Nampt抑制剂在制备治疗可卡因成瘾的药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及NAMPT抑制剂在制备治疗可卡因成瘾的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 可卡因（Cocaine)又称古柯碱，化学名为苯甲酰甲基芽子碱（methyl benzoylecgonine)，一般呈白色晶体状，无臭，味苦而麻，其最早用于局部麻醉和治疗哮 喘，是最强的天然中枢兴奋剂，因其对中枢神经系统的兴奋作用而导致滥用，1985年起成为 世界性主要毒品之一。
[0003] 可卡因成瘾，是一种慢性复发性脑部疾病，属于药物依赖（drugdependence)类疾 病，可卡因成瘾会引起大脑结构和功能的可塑性变化，相关脑区包括伏隔核、纹状体、前额 皮质、海马和腹侧被盖区，健康也受到多方面的危害，包括精神颓废、人格缺损、心智功能紊 乱、并发相应的感染合并症以及吸毒者不顾一切地寻求和使用毒品而诱发各种违法犯罪活 动。
[0004] 可卡因成瘾的主要特点表现为即使患者在知晓用药的严重后果后，依然强迫性索 取和使用以满足欲望、对药物的寻觅和索取失去控制、对事物失去兴趣、成瘾记忆十分深 亥IJ，即使经过戒断治疗若干年后，接触与成瘾有关的刺激（如毒友、与过去用药有关的环境 等）都可能诱发复吸。
[0005] 鉴于可卡因成瘾危害甚大，找到合适的治疗靶点和药物，治疗可卡因成瘾迫在眉 睫。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述问题，本发明提供了一类治疗可卡因成瘾的药物。
[0007]NAMPT:烟酰胺磷酸核糖转移酶。
[0008]NAMPT抑制剂：抑制烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活或者表达的物质。
[0009] 本发明首先提供了NAMPT抑制剂在制备治疗可卡因成瘾的药物中的用途。
[0010] 优选地，所述治疗可卡因成瘾的降低NAMPT酶活的药物。进一步优选地，所述降低 NAMPT酶活的药物是FK866,其结构式如下：
[0011]
[0012] 本发明还提供了一种治疗可卡因成瘾的药物，它是以NAMPT抑制剂为活性成分， 加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
[0013] 优选地，所述NAMPT抑制剂为降低NAMPT酶活的药物。进一步优选地，降低NAMPT 酶活的药物是FK866,其结构式如下：
[0014]
[0015] 优选地，所述制剂是注射制剂。
[0016]NAMPT抑制剂可以有效减弱可卡因奖赏行为，治疗可卡因成瘾，临床应用前景良 好。
[0017] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明权利要 求书记载的内容所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0018] 图1SIRT1基因敲除小鼠基因型鉴定。1、5、6、7、8、9为SIRT1中脑条件敲除纯合 子小鼠；3为含Wntl的SIRT1杂合子小鼠；2、4为含Wntl的野生型小鼠。
[0019] 图2条件位置偏愛箱
[0020] 图3条件性位置偏好实验设计示意图
[0021] 图4小鼠自发活动箱
[0022]图 5pReceiver_Lv201载体图。
[0023] 图6VTA定位图谱
[0024] 图7可卡因条件性位置偏好实验。小鼠经可卡因CPP训练后，可卡因给药组（C0) 与生理盐水对照组（SA)相比，CPP效应增加，*p〈0. 05。
[0025] 图8可卡因诱导自发活动。可卡因给药组（C0)与生理盐水对照组（SA)相比测得 两组小鼠的距离（cm)有统计学差异（*p〈0. 05) ;#p〈0. 05,给药组分别在Day2、3、4、5、6、7 与Dayl相比有统计学差异。
[0026] 图9NAMP在可卡因和生理盐水组CPP模型中不同脑区的表达情况。（A) WesternBlot检测NAMPT在前额叶皮质（PFC)、伏隔核（NAc)、纹状体（Striatum)、海马 (Hippocampus)和中脑腹侧被盖区（VTA)的表达。（B)代表A图中NAMPT表达的统计分析 结果。*p〈0. 05,表示可卡因给药组（C0)与生理盐水对照组（SA)相比较有统计学差异。
[0027] 图10RT-PCR检测可卡因诱导NAMPT的表达。（A)可卡因CPP模型中，NAc和VTA 中NAMPT表达变化。可卡因诱导VTA中NAMPT表达的上调，*p〈0. 05,而NAc没有变化。（B) 可卡因急性模型中，NAc和VTA中NAMPT表达变化。可卡因单次给药后30min、单次给药后 24h，连续给药7d(l次/天）NAc、VTA脑区NAMPT没有明显变化，可卡因给药组（C0)与生理 盐水对照组（SA)。
[0028] 图11小鼠腹腔注射FK866对行为学的影响。（A)可卡因CPP得分图。小鼠腹腔注 射FK866降低可卡因CPP效应，#p〈0. 05。（B)小鼠自发活动变化。小鼠腹腔注射FK866可 抑制自发活动，P〈〇. 05。Con-SA，溶剂-生理盐水组；Con-C0,溶剂-可卡因组；FK866-SA， FK866-生理盐水组；FK866-C0,FK866-可卡因组。
[0029] 图12小鼠VTA脑内给FK866后对小鼠行为学的影响。（A)可卡因CPP得分图。小 鼠VTA脑内注射FK866可卡因CPP降低，#p〈0. 05。（B)小鼠自发活动变化。小鼠VTA脑内 注射FK866可抑制自发活动，p〈0. 05。Con-SA，溶剂-生理盐水组；Con-C0,溶剂-可卡因 组；FK866-SA，FK866-生理盐水组；FK866-C0,FK866-可卡因组。
[0030] 图13小鼠VTA脑内注射FK866后补充NMN对可卡因CPP的影响。给予FK866后 补充NMN，可卡因CPP恢复，#p〈0. 05。SA表示腹腔给予生理盐水组，C0腹腔给予可卡因组。 Control表示对照组；FK866+SA表示VTA脑内给FK86630min后补充SA;FK866+NMN表示VTA 脑内给FK86630min后补充NMN。
[0031] 图14VTA脑内注射NAMPT过病毒对小鼠可卡因CPP的影响。⑷WesternBlot检 测NAMPT表达情况。过表达（LV-NAMPT)与对照（LV-GFP)组相比NAMPT表达增加，p〈0. 05。 (B)VTA脑内注射NAMPT过表达病毒后对小鼠可卡因CPP的影响。NAMPT过表达（LV-NAMPT) 与对照（LV-GFP)可卡因组相比可卡因CPP增加，#p〈0. 05。LV-GFPSA，GFP-生理盐水组； LV-GFPC0，GFP-可卡因组；LV-NAMPTSA，过表达NAMPT-生理盐水组；LV-NAMPTC0,过表达 NAMPT-可卡因组。
[0032] 图15腹腔注射FK866的可卡因CPP模型小鼠样本的NAc和NAc的0SC-PLS-DA模 型载荷图。A、C分别为可卡因组和生理盐水对照组VTA和NAc的0SC-PLS-DA模型载荷图。 B、D分别为FK866可卡因给药组和可卡因组VTA和NAc的0SC-PLS-DA模型载荷图。生理 盐水对照组（SA)、可卡因给药组（C0)、FK866可卡因给药组（FK866+C0)。
[0033] 图16腹腔注射FK866的可卡因CPP模型小鼠样本的VTA脑区代谢谱。A基于1H NMR的可卡因组和生理盐水对照组的0SC-PLS-DA得分图。B基于1HNMR的FK866给药组 和可卡因组的0SC-PLS-DA得分图。C利用A中相对应的PLS-DA排列分析而得到的统计验 证模型，R2代表解释能力变量，Q2代表该模型的验证能力变量D利用B中相对应的PLS-DA 排列分析而得到的统计验证模型。生理盐水对照组（SA)、可卡因给药组（C0)、FK866可卡 因给药组（FK866+C0)。
[0034] 图17腹腔注射FK866的可卡因CPP模型小鼠样本的NAc脑区代谢谱。A基于1H NMR的可卡因组和生理盐水对照组的0SC-PLS-DA分析图。B基于1HNMR的FK866给药组 和可卡因组的0SC-PLS-DA分析图。C利用A中相对应的PLS-DA排列分析而得到的统计验 证模型，R2代表解释能力变量，Q2代表该模型的验证能力变量D利用B中相对应的PLS-DA 排列分析而得到的统计验证模型。生理盐水对照组（SA)、可卡因给药组（CO)、FK866可卡 因给药组（FK866+C0)。
[0035] 图18不同给药组组不同脑区代谢物变化箱线图。（A)VTA脑区；(B)NAc脑区。方框 中间的线代表中位数；方框的下线和上线分表代表第25个和第75个分位数；最下面的线 和最上面的线分别代表最小值和最大值。生理盐水对照组（SA)、可卡因给药组（C0)、FK866 可卡因给药组（FK866C0)。
[0036] 图19不同给药组VTA脑区中NAD的变化图。给药组与对照组相比NAD变化有统 计学意义，*P〈〇. 05。Control，脑内注射SA;FK866,脑内注射FK866 ;FK866+NMN，VTA脑内给 FK86630min后补充NMN;LV-NAMPT，过表达NAMPT组。相应的SA和C0分别为生理盐水对照 组、可卡因给药组。
【具体实施方式】
[0037] 实验例1NAMPT抑制剂治疗可卡因成瘾
[0038] 1前言
[0039] 本研究中，我们首先建立可卡因CPP小鼠模型，通过行为学检测小鼠可卡因奖赏 效应，通过PCR、免疫印迹等方法检测VTA、NAc等脑区NAMPT表达变化。脑内定位注射NAMPT 抑制剂、补充NMN和NAMPT过表达病毒载体，发现CPP效应抑制或增强。其次，采用基于核 磁共振的代谢组学的技术和试剂盒，检测脑区与NAMPT代谢相关代谢物的变化，发现NAMPT 抑制或激活，相应的NAD水平降低或升高。该结果说明NAMPT通过影响NAD的合成参与调 控可卡因CPP效应。最后通过SIRT1中脑条件性敲除小鼠，验证NAMPT-NAD-SIRT1途径在 可卡因CPP中的作用。本研究首次发现NAMPT-NAD-SIRT1通路参与可卡因药物成瘾，为深 入认识成瘾机制以及成瘾治疗提供新的试验依据，还发现了NAMPT抑制剂可以治疗可卡因 成瘾。
[0040] 2实验材料与方法
[0041] 2.1实验材料与设备
[0042] 2. 1. 1试验样品
[0043] 盐酸可卡因购自中国药品生物制品鉴定所，白色粉末，纯度大于99%，生产批 号：171210-200803;生理盐水选用四川科伦药业股份有限公司，批准文号：国药准字 H51021158,生产批号M12101307。盐酸可卡因用生理盐水稀释到所需浓度。FK866、烟 酰胺单核苷酸（0 -NMN)购于Sigma公司。
[0044] 2. 1. 2实验动物
[0045] (1)雄性SPF级野生型C57BL/6J小鼠，由北京维多利华实验动物有限责任公司提 供，未交配过，体重20-22g。
[0046] (2)SIRT1中脑条件敲除小鼠
[0047]SIRTllDxp/1