。更具体地，认为本发明的化合物适用于通过激活MC4来治疗疾病或状态。
在一个方面，本发明涉及激动或激活对象中的MC4的方法，该方法包含给对象施用有效量的本发明的化合物(即式I的化合物)。
在另一个方面，本发明提供了延迟从葡萄糖耐受不良(IGT)向II型糖尿病发展的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
在另一个方面，本发明提供了延迟从II型糖尿病向胰岛素依赖性糖尿病(insulin-requiring diabetes)发展的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
在另一个方面，本发明涉及治疗肥胖或预防超重的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
在另一个方面，本发明提供了调节食欲的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
本发明的另一个方面涉及诱导饱感的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
本发明的另一个方面涉及预防成功地减肥后体重反弹的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
本发明的另一个方面涉及增加能量消耗的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
本发明的其它方面包括治疗与超重或肥胖有关的疾病或状态的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物；治疗食欲过盛的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物；治疗暴食的方法，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物；治疗选自下述的疾病或状态的方法动脉粥样硬化，高血压，糖尿病，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍和早产儿死亡的危险，该方法包含给有此需要的患者施用有效量的本发明的化合物。
更具体地，本发明的化合物适用于治疗肥胖或超重患者的疾病。因此，本发明还提供了治疗肥胖患者的选自下述的疾病或状态的方法II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍和肥胖患者早产儿死亡的危险，该方法包含给有此需要的肥胖患者施用有效量的本发明的化合物。
此外，本发明的化合物的施用可以有利地用于治疗已经经历或要经历胃囊带术和/或胃手术的患者、尤其是肥胖或超重的患者。
另外，MC4激动剂通过调控奖励系统(reward system)和出血性休克对胰岛素敏感性、药物滥用具有积极效果。而且，MC3和MC4激动剂具有解热作用，且已经证实二者都参与外周神经再生，还已知MC4受体能降低应激反应。
将本发明的化合物施用给本发明上下文中的患者的适当途径包括，肠胃外途径，如鼻、肺或舌下给药途径，它们都是给药领域的技术人员熟知的。
在上面所述的所有治疗方法中，可以单独地或与一种或多种(即1、2、或3....等)本发明的其它化合物组合施用本发明的化合物。此外，本发明的化合物，或2种或多种(即2、3、或4....等)本发明化合物的组合可以与一种或多种其它的治疗活性试剂或化合物(即不在本发明范围内的试剂或化合物)依次地或同时地组合施用。
当用在根据本发明的方法中时，本发明的化合物的典型剂量范围是约0.001-约100mg/kg体重/天，例如约0.01-约50mg/kg体重/天，如约0.05-约10mg/kg体重/天，分一个或多个剂量给药，如1-3个剂量。准确剂量取决于给药的频率和方式，治疗的对象的性别、年龄、体重和总体情况，治疗的病症的性质和严重性，要治疗的任何并发疾病，和本领域的技术人员显而易见的其它因素。
使用本领域的技术人员熟知的技术，可以方便地将本发明化合物配制成单位剂型。用于每天口服给药1或3次(例如每天1-3次)的典型单位剂型可以合适地含有0.05-约1000mg、例如约0.1-约500mg、例如约0.5mg-约200mg本发明的化合物。
在另一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含任选地与一种或多种其它的治疗活性化合物或物质相组合的本发明化合物，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。该组合物可以合适地是单位剂型，其包含约0.05mg至约1000mg、例如约0.1mg至约500mg、例如约0.5mg至约200mg本发明化合物。
本发明还涉及本发明化合物在生产用于治疗选自下述的疾病或病症的药物中的应用，其任选地与一种或多种其它的治疗活性化合物或物质相组合超重或肥胖，食欲过盛，暴食，动脉粥样硬化，高血压，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍和早产儿死亡的危险。
本发明还涉及本发明的化合物在生产药物中的应用，其任选地与一种或多种其它的治疗活性化合物或物质相组合，所述药物能有效地延迟从IGT向II型糖尿病的发展；延迟从II型糖尿病向胰岛素依赖性糖尿病的发展；调节食欲；诱导饱感；预防成功地减肥后体重反弹；或增加能量消耗。
如上所述，本发明的化合物可以与一种或多种其它的治疗活性化合物或物质组合施用或使用。合适的其它化合物或物质可以选自，例如，抗糖尿病药、抗高血脂药、抗肥胖药、抗高血压药和用于治疗糖尿病导致的或与糖尿病有关的并发症的药物。
合适的抗糖尿病药包括胰岛素；胰岛素的衍生物或类似物，包括表现出延长(protract)的或拉长(prolong)活性的衍生物或类似物，例如在这里引作参考的WO95/07931，WO97/31022和WO2005/012347(Novo Nordisk A/S)中公开的那些；GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的衍生物，例如在这里引作参考的WO98/08871(Novo Nordisk A/S)中公开的那些；GLP-1类似物的衍生物，例如在这里引作参考的US 6,458,924(Knudsen等)中公开的那些；以及口服活性降血糖药。
合适的口服活性的降血糖药包括咪唑啉；磺酰脲；双胍；美格替耐(meglitinide)；唑烷二酮；噻唑烷二酮；胰岛素敏化剂；α-葡糖苷酶抑制剂；作用于ATP-依赖性的胰腺β-细胞的钾通道的药物，例如钾通道开启物，例如在这里引作参考的WO97/26265、WO99/03861和WO00/37474(Novo Nordisk A/S)中公开的那些；钾通道开启物，例如ormitiglinide；钾通道阻断剂，例如那格列奈或BTS-67582；胰高血糖素拮抗剂，例如在这里引作参考的WO99/01423和WO00/39088(Novo Nordisk A/S和Agouron Pharmaceuticals，Inc.)中公开的那些；GLP-1激动剂，例如在这里引作参考的WO00/42026(NovoNordisk A/S和Agouron Pharmaceuticals，Inc.)中公开的那些，DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂；PTP酶(蛋白酪氨酸磷酸酶)抑制剂；葡糖激酶活化剂，例如在这里引作参考的WO2004/002481(NovoNordisk)和WO02/08209(Hoffmann La Roche)中公开的那些；参与刺激糖原异生和/或糖原分解的肝酶的抑制剂；葡萄糖摄入调节剂；GSK-3(糖原合酶激酶-3)抑制剂；调节脂类代谢的化合物，例如抗高血脂药和抗血脂药；降低食物摄入的化合物；以及PPAR(过氧化物酶体增殖剂-活化的受体)激动剂和RXR(类维生素A(retinoid)X受体)激动剂，例如ALRT-268、LG-1268或LG-1069。
合适的其它治疗活性化合物的其它实例包括胰岛素或胰岛素类似物；磺酰脲，例如甲苯磺丁脲，氯磺丙脲，妥拉磺脲，格列本脲，格列吡嗪，格列美脲，格列齐特，格列本脲；双胍，例如二甲双胍；美格替耐，例如瑞格列奈或色那列奈/那格列奈。
合适的其它治疗活性物质的其它实例包括噻唑烷二酮胰岛素敏化剂，例如曲格列酮，环格列酮，吡格列酮，罗格列酮，伊沙列酮，达格列酮，恩格列酮，CS-011/CI-1037或T 174，或在这里引作参考的WO97/41097(DRF-2344)、WO97/41119、WO97/41120、WO00/41121和WO98/45292(Dr.Reddy’s Research Foundation)中公开的化合物。
合适的其它治疗活性物质的其它实例包括胰岛素敏化剂，例如GI 262570，YM-440，MCC-555，JTT-501，AR-H039242，KRP-297，GW-409544，CRE-16336，AR-H049020，LY510929，MBX-102，CLX-0940，GW-501516，和在这里引作参考的WO99/19313(NN622/DRF-2725)、WO00/50414、WO00/63191、WO00/63192、WO00/63193(Dr.Reddy’sResearch Foundation)和WO00/23425、WO00/23415、WO00/23451、WO00/23445、WO00/23417、WO00/23416、WO00/63153、WO00/63196、WO00/63209、WO00/63190和WO00/63189(Novo Nordisk A/S)中公开的化合物。
合适的其它治疗活性物质的其它实例包括α-葡糖苷酶抑制剂，例如伏格列波糖，乙格列酯，米格列醇或阿卡波糖；糖原磷酸化酶抑制剂，例如在WO97/09040(Novo Nordisk A/S)中公开的化合物；葡糖激酶活化剂；作用于ATP-依赖性的胰腺β-细胞的钾通道的药物，例如甲苯磺丁脲，格列本脲，格列吡嗪，格列齐特，BTS-67582或瑞格列奈；其它合适的其它治疗活性物质包括抗高血脂药和抗血脂药，例如考来烯胺，考来替泊，氯贝丁酯，吉非贝齐，洛伐他汀，普伐他汀，辛伐他汀，普罗布考或右旋甲状腺素；
适用作其它治疗活性物质的其它试剂包括抗肥胖试剂和食欲调节剂。这样的物质可以选自CART(可卡因安非他明调节的转录物)激动剂，NPY(神经肽Y)拮抗剂，Y2和Y4受体激动剂，MC3(黑皮质素3)激动剂，MC3(黑皮质素3)拮抗剂，MC4(黑皮质素4)激动剂，阿立新拮抗剂，TNF(肿瘤坏死因子)激动剂，CRF(促皮质释放素)激动剂，CRFBP(促皮质释放因子结合蛋白)拮抗剂，urocortin激动剂，β3肾上腺素能激动剂如CL-316243，AJ-9677，GW-0604，LY362884，LY377267或AZ-40140，MC1(黑皮质素1)激动剂，MCH(浓缩黑素细胞的激素)拮抗剂，CCK(缩胆囊肽)激动剂，5-羟色胺再摄入抑制剂(例如氟西汀，赛乐特或西酞普兰)，5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄入抑制剂，5HT(5-羟色胺)激动剂，铃蟾肽激动剂，甘丙肽拮抗剂，生长激素，生长因子例如促乳素或胎盘催乳激素，生长激素释放化合物(生长激素促分泌素)，ghrelin拮抗剂，TRH(促甲状腺激素释放激素)激动剂，UCP 2或3(解偶联蛋白2或3)调节剂，化学解偶联剂，瘦蛋白(leptin)激动剂，DA(多巴胺)激动剂(溴隐亭，doprexin)，脂酶/淀粉酶抑制剂，PPAR调节剂，RXR调节剂，TRβ激动剂，肾上腺素能CNS刺激剂，AGRP(刺鼠相关蛋白)抑制剂，组胺H3受体拮抗剂例如在这里引作参考的WO00/42023、WO00/63208和WO00/64884中公开的那些，exendin-4，GLP-1激动剂和纤毛神经营养因子。
其它合适的抗肥胖药是丁氨苯丙酮(抗抑郁药)，托吡酯(抗惊厥药)，依考匹泮(多巴胺D1/D5拮抗剂)，纳曲酮(阿片样物质拮抗剂)，和肽YY3-36(Batterham等，Nature418，650-654(2002))。
在本发明的方法中用作与本发明的化合物组合使用的其它治疗活性物质的合适的抗肥胖药的一个实施方案是瘦蛋白。
合适的抗肥胖药的另一个实施方案是肽YY3-36。
合适的抗肥胖药的另一个实施方案是5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄入抑制剂，例如西布曲明。
合适的抗肥胖药的其它实施方案是脂酶抑制剂，例如奥利司他。
合适的抗肥胖药的其它实施方案是肾上腺素能CNS刺激剂，例如右旋安非他明，安非他明，芬特明，马吲哚，苯甲曲秦，安非拉酮，芬氟拉明或右旋芬氟拉明。
合适的其它治疗活性化合物的其它实例包括抗高血压药。抗高血压药的实例是β-阻断剂例如烯丙洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔和美托洛尔，ACE(血管紧张肽转换酶)抑制剂例如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、喹那普利和雷米普利，钙通道阻断剂例如硝苯吡啶、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地尔硫和维拉帕米，以及α-阻断剂例如多沙唑嗪、乌拉地尔、哌唑嗪和特拉唑嗪。
在本发明的应用和方法的某些实施方案中，本发明的化合物可以与一种以上上述的合适的其它治疗活性化合物或物质组合施用或使用，例如与下述物质组合二甲双胍和磺酰脲例如格列本脲；磺酰脲和阿卡波糖；那格列奈和二甲双胍；阿卡波糖和二甲双胍；磺酰脲，二甲双胍和曲格列酮；胰岛素和磺酰脲；胰岛素和二甲双胍；胰岛素，二甲双胍和磺酰脲；胰岛素和曲格列酮；胰岛素和洛伐他汀；等。
药物组合物如已经提及的，本发明的一个方面提供了包含本发明化合物的药物组合物(制剂)。这种制剂的适当的实施方案经常含有浓度为10-3mg/ml-200mg/ml(例如10-1mg/ml-100mg/ml)的本发明化合物。本发明的这种制剂的pH范围典型地是2.0-10.0。制剂还可以包含缓冲系统，防腐剂，张力剂，螯合剂，稳定剂和/或表面活性剂。在本发明的一个实施方案中，药物制剂是含水制剂，即包含水的制剂，且术语“含水制剂”在本上下文中通常用于指包含至少50重量％(w/w)水的制剂。制剂典型地是溶液或悬浮液。含水溶液形式的本发明的含水制剂通常包含至少50％(w/w)水。类似地，含水悬浮液形式的本发明的含水制剂通常包含至少50％(w/w)水。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物(制剂)可以是冷冻干燥的(即冷冻干燥的)制剂，其由医师或患者在使用前加入溶剂和/或稀释剂来重配。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物(制剂)可以是干燥的制剂(例如冷冻干燥的或喷雾干燥的)，其无需任何事先溶解即可使用。
在另一个方面，本发明涉及药物组合物(制剂)，其包含本发明的化合物的含水溶液，和缓冲液，其中本发明的化合物以0.1-100mg/ml或以上的浓度存在，且其中该制剂具有约2.0-约10.0的pH。
在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH具有选自下述的值2.0，2.1，2.2，2.3，2.4，2.5，2.6，2.7，2.8，2.9，3.0，3.1，3.2，3.3，3.4，3.5，3.6，3.7，3.8，3.9，4.0，4.1，4.2，4.3，4.4，4.5，4.6，4.7，4.8，4.9，5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，6.5，6.6，6.7，6.8，6.9，7.0，7.1，7.2，7.3，7.4，7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，8.0，8.1，8.2，8.3，8.4，8.5，8.6，8.7，8.8，8.9，9.0，9.1，9.2，9.3，9.4，9.5，9.6，9.7，9.8，9.9和10.0。
在另一个实施方案中，本发明的缓冲药物组合物中的缓冲液可以包含一种或多种选自下述的缓冲物质乙酸钠，碳酸钠，柠檬酸盐，甘氨酰甘氨酸二肽酶，组氨酸，甘氨酸，赖氨酸，精氨酸，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸钠，三(羟基甲基)氨基甲烷(TRIS)，N，N-二(羟乙基)甘氨酸，三(羟甲基)甲基甘氨酸(tricine)，苹果酸，琥珀酸盐，马来酸，富马酸，酒石酸和天冬氨酸。这些具体缓冲剂中的每一种构成本发明的一个可选择的实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物可以包含药学上可接受的防腐剂，例如一种或多种选自下述的防腐剂苯酚，邻甲酚，间甲酚，对甲酚，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，2-苯氧乙醇，对羟基苯甲酸丁酯，2-苯基乙醇，苄醇，氯丁醇，硫柳汞，溴硝丙二醇，苯甲酸，咪脲，氯己定(chlorohexidine)，甲醋吡喃酮钠，氯甲酚，对羟基苯甲酸乙酯，苄索氯铵和chlorphenesine(3对-氯苯氧基丙烷-1，2-二醇)。这些具体防腐剂中的每一种构成本发明的一个可选择的实施方案。在本发明的另一个实施方案中，防腐剂以0.1mg/ml-20mg/ml的浓度存在。在本发明这样的药物组合物的另一个实施方案中，防腐剂以0.1mg/ml-5mg/ml的浓度、5mg/ml-10mg/ml的浓度、或10mg/ml-20mg/ml的浓度存在。防腐剂在药物组合物中的应用是本领域技术人员熟知的。为了方便，在这方面可以参考RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，第20版，2000。
在本发明的另一个实施方案中，制剂还包含张力调节剂，即为了调节本发明的液体制剂(尤其是含水制剂)或重配的冷冻干燥制剂的张力(渗透压)至预期水平的目的而加入的物质，通常这会使产生的最终液体制剂是等渗的或基本上等渗的。合适的张力调节剂可以选自盐(例如氯化钠)，糖和糖醇(例如甘露醇)，氨基酸(例如甘氨酸，组氨酸，精氨酸，赖氨酸，异亮氨酸，天冬氨酸，色氨酸或苏氨酸)，醛糖醇[例如甘油(丙三醇)，1，2-丙二醇(丙二醇)，1，3-丙二醇或1，3-丁二醇]，聚乙二醇(例如PEG 400)和它们的混合物。
可以使用任意的糖，如单-、二-或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖，葡萄糖，甘露糖，山梨糖，木糖，麦芽糖，乳糖，蔗糖，海藻糖，葡聚糖，芽霉菌糖，糊精，环糊精，可溶性淀粉，羟乙基淀粉或羧甲基纤维素钠；在一个实施方案中，可以使用蔗糖。糖醇(源自单-、二-、寡-或多糖的多元醇)包括，例如，甘露醇，山梨醇，肌醇，半乳糖醇，卫矛醇，木糖醇和阿糖醇。在一个实施方案中，使用的糖醇是甘露醇。上述的糖或糖醇可以单独地或组合地使用。对于用量没有固定的限制，只要糖或糖醇可溶于液体组合物(制剂)，且不会不利地影响使用本发明的方法实现的稳定作用。在一个实施方案中，糖或糖醇的浓度是约1mg/ml至约150mg/ml。
在另一个实施方案中，张力调节剂以1mg/ml-50mg/ml，如1mg/ml-7mg/ml、8mg/ml-24mg/ml或25mg/ml-50mg/ml的浓度存在。含有上面具体指出的任一种张力调节剂的本发明药物组合物构成本发明的一个实施方案。张力调节剂在药物组合物中的应用是本领域技术人员熟知的。为了方便，可以参考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
在本发明药物组合物(制剂)的另一个实施方案中，制剂还包含螯合剂。合适的螯合剂可以选自，例如，乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和天冬氨酸的盐，和它们的混合物。螯合剂的浓度合适地是0.1mg/ml-5mg/ml，如0.1mg/ml-2mg/ml或2mg/ml-5mg/ml。含有上面具体指出的任一种螯合剂的本发明药物组合物构成本发明的一个实施方案。螯合剂在药物组合物中的应用是本领域技术人员熟知的。为了方便，可以参考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
在本发明药物组合物(制剂)的另一个实施方案中，制剂还包含稳定剂。稳定剂在药物组合物中的应用是本领域技术人员熟知的。为了方便，可以参考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
更具体地，特别有用的本发明组合物包括稳定化的液体药物组合物，它的治疗活性组分包括可能在液体药物制剂储存过程中表现出聚集物(aggregate)形成的寡-或多肽。″聚集物形成″指由寡-或多肽分子之间的物理相互作用导致的寡聚物的形成，其可以保持可的或从溶液中沉淀出来可见的大聚集物。术语″储存过程中″指液体药物组合物或制剂在制备出来后通常并不立即施用给对象的事实。然而，在制备后，将它包装以便储存，无论以液体形式，冷冻状态，还是以用于以后重配成液体形式或适合施用给对象的其它形式的干燥形式。″干燥形式″指当通过冷冻干燥(即冷冻干燥；见例如，Williams和Polli(1984)J.ParenteralSci.Technol.3848-59)、通过喷雾干燥[见例如，Masters(1991)inSpray-Drying Handbook(第5版Longman Scientific and Technical，Essex，U.K.)，pp.491-676；Broadhead等(1992)Drug Devel.Ind.Pharm.181169-1206；和Mumenthaler等(1994)Pharm.Res.1112-20]、或通过风干[见例如，Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology25459-470；和Roser(1991)Biopharm.447-53]干燥液体药物组合物或制剂时得到的产物。储存液体药物组合物过程中的寡-或多肽的聚集物形成会不利地影响该肽的生物活性，导致药物组合物的治疗效果损失。而且，聚集物形成可以造成其它问题，例如，当使用输注系统施用含有寡-或多肽的药物组合物时输液管、膜或泵的堵塞。
本发明的药物组合物还可以包含足以减少储存组合物过程中寡-或多肽的聚集物形成的量的氨基酸碱。″氨基酸碱″指氨基酸，或氨基酸的组合，其中任何特定的氨基酸以它的游离碱形式或它的盐形式存在。当使用氨基酸的组合时，所有氨基酸都可以以它们的游离碱形式存在，都可以以它们的盐形式存在，或有些以它们的游离碱形式存在，而其它的以它们的盐形式存在。在一个实施方案中，用于制备本发明的组合物的氨基酸是携带带电荷的侧链的那些，如精氨酸，赖氨酸，天冬氨酸和谷氨酸。特定氨基酸(例如甲硫氨酸，组氨酸，精氨酸，赖氨酸，异亮氨酸，天冬氨酸，色氨酸或苏氨酸，和它们的混合物)的任何立体异构体(即L，D，或它们的混合物)或这些立体异构体的组合可以存在于本发明的药物组合物中，只要该特定氨基酸以它的游离碱形式或它的盐形式存在。在一个实施方案中，使用氨基酸的L-立体异构体。也可以用这些氨基酸的类似物配制本发明的组合物。″氨基酸类似物″指天然存在的氨基酸的衍生物，其会实现减少储存本发明的液体药物组合物过程中寡-或多肽的聚集物形成的预期作用。合适的精氨酸类似物包括，例如，氨基胍，鸟氨酸和N-单乙基-L-精氨酸。合适的甲硫氨酸类似物包括乙硫氨酸和丁硫氨酸，且合适的半胱氨酸类似物包括S-甲基-L-半胱氨酸。象氨基酸本身一样，氨基酸类似物以它们的游离碱形式或它们的盐形式掺入本发明的组合物中。在本发明的另一个实施方案中，氨基酸或氨基酸类似物以足以预防或延迟寡-或多肽的聚集的浓度掺入。
在本发明的一个具体的实施方案中，当起治疗剂作用的寡-或多肽是包含至少一个对氧化敏感的甲硫氨酸残基的肽时，可以将甲硫氨酸(或另一种含硫的氨基酸或氨基酸类似物)掺入本发明的组合物中，以抑制甲硫氨酸残基氧化成甲硫氨酸亚砜。术语″抑制″在本上下文中指甲硫氨酸-氧化的种类随时间的积累最小化。甲硫氨酸氧化的抑制导致寡-或多肽增加在它的合适的分子形式的保持。可以使用甲硫氨酸的任何立体异构体(L或D)或其组合。加入的量应当是足以抑制甲硫氨酸残基的氧化的量，使得甲硫氨酸亚砜的量是管理机构可接受的。通常，这意味着存在不超过约10％-约30％的亚砜化的甲硫氨酸的寡-或多肽的形式。通常，这可以通过将甲硫氨酸掺入组合物中，使得加入的甲硫氨酸与甲硫氨酸残基的比为约1∶1-约1000∶1，如约10∶1-约100∶1来实现。
在本发明的另一个实施方案中，制剂还包含选自高分子量聚合物和低分子量化合物的稳定剂。因而，例如，稳定剂可以选自下述物质，如聚乙二醇(例如PEG 3350)，聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯烷酮，羧基-/羟基纤维素和其衍生物(例如HPC，HPC-SL，HPC-L或HPMC)，环糊精，含硫的物质如单硫代甘油，巯基乙酸和2-甲基硫代乙醇，和各种盐(例如氯化钠)。含有上面具体指出的任一种稳定剂的本发明的药物组合物构成本发明的一个实施方案。
本发明的药物组合物也可以包含其它稳定剂，其可以进一步加强其中的治疗活性的寡-或多肽的稳定性。在本发明的上下文中特别感兴趣的稳定剂包括但不限于甲硫氨酸和EDTA，其可以保护肽免于甲硫氨酸氧化；和表面活性剂，尤其是非离子型表面活性剂，其会保护多肽免于与冻融或机械剪切有关的聚集或降解。
因而，在本发明的另一个实施方案中，药物制剂包含表面活性剂，尤其是非离子型表面活性剂。其实例包括乙氧基化的蓖麻油，聚乙二醇化的甘油酯，乙酰基化的单甘油酯，山梨聚糖脂肪酸酯，聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(例如泊洛沙姆如PluronicF68，泊洛沙姆188和407，Triton X-100)，聚氧乙烯脱水山梨聚糖脂肪酸酯，聚氧乙烯和聚乙烯衍生物如烷基化的和烷氧基化的衍生物(吐温，例如吐温-20，吐温-40，吐温-80和Brij-35)，单甘油酯或其乙氧基化的衍生物，二甘油酯或其聚氧乙烯衍生物，醇，甘油，凝集素和磷脂(例如磷脂酰基-丝氨酸，磷脂酰基-胆碱，磷脂酰基-乙醇胺，磷脂酰基-肌醇，二磷脂酰基-甘油和鞘磷脂)，磷脂(例如二棕榈酰基磷脂酸)和溶血磷脂(例如棕榈酰基溶血磷脂酰基-L-丝氨酸，和乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)的衍生物，和溶血磷脂酰基和磷脂酰胆碱的烷基、烷基酯和烷基醚衍生物，例如溶血磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱的月桂酰基和肉豆蔻酰基衍生物，和极性头基团的修饰，即胆碱、乙醇胺、磷脂酸、丝氨酸、苏氨酸、甘油、肌醇和带正电荷的DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP、溶血磷脂酰基丝氨酸和溶血磷脂酰基苏氨酸，以及甘油磷脂(例如脑磷脂)，甘油糖脂(例如吡喃半乳糖苷)，神经鞘氨糖脂(例如神经酰胺，神经节苷酯)，十二烷基磷酸胆碱，母鸡蛋溶血卵磷脂，夫西地酸衍生物(例如牛磺二氢甾酸霉素钠等)，长链脂肪酸(例如油酸或辛酸)和其盐，酰基肉毒碱和衍生物，赖氨酸、精氨酸或组氨酸的Nα-酰基化的衍生物，或赖氨酸或精氨酸的侧链酰基化的衍生物，包含赖氨酸、精氨酸或组氨酸和中性或酸性氨基酸的任意组合的二肽的Nα-酰基化的衍生物，包含中性氨基酸和2个带电荷的氨基酸的任意组合的三肽的Nα-酰基化的衍生物，DSS(多库酯钠，CAS登记号[577-11-7])，多库酯钙，CAS登记号[128-49-4])，多库酯钾，CAS登记号[7491-09-0])，SDS(十二烷基硫酸钠或月桂基硫酸钠)，辛酸钠，胆酸或其衍生物，胆汁酸和其盐和甘氨酸或牛磺酸缀合物，熊去氧胆酸，胆酸钠，去氧胆酸钠，牛磺胆酸钠，甘胆酸钠，N-十六烷基-N，N-二甲基-3-铵基-1-丙烷磺酸酯，阴离子型(烷基-芳基-磺酸酯)单价表面活性剂，两性离子型表面活性剂(例如N-烷基-N，N-二甲基铵基-1-丙烷磺酸酯，3-胆氨基-1-丙基二甲基铵基-1-丙烷磺酸酯，阳离子型表面活性剂(季铵碱)(例如鲸蜡基-三甲基铵溴化物，鲸蜡基吡啶氯化物)，非离子型表面活性剂(例如十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷)，poloxamines(例如Tetronic’s)，它们是将环氧丙烷和环氧乙烷依次添加到乙二胺上产生的四功能嵌段共聚物。表面活性剂也可以选自咪唑啉衍生物和它们的混合物。含有上面具体指出的任一种表面活性剂的本发明的药物组合物构成本发明的一个实施方案。
表面活性剂在药物组合物中的应用是本领域技术人员熟知的。为了方便，可以参考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
在本发明的药物组合物(制剂)中也可以存在其它成分。这样的其它成分可以包括，例如，润湿剂，乳化剂，抗氧化剂，填充剂，金属离子，油性介质，蛋白(例如人血清白蛋白，明胶或其它蛋白)以及两性离子型物质(例如氨基酸，如甜菜碱，牛磺酸，精氨酸，甘氨酸，赖氨酸或组氨酸)。这样的其它成分当然不会不利地影响本发明的药物制剂的总稳定性。
可以将含有根据本发明的化合物的药物组合物施用给需要这样的治疗的患者的一个或多个部位，例如在局部部位(例如皮肤和粘膜部位)，在环绕吸收的部位(例如通过动脉、静脉或心脏内给药)，和在参与吸收的部位(例如在皮肤中、在皮下、在肌肉中或在腹中)。
可以通过几种给药途径向需要的患者施用根据本发明的药物组合物。它们包括，例如，舌的，舌下的，颊的，在口腔中的，口服的，在胃和肠中，鼻的，肺的(例如通过细支气管和气泡或其组合)，表皮的，真皮的，透皮的，阴道的，直肠的，眼睛的(例如通过结膜)，输尿管的和肠胃外的。
本发明的组合物可以以多种剂型施用，例如以溶液、悬浮液、乳剂、微乳剂、复合型乳剂、泡沫、药膏、糊剂、硬膏剂、软膏剂、片剂、包衣片剂、洗剂、胶囊剂(例如硬明胶胶囊剂或软明胶胶囊剂)、栓剂、直肠胶囊剂、滴剂、凝胶剂、喷雾剂、粉末、气雾剂、吸入剂、滴眼剂、眼膏、洗眼剂、阴道栓剂、阴道洗剂、阴道软膏剂、注射溶液、原位-转化溶液(例如原位胶凝，原位安装，原位沉淀或原位结晶)、输注溶液或植入物。
本发明的组合物还可以化合或结合(例如，通过共价的、疏水的或静电的相互作用)到药物载体、药物递送系统或高级药物递送系统中，以便进一步提高本发明的化合物的稳定性、提高生物利用度、提高溶解度、降低副作用、实现本领域技术人员熟知的时间治疗、和提高患者的依从性，或其任意组合。载体、药物递送系统或高级药物递送系统的实例包括但不限于聚合物，例如纤维素和衍生物；多糖，例如葡聚糖和衍生物，淀粉和衍生物；聚(乙烯醇)；丙烯酸酯和异丁烯酸酯聚合物；聚乳酸和聚乙醇酸及其嵌段共聚物；聚乙二醇；载体蛋白，例如白蛋白；凝胶，例如热胶凝系统，如本领域的技术人员熟知的嵌段共聚系统；微粒；脂质体；微球；纳米颗粒；液晶和其分散系；L2相和本领域技术人员熟知的它在脂-水系统中的相行为的分散系；聚合微粒；复合型乳剂(自乳化，自微乳化)；环糊精和其衍生物；以及树枝状大分子。
本发明的组合物可以用于配制经肺施用本发明化合物的固体、半固体、粉末和溶液，其中使用，例如压力定量吸入器(metered dose inhaler)，干粉吸入器或喷雾器，所有这些装置都是本领域技术人员熟知的。
本发明的组合物可以用于配制控制释放、持续释放、延长的、迟缓的或缓释药物递送系统。因而，本发明的组合物在本领域的技术人员熟知的肠胃外控制释放和持续释放系统(两种类型的系统都会导致需要的给药次数的多倍减少)的配制中是有价值的。
特别有价值的是皮下给药的控制释放和持续释放系统。不限制本发明的范围，有用的控制释放系统和组合物的实例是含有水凝胶，油性凝胶、液晶、聚合微粒、微球或纳米颗粒的那些。
生产用于本发明的组合物中的控制释放系统的方法包括但不限于，结晶，冷凝，共结晶，沉淀，共沉淀，乳化，分散，高压匀浆，包囊，喷雾干燥，微囊化，凝聚，相分离，溶剂蒸发产生微球，挤压和超临界流体过程。在本上下文中一般参考Handbook of PharmaceuticalControlled Release(Wise，D.L.，ed.Marcel Dekker，New York，2000)，和Drugs and the Pharmaceutical Sciences，vol.99ProteinFormulation and De-livery(MacNally，E.J.，ed.Marcel Dekker，NewYork，2000)。
借助于注射器，例如笔装置形式的注射器，通过皮下的、肌肉内的、腹膜内的或静脉内的注射，可以进行肠胃外给药。或者，可以借助于输注泵进行肠胃外给药。另一个选择是施用本发明的组合物，它是鼻或肺喷雾剂形式的液体(典型地，含水的)溶液或悬浮液。作为另一个选择，本发明的药物组合物可以适于透皮给药(例如通过无针注射或通过贴剂，如离子电渗疗法贴剂)或透粘膜的(例如颊的)给药。
术语“稳定化的制剂”指具有提高的物理稳定性、提高的化学稳定性或提高的物理和化学稳定性的制剂。在含有寡-或多肽的制剂的上下文中，术语“物理稳定性”指，作为暴露于热-机械应激(stress)和/或与失稳的界面和表面(例如疏水表面和界面)相互作用的结果，肽形成无生物活性的和/或不溶的聚集物的趋势。在将装在合适的容器(例如药筒或小瓶)中的制剂在不同温度暴露于机械/物理应激(例如搅拌)不同时间段后，通过视觉检查和/或浊度测量，可以评价含水蛋白制剂的物理稳定性。在黑背景下，在强聚焦光下进行制剂的视觉检查。通过视觉评分分级浑浊度，例如在0-3的量表(其中，没有表现出浊度的制剂相当于视觉评分0，而在白天表现出可视浊度的制剂相当于视觉评分3)，表征制剂的浊度。当在白天表现出可视浊度时，通常认为制剂就聚集而言是物理上不稳定的。或者，通过本领域技术人员熟知的简单浊度测量可以评价制剂的浊度。使用肽的构象状态的分光试剂或探针，也可以评价含水寡-或多肽制剂的物理稳定性。探针优选地是优先结合寡-或多肽的非天然构象异构体的小分子。这类小分子分光探针的一个实例是硫磺素T。硫磺素T是一种已经广泛地用于检测淀粉状蛋白纤丝的荧光染料。在有纤丝以及可能的其它构型存在下，当结合纤丝形式时，硫磺素T会产生在约450nm的新的最大激发，和在约482nm的增强的发射。未结合的硫磺素T在讨论波长下基本上是无荧光的。
其它小分子可以用作肽结构从天然状态至非天然状态的变化的探针。实例是“疏水贴片”探针，其优先结合多肽的暴露的疏水贴片。疏水贴片通常埋藏在天然状态的多肽的三级结构的内部，但是随着它开始展开或变性变成暴露的。这样的小分子的分光探针(spectroscopic probe)的实例是芳族的疏水染料，如蒽，吖啶，菲咯啉等。其它分光探针是氨基酸的金属复合物，如疏水氨基酸，例如苯丙氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，甲硫氨酸，缬氨酸，等的钴复合物。
如本文所使用的药物制剂的术语“化学稳定性”指寡-或多肽结构的化学共价变化，其可以导致与原始分子相比具有可能更低的生物效力和/或可能提高的免疫原性的化学降解产物的形成。根据起始分子的类型和性质和它暴露的环境，可以形成不同的化学降解产物。如本领域技术人员熟知的，在储存和使用寡-或多肽制剂的过程中，最可能地，不会完全避免化学降解的消除，且经常看到逐渐增多量的化学降解产物。经常遇到的降解过程是脱酰胺，在该过程中，谷氨酰基或天冬酰胺酰基残基的侧链酰氨基团被水解，形成游离的羧酸。其它降解途径包含更高分子量转化产物的形成，其中原料的两个或多个分子通过转酰胺基作用和/或二硫键相互作用彼此共价结合，导致共价结合的二聚物、寡聚物或聚合物降解产物的形成(见例如，Stability of Protein Pharmaceuticals，Ahern.T.J.& Manning M.C.，Plenum Press，New York 1992)。作为化学降解的另一种变体，可以提及氧化(例如，甲硫氨酸残基的氧化)。通过在暴露于不同环境条件后的不同时间点测量化学降解产物的量(其中降解产物的形成经常会被例如升高的温度所加速)，可以评价制剂的化学稳定性。经常使用各种色谱技术(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)，依赖于分子大小和/或电荷来分离降解产物，确定每种单独的降解产物的量。
因此，如上所述，“稳定化的制剂”指具有提高的物理稳定性、提高的化学稳定性或提高的物理和化学稳定性的制剂。通常，在达到失效期之前，在使用和储存过程中(按照推荐的使用和储存条件)，药物组合物(制剂)必须是稳定的。
本发明的药物组合物(制剂)优选地应当稳定超过2周使用和超过2年储存，更优选地超过4周使用和超过2年储存，理想地，超过4周使用和超过3年储存，且最优选地超过6周使用和超过3年储存。
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本发明包括适用的法律允许的所附权利要求阐述的主题的所有改进和等同方案。
实施例使用的缩写的列表AcOH 乙酸BSA 牛血清白蛋白DCM 二氯甲烷DIC 二异丙基碳二亚胺DIPEA乙基二异丙基胺DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶DMEM Dulbecco氏改进的Eagle培养基DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亚砜EGTA 1，2-二(2-氨基乙氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸
FCS 胎牛血清Fmoc9-芴基甲氧基羰基HEPES 2-[4-(2-羟乙基)-哌嗪-1-基]-乙烷磺酸HOAt1-羟基-7-氮杂苯并三唑HOBt1-羟基苯并三唑HSA 人血清白蛋白MeCN乙腈MeOH甲醇α-MSH α-形式的促黑激素MTX 甲氨蝶呤NEt3三乙胺NMP N-甲基吡咯烷酮PBS 磷酸盐缓冲盐水PEI 聚乙烯亚胺PhMe甲苯PyBop (苯并三唑-1-基氧)三吡咯烷子基-六氟磷酸盐使用标准的偶联和脱保护步骤，本领域的技术人员可以合成本发明的所有化合物。在“The Fine Art Of Solid Phase Synthesis”，2002/3 Catalog，Novabiochem中，可以找到所有必要的工具和合成方法的说明，包括肽合成的标准缩写。
在下面给出的实施例中，Rt值是保留时间，质量值是使用下述HPLC-MS装置(LCMS)之一得到的并由质谱(MS)检测器检测到的值。
LCMS(系统1)Agilent 1100 Series，电喷雾；柱Waters XTerraC185μm3.0×50mm；含有0.05％TFA的水/乙腈；梯度5％→100％乙腈，从0至6.75min，洗脱直到t＝9.0min；流速1.5ml/min.
LCMS(系统2)Sciex API-150 Ex Quadrupole MS，电喷雾，m/z＝200至m/z＝1500；柱Waters XTerraMS C185μm 3.0×50mm；用溶液A(含0.1％TFA的水)和溶液B(含0.08％TFA的乙腈)的混合物洗脱；梯度5％→20％溶液B，从1.0至3.0分钟，20％→50％溶液B，从3.0至16.0分钟，50％→90％溶液B，从16.0至18.0分钟，洗脱直到t＝18.0min；流速1.5ml/min.
LCMS(系统3)Sciex API-100 Quadrupole MS，电喷雾；m/z＝300至m/z＝2000；柱Waters XTerraC18 5μm 3.0×50mm；用溶液A(含有0.05％TFA的水)和溶液B(含有0.05％TFA的乙腈)的混合物洗脱；梯度5％→90％溶液B，从0至7.5分钟；流速1.5ml/min包括环化步骤的合成方法的一个典型实施例如下实施例12-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 实施例1的步骤A受保护的肽树脂Fmoc-c[Glu-Hyp(tBu)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Lys]-NH-Rink连接物-聚苯乙烯将Fmoc-Rink树脂(4-(2′，4′-二甲氧基苯基-Fmoc-氨基甲基)-苯氧基聚苯乙烯树脂，Bachem D-2080，Lot 514460；0.47mmol/g)装入2个60ml具有釉料的特氟隆反应器中(每个反应器4.256g，2.0mmol)。用35ml DCM洗涤每个反应器中的树脂。
Fmoc的去除用20％哌啶于NMP中的溶液(30ml)振摇树脂20min，然后用NMP/DCM 1∶1(5×30ml)洗涤。
与Fmoc-Lys(Mtt)-OH酰化在一个单独的玻璃小瓶中，将Fmoc-氨基酸(12.0mmol)与NMP(15ml)、DCM(27ml)和1M 1-羟基苯并三唑(HOBt)于NMP中的溶液(12.0ml，12.0mmol)相混合。向得到的澄清溶液中，迅速加入DIC(1.872ml，12.0mmol)，然后立即振摇溶液。将溶液在密闭小瓶中静置30min。将30ml(6.0mmol HOBt酯)该溶液加入每个反应器，振摇树脂2小时。加入乙基二异丙基胺(DIPEA)(每个反应器0.514ml，2.0mmol)，将混合物振摇18h。用NMP/DCM 1∶1(4×30ml)洗涤树脂。
Fmoc的去除如上所述与Fmoc-Trp(Boc)-OH酰化在一个单独的玻璃小瓶中，将Fmoc-氨基酸(12.0mmol)与NMP(15ml)、DCM(27ml)和1M HOBt-NMP溶液(12.0ml，12.0mmol)相混合。向得到的澄清溶液中，迅速加入DIC(1.872ml，12.0mmol)，然后立即振摇溶液。将溶液在密闭小瓶中静置30min。将30ml(6.0mmol HOBt酯)该溶液加入每个反应器，振摇树脂21h。滤出液体，并用NMP/DCM 1∶1(4×30ml)洗涤树脂。
以类似的方式，将下面的氨基酸依次结合到树脂上Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-Hyp(tBu)-OH，和Fmoc-Glu(2-苯基异丙基氧)-OH。使用替代HOBt的HOAt、和DIPEA(在HOAt酯形成后，每个反应器加入2.0mmol)，进行与Fmoc-Glu(2-苯基异丙基氧)-OH的偶联。用DCM充分地洗涤得到的Fmoc-保护的树脂。
Lys和Glu的选择性侧链脱保护用2％TFA和3％三异丙基硅烷于DCM中的溶液(30ml)振摇树脂10分钟，滤出液体。将该方法再重复8次。用DCM(4×30ml)、10％DIPEA于DCM中(2×30ml)和DCM(2×30ml)洗涤树脂。
Lys和Glu的侧链环化在一个单独的玻璃小瓶中，使PyBOP(6.246g＝12.0mmol)与1M HOBt-NMP溶液(12.0ml＝12.0mmol)、DCM(30ml)和NMP(18ml)混合。向每个反应器中加入30ml(含有6.0mmol PyBOP/HOBt)该溶液，随后加入DIPEA(2.054ml＝12.0mmol)。振摇树脂18小时。滤出液体，并用NMP/DCM 1∶1(4×30ml)洗涤树脂。
未酰基化的氨基的帽化用Boc酐(12mmol/反应器)于DCM(30ml/反应器)中的溶液振摇每种树脂1h。滤出液体，并用DCM(3×30ml)、DCM/MeOH 2∶1(2×30ml)、THF(4×30ml)和DCM(3×30ml)洗涤树脂。
此举产生13.92g树脂，其相当于假设完全反应时假定的最大负荷0.29mmol/g。
实施例1的步骤B2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2给10ml具有釉料的特氟隆反应器装载树脂Fmoc-c[Glu-Hyp(tBu)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Lys]-NH-Rink连接物-聚苯乙烯(0.345g，理论上0.10mmol，通过上述的步骤A得到)。用DCM(3ml)洗涤树脂。
Fmoc的去除用20％哌啶于NMP中的溶液(3.5ml)振摇树脂20min，然后用NMP/DCM 1∶1(6×4ml)洗涤。
与Fmoc-Nle-OH酰化在一个单独的玻璃小瓶中，将Fmoc-氨基酸(0.5mmol)与NMP(0.65ml)、DCM(1.15ml)和1M HOBt-NMP溶液(0.5ml，0.5mmol)相混合。向得到的澄清溶液中迅速加入DIC(0.156ml，0.5mmol)，然后立即振摇溶液。将溶液在密闭小瓶中静置50min，然后加入树脂。将混合物振摇90min。滤出液体，并用NMP/DCM 1∶1(4×4ml)洗涤树脂。
以类似的方式，将下述的羧酸依次结合到树脂上Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO2H，和十六烷酸。最后，用NMP/DCM 1∶1(6×3ml)、DCM/MeOH 2∶1(2×3ml)、THF(2×3ml)和DCM(3×3ml)洗涤树脂。
从树脂断裂(cleavage)用含有TFA(95体积-％)、三异丙基硅烷(2.5体积-％1)和水(2.5体积-％)的预混溶液(4ml)振摇树脂2h。过滤混合物，并将滤液收集到玻璃小瓶中。用2×3ml DCM/TFA 2∶1洗涤树脂，并收集滤液。浓缩合并的滤液溶液，产生红色油。
用醚沉淀用二乙醚(30ml)处理油状残余物，产生固体沉淀。离心后去除醚相。再次用二乙醚(30ml)洗涤固体残余物。离心并去除醚相后，使固体残余物静置过夜，以去除剩余的二乙醚。
纯化将从醚沉淀出的粗产物溶解于乙腈(8ml)、乙酸(0.5ml)和水的混合物中，得到约21ml总体积。过滤得到的暗色液体，然后将澄清的滤液注射进Gilson制备HPLC装置中。用43％至55％乙腈梯度的含有0.1％TFA的水/乙腈进行洗脱。将洗脱液分别收集为5ml(峰级分)或12ml(非峰级分)的级分。通过分析HPLC检查相关的级分。混合含有纯目标肽的级分，减压浓缩，产生无色溶液。将其用去离子水稀释，并用1M含水HCl(0.6ml)处理。将得到的澄清溶液分配到玻璃小瓶中。给瓶子盖上Millipore玻璃纤维预过滤器。冻干3天，得到白色固体状的肽盐酸盐(36.2mg，19％产率)。
分析HPLC(Waters Symmetry300 C18，5μm，3.9×150mm；42℃；含有0.05％TFA的水/乙腈；梯度5％→95％乙腈，从0至15min；流速1ml/min)tR＝13.77min(在UV 214和254nm，98％纯度)LCMS(系统1)Rt＝4.07min；((m+2)/2)＝934.
可以以类似于实施例1的化合物的方式得到的本发明的其它化合物的实例是下面的实施例2-27的化合物。下面描述了在合成实施例8、10、16、18、19和21-27的标题化合物时使用的结构单元的合成。
实施例2十六烷酰基-Gly-Thr-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统1)Rt＝4.21min；((m+2)/2)＝862。
实施例3十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝14.52min；((m+2)/2)＝868。
实施例4十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Dab-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统1)Rt＝13.18min；((m+2)/2)＝868。
实施例5十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-氨基乙基)酰胺 实施例5的步骤A4-(([2-氨基-6-((二苯基-对甲苯基-甲基)-氨基}-己酰基]-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-氨基}-甲基]-3-甲氧基-苯氧基)-乙基聚苯乙烯还原性胺化向1.0g 2-(4-甲酰基-3-甲氧基苯氧基)乙基聚苯乙烯(NovaBiochem)中加入4ml 1M N-Boc-乙二胺于NMP中的溶液和4ml 1M氰基硼氢化钠于NMP/甲醇(1∶1)中的溶液。将树脂轻轻搅拌10分钟，加入0.930ml冰乙酸。在25℃轻轻搅拌反应物16小时。用1×10ml MeOH、2×10ml 5％DIPEA于NMP中的溶液和2×10ml NMP洗涤树脂30分钟。
Fmoc-Lys(Mtt)-OH与树脂结合的胺的偶联将4ml 0.5MFmoc-Lys(Mtt)-OH/HOAt于NMP中的溶液与4ml 0.45M HBTU于DMF中的溶液和2ml 2M DIPEA溶液相混合。将受保护的氨基酸预活化10min，然后将混合物加入树脂。在25℃进行反应16小时。通过加入0.5ml纯乙酸酐，将树脂帽化30min。最后，用3×10ml NMP和10×10ml DCM洗涤树脂。
Fmoc-保护基的去除用10ml 20％哌啶于NMP中的溶液处理树脂分别5和15min，随后用6×10ml NMP洗涤。
实施例5的步骤B十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-氨基乙基)酰胺从步骤A得到的树脂，以与实施例1所述类似的方式制备肽。
实施例5的LCMS(系统2)Rt＝13.30min；((m+2)/2)＝883。
实施例6十四烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2实施例7十八烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2实施例84-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 实施例9十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Dap-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 实施例104-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Dap-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统3)Rt＝4.26min；((m+2)/2)＝928。
实施例11十四烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2实施例12十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2实施例13十八烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2实施例14十六烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2实施例15十八烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2
实施例164-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 实施例172-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 实施例184-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统3)Rt＝4.22min；((m+2)/2)＝908。
实施例194-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2 LCMS(系统1)Rt＝4.43min；((m+2)/2)＝911。
实施例20十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2 LCMS(系统1)Rt＝4.34min；((m+2)/2)＝858。
实施例214-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝15.14min；((m+2)/2)＝965。
实施例224-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝15.25min；((m+2)/2)＝986。
实施例234-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝15.30min；((m+2)/2)＝950。
实施例244-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝15.15min；((m+2)/2)＝986。
实施例254-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2
LCMS(系统2)Rt＝15.43min；((m+2)/2)＝971。
实施例264-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝14.94min；((m+2)/2)＝950。
实施例274-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMS(系统2)Rt＝15.41min；((m+2)/2)＝1006。
用于合成实施例8、10、16、18、19和21-27的标题化合物的4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酸的制备 该结构单元的合成以前已经记载在WO2004/099246(Novo NordiskA/S)中。简而言之，从商业上可得到的4-氨磺酰基丁酸制备4-氨磺酰基丁酸甲酯，并在4-二甲基氨基吡啶存在下，与棕榈酰氯酰化。分离得到的酰基氨苯磺胺(sulfoamide)。与氢氧化钠皂化并重结晶，得到4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酸。
药理学方法测定(I)-使用随意饲喂的大鼠模型，用MC4类似物进行食欲功效测试的实验方法在实验中使用从丹麦的M&B Breeding and Research Centre A/S得到的TAC∶SPRD大鼠或Wistar大鼠。在实验开始时，大鼠的体重为200-250g。大鼠在实验开始前的至少10-14天抵达，体重180-200g。在8只大鼠的组中测试化合物的每个剂量。每组测试包括8只大鼠的介质组。
当动物抵达时，将它们各自圈养在颠倒的光/暗周期中(上午7:30关灯，下午7:30开灯)，即白天关灯，且在夜间开灯。由于大鼠通常在熄灯时开始食物摄入，且在晚上吃掉它们每日的大部分食物摄入，该安排可以导致当熄灯时已经将食物摄入的起始时间改变为上午7:30。在10-14天的适应阶段，大鼠可以自由接近食物和水。在该阶段，处理动物至少3次。在大鼠的住所笼中进行实验。根据体重将大鼠随机地分成不同的处理组(n＝8)，随后立即给药。在上午7:00和7:45之间，根据体重给它们腹膜内(ip)、口服(po)或皮下(sc)施用1-3mg/kg溶液。记录每组的给药时间。给药后，让大鼠返回它们的住所笼，它们在这里摄取食物和水。分别记录食物消耗，每隔7小时记录1小时，然后在24小时后，并且有时在48小时后。在实验阶段的结束时，处死动物。
将各数据记录到Microsoft excel表格中。使用关于选出值(outlier)的Grubbs统计评价检验后，排除逸出值，使用GraphPadPrism程序将结果绘图。
测定(II)-使用AlphaScreenTMcAMP检测试剂盒进行黑皮质素受体3和5(MC3和MC5)cAMP功能测定分别在稳定表达MC3和MC5受体的细胞(HEK293或BHK细胞)上，进行MC3和MC5受体的cAMP测定。通过PCR，从cDNA克隆受体，并插入到pcDNA 3表达载体中。使用1mg/ml G418选择稳定的克隆。
用PBS洗涤约80-90％汇合的细胞3次，用凡尔生(Versene)从板中提起，并在PBS中稀释。然后将它们在1300rpm离心2分钟，去除上清液。用刺激缓冲液洗涤细胞2次，重新悬浮到刺激缓冲液中，至终浓度为1×106或2×106细胞/ml。将25μl细胞悬浮液加入含有25μl实验化合物或参照化合物(都在刺激缓冲液中稀释)的微量滴定板中。在设定至低速振摇的板式摇床上，在室温(RT)温育滴定板30分钟。通过加入25μl带有抗-cAMP的受体珠终止反应，2分钟后，向每个孔加入50μl在溶胞(lysis)缓冲液中的带有生物素化的cAMP的供体珠。然后用塑料密封滴定板，振摇30分钟，静置过夜，然后在AlphaTM微量板读数器中计数。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPadTMSoftware，USA)，通过非线性回归分析剂量/反应曲线(最少6点)计算EC50值。以nM为单位表达所有结果。
为了检测在MC3功能性cAMP测定中的拮抗活性，用3nMα-MSH刺激MC3受体，通过增加潜在拮抗剂的量进行抑制。将拮抗剂的IC50值定义为抑制MC3刺激达50％的浓度。
测定(III)-黑皮质素受体4(MC4)cAMP测定用潜在的MC4激动剂刺激能表达MC4受体的BHK细胞，使用FlashPlatecAMP测定(NENTMLife Science Products目录号SMP004)，确定cAMP的刺激程度。
通过将编码的MC4受体的cDNA转染进BHK570/KZ10-20-48，并选择表达MC4受体的稳定克隆，可以制备表达MC4受体的BHK细胞。MC4受体cDNA以及表达MC4受体的CHO细胞系均可以从EuroscreenTM购得。细胞生长在DMEM、10％FCS、1mg/ml G418、250nM MTX和1％青霉素/链霉素中。
用PBS洗涤约80-90％汇合的细胞3次，用凡尔生从板中提起，并在PBS中稀释。然后将它们在1300rpm离心2分钟，去除上清液。用刺激缓冲液洗涤细胞2次，重新悬浮到刺激缓冲液中，至终浓度为0.75×106细胞/ml(其消耗7ml/96孔微量滴定板)。将50μl细胞悬浮液加入至含有50μl实验化合物或参照化合物(都在H2O中稀释)的Flash Plate。振摇混合物5分钟，在室温静置25分钟。通过向每个孔加入100μl检测混合物(检测混合物＝11ml检测缓冲液+100μl(约2μCi)cAMP[125I]示踪剂)终止反应。然后用塑料密封滴定板，振摇30分钟，静置过夜(或2小时)，然后在Topcounter中计数(2分钟/孔)。通常，实验方法如Flash Plate试剂盒-操作手册(FlashPlatecAMP测定(NENTMLife Science Products目录号SMP004))所述。但是，在0.1％HSA和0.005％吐温TM20中而不是在刺激缓冲液中稀释cAMP标准品。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPadTMSoftware，USA)，通过非线性回归分析剂量/反应曲线(最少6点)计算EC50值。以nM为单位表达所有结果。
测定(IV)-黑皮质素受体1(MC1)结合测定在稳定表达MC1受体的BHK细胞膜上进行MC1受体结合测定。该测定的总体积是250μl；25μl125NDP-α-MSH(终浓度22pM)，25μl实验化合物/对照和200μl细胞膜(35μg/ml)。将实验化合物溶解到DMSO中。将放射标记的配体、膜和实验化合物在缓冲液中稀释25mMHEPES，pH7.4，0.1mM CaCl2，1mM MgSO4，1mM EDTA，0.1％HSA和0.005％吐温TM20。在Greiner微量滴定板中将样品在30℃温育90分钟，用在0.5％PEI中预润湿60分钟的GF/B滤纸隔开，并用NaCl(0.9％)洗涤2-3次，然后通过过滤分离结合的和未结合的放射标记的配体。过滤后，用冰冷的0.9％NaCl洗涤滤纸10次。滤纸在50℃下干燥30分钟，密封，并将30μl Microscint 0(Packard，目录号6013616)加入每个孔中。在Topcounter中计数平板(1分钟/孔)。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPad Software，USA)，通过结合曲线的非线性回归分析分析数据。
测定(V)-黑皮质素受体4(MC4)结合测定125NDP-α-MSH与表达人MC4受体的重组BHK细胞的体外结合(过滤测定)。
使用表达人MC4受体的BHK细胞(从瑞典Uppsala的Wikberg教授得到)，在5ml minisorb vials(Sarstedt No.55.526)或在96孔filterplate(Millipore MADVN 6550)中进行该测定。测定前，将BHK细胞保存在-80℃，该测定直接在该细胞悬浮液的稀释液上进行，不进行其它准备。将悬浮液稀释，最大产生10％特异性结合，即约50-100倍稀释。以200μl总体积进行测定；将50μl细胞悬浮液、50μl125NDP-α-MSH(≈79pM终浓度)、50μl实验化合物和50μl结合缓冲液(pH7)相混合，在25℃温育2小时[结合缓冲液25mM HEPES(pH7.0)，1mM CaCl2，1mM MgSO4，1mM EGTA，0.02％杆菌肽和0.2％BSA]。将实验化合物溶解到H2O中，并在结合缓冲液中稀释。将放射标记的配体和膜在结合缓冲液中稀释。通过用5ml冰冷的0.9％NaCl稀释，终止温育，随后经用0.5％聚乙烯亚胺预处理1小时的Whatman GF/C过滤器迅速过滤。用3×5ml冰冷的NaCl洗涤过滤器。使用Cobra II自动γ计数器对残留在过滤器上的放射活性计数。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPad Software，USA)，通过结合曲线的非线性回归分析分析数据。
测定(VI)-能量消耗的评价使用从丹麦的M&B Breeding and Research Centre A/S得到的TAC∶SPRD大鼠或Wistar大鼠。适应至少1周后，将大鼠单个地置于代谢室(Oxymax system，Columbus Instruments，Columbus，Ohio；每天校正系统)中。在测量过程中，动物自由摄取水，但是室中没有提供食物。亮/暗周期是12h∶12h，在6.00开灯。当动物在室中度过大约2小时(即当达到基线能量消耗时)后，施用实验化合物或介质(口服，腹膜内或皮下)，继续记录，以确定实验化合物的作用时间。在共22小时中(适应2小时(基线)和测量20小时)，每10-18分钟收集每只动物的数据(氧消耗、二氧化碳产生和流速)。在每个10-18分钟周期中，进行流入空气中的O2和CO2含量变化的校正。
计算每代谢体重((kg体重)0.75)的氧消耗和二氧化碳产生的数据，并计算每只动物的热量数据。将氧消耗(VO2)被作为感兴趣的主要能量消耗参数。
权利要求
1.式I的化合物R1-S-Z1-Z2-Z3-His-Z4-Z5-c[X1-Hyp-X2-Arg-X3-X4]N(R’)2[I]其中R1代表直链、支链的和/或环状的C14-22烷酰基、C14-22烯酰基或C14-22炔酰基，其可以任选地被一个或多个选自卤素、羟基和芳基的取代基取代，或R1代表C9-17-C(O)-NH-S(O)2-(CH2)3-C(O)-；S代表一个键，4-氨基丁酸残基，Gly，β-Ala，或由式II代表的结构 Z1代表Gly，β-Ala，Ser，D-Ser，Thr，D-Thr，His，D-His，Asn，D-Asn，Gln，D-Gln，Glu，D-Glu，Asp，D-Asp，Ala或D-Ala；Z2代表Ser，Thr，Gln，Asn，Glu，Asp或His；Z3代表Gln或Asn；Z4代表Ser，Thr，Dab，Dap，Glu或Asp；Z5代表Ala，Val，Leu，Ile，Met或Nle；X1代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；X2代表D-Phe，其中D-Phe中的苯基可以任选地被一个或多个选自下述的取代基取代卤素，羟基，烷氧基，硝基，甲基，三氟甲基和氰基；X3代表Trp，2-Nal，(3-苯并[b]噻吩基)丙氨酸残基或(S)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-甲酸残基；X4代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；其中X1和X4通过由均独立地为Cys、高Cys或Pen的X1和X4衍生的二硫键，或通过X1的侧链中的羧酸和X4的侧链中的氨基之间形成的酰胺键，或通过X4的侧链中的羧酸和X1的侧链中的氨基之间形成的酰胺键，连接到一起，使式I化合物成为环状；每个R’独立地代表氢或C1-6烷基，其可以任选地被一个或多个氨基或羟基取代；条件是，式I化合物不是十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十八烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十四烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2或十六烷酰基-Gly-Glu-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2；和其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1是C14-18-烷酰基，且S是一个键或由式II代表的结构。
3.根据权利要求1的化合物，其中R1是4-(C14-18烷酰基氨磺酰基)丁酰基，且S是一个键。
4.根据权利要求3的化合物，其中R1是4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基。
5.根据权利要求1-4中的任一项的化合物，其中Z1是Gly，Glu或Asp，且Z5是Nle或Ala。
6.根据权利要求1-5中的任一项的化合物，其中Z2是Glu，Asp，Ser，Thr，Gln或Asn。
7.根据权利要求1-6中的任一项的化合物，其中Z2是Ser，Thr或Gln。
8.根据权利要求1-7中的任一项的化合物，其中Z2是Ser。
9.根据权利要求1-8中的任一项的化合物，其中Z3是Gln。
10.根据权利要求1-8中的任一项的化合物，其中Z3是Asn。
11.根据权利要求1-10中的任一项的化合物，其中Z4是Glu，Asp，Ser，Thr，Dab或Dap。
12.根据权利要求1-11中的任一项的化合物，其中Z4是Ser，Thr或Dab。
13.根据权利要求1-12中的任一项的化合物，其中X1是Glu，X2是D-Phe，X3是Trp并且X4是Lys。
14.根据权利要求1-12中的任一项的化合物，其中X1是Asp，X2是D-Phe，X3是Trp并且X4是Lys。
15.根据权利要求1-12中的任一项的化合物，其中X1和X4独立地是Cys，高Cys或Pen，X2是D-Phe，且X3是Trp。
16.根据权利要求1-15中的任一项的化合物，其中N(R′)2是NH2。
17.根据权利要求1-15中的任一项的化合物，其中N(R′)2是NH-CH2-CH2-NH2。
18.根据权利要求1的化合物，其选自R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2。R1-S-Gly-Ser-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2，R1-S-Glu-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Glu-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Glu-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，和R1-S-Glu-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2。
19.根据权利要求1的化合物，其选自2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Thr-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His-Dab-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Thr-Gln-His Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-氨基乙基)酰胺，十四烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Dap-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Dap-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十四烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Gln-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Glu-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Gly-Ser-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，和4-(十六烷酰基氨磺酰基)丁酰基-Glu-Glu-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2。
20.延迟从IGT向II型糖尿病进展的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
21.延迟从II型糖尿病向胰岛素依赖性糖尿病进展的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
22.治疗肥胖或预防超重的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
23.调节食欲的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
24.诱导饱感的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
25.预防成功减肥后体重反弹的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
26.增加能量消耗的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
27.治疗与超重或肥胖有关的疾病或状态的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
28.治疗食欲过盛的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
29.治疗暴食的方法，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
30.治疗选自下述疾病或状态的方法动脉粥样硬化，高血压，糖尿病，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍和早产儿死亡的危险，包含给有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
31.治疗肥胖患者的选自下述疾病或状态的方法II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍和早产儿死亡的危险，包含给有此需要的肥胖患者施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物，其任选地与一种或多种其它治疗活性化合物相组合。
32.根据权利要求20-31中的任一项的方法，其中所述其它治疗活性化合物选自抗糖尿病药，抗高血脂药，抗肥胖药，抗高血压药，和用于治疗糖尿病导致的或与糖尿病有关的并发症的药物。
33.根据权利要求20-32中的任一项的方法，其中所述根据权利要求1-19中任一项的化合物是以包含约0.05mg-约1000mg所述化合物的单位剂型施用给所述患者。
34.激活对象中的MC4的方法，该方法包含给所述对象施用有效量的根据权利要求1-19中任一项的化合物。
35.根据权利要求20-34中的任一项的方法，其中所述根据权利要求1-19中任一项的化合物是通过鼻、肺或舌下给药来肠胃外施用。
36.根据权利要求1-19中的任一项的化合物在治疗中的应用。
37.药物组合物，其包含根据权利要求1-19中任一项的化合物。
38.根据权利要求1-19中任一项的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于延迟从IGT向II型糖尿病的进展；延迟从II型糖尿病向胰岛素依赖性糖尿病的进展；治疗肥胖或预防超重；调节食欲；诱导饱感；预防成功减肥后的体重反弹；增加能量消耗；治疗与超重或肥胖有关的疾病或状态；治疗食欲过盛；治疗暴食；治疗动脉粥样硬化，高血压，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍或早产儿死亡的危险；或治疗肥胖患者的选自下述的疾病或状态II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障碍，冠心病，胆囊病，胆结石，骨关节炎，癌症，性功能障碍或早产儿死亡的危险。
全文摘要
本发明涉及新的肽类化合物，它们可有效地调控一种或多种黑皮质素受体类型，涉及所述化合物在治疗中的应用，涉及包含将所述化合物施用给有此需要的患者的治疗方法，还涉及所述化合物在制备药物中的应用。在肥胖以及许多与肥胖有关的疾病或病症的治疗方面，本发明的化合物是特别令人感兴趣的。
文档编号C07K7/64GK101052647SQ200580037518
公开日2007年10月10日 申请日期2005年11月4日 优先权日2004年11月4日
发明者U·森斯富斯, L·克里斯滕森, K·W·孔德弗里伯斯, I·彼得松 申请人:诺和诺德公司