用于治疗肥胖症的胰高血糖素/glp-1激动剂的制作方法
【专利说明】用于治疗肥胖症的胰高血糖素/GLP-1激动剂 对以电子方式提交的序列表的引用
[0001] 将与本申请一起以电子方式提交的处于ASCII文本文件形式的序列表的内容（名 称：序列表_ascii.txt ;大小：12. 3千字节；以及创建日期2013年12月10日）通过引用 以其全文结合在此。 背景
[0002] 肥胖症是全世界重大且日益增长的健康问题，并且与许多危及生命的疾病相关， 这些疾病如心血管疾病、肾脏病、高血压、中风、不育、呼吸功能障碍、和2型糖尿病。
[0003] 胰高血糖素和胰高血糖素样肽-I (GLP-I)衍生自前胰高血糖素原，前胰高血糖素 原为具有158个氨基酸的前体多肽，其在不同的组织中被加工形成许多种不同的胰高血糖 素原衍生肽，包括胰高血糖素、胰高血糖素样肽-I (GLP-I)、胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)和 胃泌酸调节素（OXM)，它们涉及许多种生理功能，包括葡萄糖稳态、胰岛素分泌、胃排空、和 肠道生长，以及调节进食。胰高血糖素是具有相应于胰高血糖素原的氨基酸33到61 (前胰 高血糖素原的53到81)的29个氨基酸的肽，而GLP-I产生为具有相应于胰高血糖素原的 氨基酸72到108 (前胰高血糖素原的92到128)的37个氨基酸的肽。GLP-I (7-36)酰胺或 GLP-I (7-37)酸是GLP-I的生物活性形式，其在GLP-I受体处显示出基本上等同的活性。
[0004] 胰高血糖素是通过胰脏产生的并且与胰高血糖素受体（"glucR"）相互作用。胰 高血糖素在肝脏中起作用经由糖异生和糖原分解而升高血糖。当血糖开始下降时，胰高血 糖素发信号给肝脏以便分解糖原和释放葡萄糖，从而引起血糖水平朝向正常水平上升。
[0005] GLP-I相比于胰高血糖素具有不同的生物活性。它从肠 L细胞分泌并且结合到 GLP-I受体上。它的活性包括刺激胰岛素合成和分泌、抑制胰高血糖素分泌、和抑制进食。
[0006] 胰高血糖素和GLP-1，作为它们对应的受体的激动剂起作用，已经显示出有效于 减轻体重。在销售或开发中的用于治疗肥胖症的某些GLP-I类似物包括，例如，利拉鲁肽 (来自诺和诺德公司的VICT0ZA?)和艾塞那肽（来自礼来公司/艾米林生物制药公司的 Byetta?)〇
[0007] 仍然需要更多的用于有效治疗肥胖症的药剂，例如具有改进的溶解度、可配制性 (formulatability)、稳定性、和有效性的GLP-I/胰高血糖素激动剂肽。 简要概述
[0008] 本披露提供了包含以下氨基酸序列或其由组成的分离肽： HX2QGTFTSDX10SX12X13LX15X16X17X18AX20X21FX23X24WLX27X28GX30 ； 其中 X2 是 G 或 S，XlO 是 Y 或 K，X12 是 K、E、R、或 S，X13 是 K 或 Y，X15 是 D 或 E。X16 是 S 或 G，X17 是 E、R、Q、或 K，X18 是 R、S、或 A，X20 是 R、K、或 Q，X21 是 D 或 E，X23 是 V 或 I，X24是A或Q，X27是E或V，X28是A或K，并且X30是G或R(SEQ ID N0:4)。在某些方 面，X2 是 S，X15 是 D，X16 是 S，X20 是 R，X21 是 D，X23 是 V，X24 是 A，X28 是 A，并且 X30 是 G (SEQ ID NO: 5)。在某些方面，如果X17是E，则X18是R，并且如果X17是R，则X18是S (SEQ ID NOs: 6 和 7)。在某些方面，XlO 是 Y，X12 是 K，X13 是 K，并且 X27 是 V (SEQ ID NOs: 8 和 9)。在某些方面，X10是K，X13是Y，并且X27是E(SEQIDN0s:10和ll)。在某些方面， X12 是 E (SEQ ID NOs :12 和 13)，可替代地，X12 是 R (SEQ ID NOs :14 和 15)。在某些方面， 该分离肽包含SEQ ID NO: 16或由其组成。在某些方面，该分离肽包含氨基酸序列SEQ ID NOs: 17或氨基酸序列SEQ ID NO: 19或由其组成。在某些方面，该分离肽包含SEQ ID NO: 18 或由其组成。
[0009] 在上述肽的某些实施例中，X30的羧基基团被酰胺化。在其他实施例中，该羧基基 团是是未修饰的酸。
[0010] 在此提供的任何肽可进一步包含一个或多个修饰的氨基酸，例如，添加酰基部分， 例如，修饰可以是在赖氨酸残基的Ν( ε )基团上的棕榈酰部分。在某些实施例中，该棕榈酰 基团通过γ谷氨酸盐接头连接到赖氨酸残基上。已经使用了包括β丙氨酸和氨基己酸在 内的替代接头。其他替代接头是可能的，包括含有短PEG部分例如含有2个或4个PEG单 元的接头。
[0011] 在不同的实施例中，在此提供的这些分离肽可结合到胰高血糖素受体、GLP-I受 体、或胰高血糖素受体和GLP-I受体这两者上。在某些方面，该胰高血糖素受体是人胰高血 糖素受体，和或该GLP-I受体是人GLP-I受体。在某些方面，如在此提供的分离肽以在cAMP 测定1 (如在此所述）中小于10, 〇〇〇pM、小于5000pM、小于2500pM、小于ΙΟΟΟρΜ、小于900pM、 小于800pM、小于700pM、小于600pM、小于500pM、小于400pM、小于300pM、小于200pM、小 于100pM、小于50pM、小于25pM、小于20pM、小于15pM、小于10pM、小于5pM、小于4pM、小于 3pM、或小于2pM的EC50结合到人胰高血糖素受体上。在某些方面，如在此提供的分离肽 以在cAMP测定1中小于10, 000ρΜ、小于5000pM、小于2500pM、小于1000pM、小于900pM、小 于800pM、小于700pM、小于600pM、小于500pM、小于400pM、小于300pM、小于200pM、小于 100pM、小于50pM、小于25pM、小于20pM、小于15pM、小于10pM、小于5pM、小于4pM、小于3pM、 或小于2pM的EC50结合到人GLP-I受体上。
[0012] 在某些方面，如在此提供的分离肽是GLP-I活性的激动剂、胰高血糖素活性的激 动剂、或GLP-I活性和胰高血糖素活性这两者的激动剂。在一些实施例中，如在此提供的分 离肽结合胰高血糖素受体和GLP-I受体两者，并且相对于天然配体而言展现出在GLP-I受 体上比胰高血糖素受体上大至少大约2倍的活性。在一个实施例中，该肽在GLPlR上（相 比于GLPl)具有比在胰高血糖素受体上（相对于胰高血糖素）高5到10倍的相对效价。
[0013] 在某些方面，如在此提供的分离肽可进一步包含与该肽相关的异源部分。在一些 方面，该异源部分是蛋白质、肽、蛋白质结构域、接头、有机聚合物、无机聚合物、聚乙二醇 (PEG)、生物素、白蛋白、人血清白蛋白（HSA)、HSA FcRn结合部分、抗体、抗体的结构域、抗体 片段、单链抗体、结构域抗体、白蛋白结合结构域、酶、配体、受体、结合肽、非FnIII支架、表 位标签、重组多肽聚合物、细胞因子、或此类部分的两种或更多种的任何组合。
[0014] 还提供了包含如在此所述的分离肽、和载体的药用组合物。进一步提供了包括这 样的药用组合物的药盒。
[0015] 还提供了用于治疗或预防由体重过多引起或其特征为体重过多的疾病或病症的 方法，其中该方法包括向需要治疗的受试者给予有效量的如在此提供的分离肽、或包含这 种肽的组合物。在某些方面，该疾病或病症可以是肥胖、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受不良、糖尿 病前期、空腹血糖增加、2型糖尿病、高血压、血脂异常（或这些代谢危险因素的组合）、胰高 血糖素瘤、心血管疾病，例如充血性心力衰竭、动脉硬化、动脉粥样硬化、冠心病、或外周动 脉疾病冲风、呼吸功能障碍、肾脏病、以及它们的任何组合。根据该方法，可以通过注射，例 如皮下注射，来给予如在此所述的分离肽。根据该方法，可以给予该肽每日一次。在某些实 施例中，该受试者是人。
[0016] 还提供了用于治疗或预防由体重过多引起或其特征为体重过多的疾病或病症的 方法，其中该方法包括向需要治疗的受试者给予有效量的如在此提供的分离肽、或包含这 种肽的组合物。根据该方法，可以通过注射，例如皮下注射，来给予如在此所述的分离肽。根 据该方法，可以给予该肽每日一次。在某些实施例中，该受试者是人。 附图/图简要说明
[0017] 图1显示了在DIO小鼠中在以三个不同的剂量给予胰高血糖素 /GLP-I共激动剂 肽G730之后从第0天开始体重变化的平均百分比，与载体治疗以及利拉鲁肽治疗进行比 较。在不同组中的初始体重分别为：载体组：47. 4±3. 7g ;G73010nmol/kg组：44. 5±2. 2g ; G73020nmol/kg 组：45. 9 ± 3. 6g 和 G73050nmol/kg 组：46. I ± 2. 4g。
[0018] 图2显示了在DIO小鼠中在以三个不同的剂量给予胰高血糖素 /GLP-I共激动剂 肽G797之后从第0天开始体重变化的平均百分比，与载体治疗以及利拉鲁肽治疗进行比 较。在不同组中的初始体重分别为：载体组：47. 4±3. 7g ;G7975nmol/kg组：47. 5±1. 2g ; G79720nmol/kg 组：47. 4±2· 2g 和 G79750nmol/kg 组：47. 2±1· 8g。
[0019] 图3显示了在DIO小鼠中在以20nmol/kg的剂量给予胰高血糖素 /GLP-I共激 动剂肽G812之后从第0天开始体重变化的平均百分比，与载体治疗以及利拉鲁肽治疗 进行比较。在不同组中的初始体重分别为：载体组：47. 4±3. 7g和G81220nmol/kg组： 49. 2±3. 4g〇
[0020] 图4是比较针对呈现于图1、2、和3中的三种胰高血糖素 /G