45. 0%A;10 ~27min，45. 0%-60. 0%A;27 ~40min，60. 0%A;40 ~ 45min，60. 0%-45. 0%A);检测波长（0 ~27min，入1= 203nm;27 ~35min，A2= 289nm; 35~45min，^3= 306nm);进样量10jiL。理论塔板数不得低于3000,分离度均大于2。
[0071] 实验中对照品溶液的制备：精密称取地愉皂巧-II对照品适量，分别置于5个 20mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，再分别精密吸取上述溶液10、5、2、10、5mL置 于50血量瓶中，加60 %甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0. 0374mg/血的地愉皂巧-II对照品溶 液。
[0072] 供试品溶液的制备：取取浸膏（干）适量，研细，混匀，称取约1. Og，精密称定，精 密加入60%甲醇50血，密塞，称定质量，超声波（功率160W，频率50曲Z)超声处理30min， 放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。继 而精密吸取对照品溶液与供试品溶液，按上述色谱条件测定，并按外标两点法计算样品中 地愉皂巧-II含量。 阳〇7引2.实验结果：
[0074]表1地愉总皂巧的含量比较阳0巧]
[0076] 3.实验结论：
[0077] 实验数据显示，与两种专利方法相比，本发明制备得到的地愉皂巧I、地愉皂巧II 和地愉总皂巧及得率均较高，充分证明本发明方法大大提高了地愉总皂巧、地愉皂巧I和 地愉皂巧II的含量，明显优于专利公开的方法。
[0078] 实验例2本发明地愉总皂巧提取物的药理实验比较
[0079] 1.实验材料、仪器
[0080] 1. 1雙试药物：实验例1中制备的样品1、样品2、样品3。
[0081] 1.2工具药物：环憐酷胺。 阳0間1. 3实验动物：KM小鼠：体重18. 5~22. 5邑。
[0083] 1. 4实验仪器：全自动血球分析仪；BS-60化电子天平：规格：600g/0.1 g，上海友 声衡器有限公司。
[0084] 1. 5统计方法：用SPSS17. 0软件进行统计分析。数据W均数+标准差）表 示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane'ST2检验。 阳0财2.实验方法
[0086] 2. 1实验动物分组及模型制备：
[0087] 所有动物适应性喂养1周后按体重随机分为：正常组、模型组、样品1组： 15mg?kg-1剂量灌胃样品1水溶液；样品2组：15mg?kg-1灌胃样品2水溶液；样品3组： 15mg，kg-l剂量灌胃样品3水溶液；地愉升白片组：200mg，kg-l剂量灌胃地愉升白片水溶 液，每组10只。实验第1天，除空白组外，其余各组小鼠按50mg?kg-1剂量腹腔注射环憐 酷胺生理盐水溶液，连续3天，空白组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。
[0088] 2. 2实验分组及给药：
[0089] 各实验组自实验第1天开始按剂量、给药方式给予相应药物，正常组和模型组小 鼠灌胃等体积纯净水，连续7天。
[0090] 2. 3标本采集：
[0091] 实验第8天，各实验组小鼠眼眶取血，用装有邸TA抗凝剂的0. 5m化P管收集待测。
[0092] 2. 4检测指标及方法：
[0093] 外周血象检测：采用全自动血球计数仪对各实验组小鼠外周血白细胞（WBC)进行 计数。
[0094] 3.实验结果
[0095] 表2各实验组小鼠外周血白细胞数量
[0096]
[0097] 注：与模型组比较，冲<0. 05, *冲<0. 01 ;与地愉升白片组比较，AP<0. 05， ▲▲P<0. 01。 阳〇9引 4.实验结论
[0099] 表2显示，样品1组小鼠外周血白细胞较之模型组有显著升高（P<0.OW;甚至比 阳性组地愉升白片组还高，表明本发明制备的地愉总皂巧升高白细胞的活性最佳。
[0100] 综上，与现有专利方法相比，本发明制备方法明显提高了地愉总皂巧、地愉皂巧I 和地愉皂巧II的含量，且药效也显著优于现有方法制备的总皂巧。本发明制备方法工艺操 作简便、成本低、效率高，适于工业化大生产。本发明制备的地愉总皂巧提取物升高白细胞 的活性强，为白细胞减少症的临床治疗提供了一种新的药物。
【主权项】
1. 一种地榆总皂苷提取物，其特征在于：该提取物中地榆皂苷I的重量百分含量为： 50% -97%，地榆皂苷II的重量百分含量为：2% -10%。2. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：该提取物中地榆皂苷I的重量百分含 量为：92. 34%，地榆皂苷II的重量百分含量为：6. 16%。3. 根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于：该提取物中总皂苷重量百分含量 为 60-99 %〇4. 根据权利要求3所述的提取物，其特征在于：该提取物中总皂苷重量百分含量为 98. 50 % 〇5. 根据权利要求1-4任意一项所述的提取物，其特征在于：它是由如下方法制备： a. 取地榆药材，加有机溶剂提取，提取液备用； b. 取步骤a制得的提取液，调pH至12~14,静置，离心，抽滤得上清液，上清液减压浓 缩，备用； c. 取步骤b制得的上清液调pH至11~12,静置，离心，收集沉淀；上清液继续调pH至 12~13,静置，离心，收集沉淀；合并两次沉淀； d. 取步骤c制得的沉淀加有机溶剂提取，过滤，收集滤液，滤液经浓缩、干燥，即得地榆 总皂苷。6. 制备权利要求1-5任意一项所述的提取物的方法，它包括下述步骤： a. 取地榆药材，加有机溶剂提取，提取液备用； b. 取步骤a制得的提取液，加10 %的碱溶液调pH至12~14,静置，离心，抽滤得上清 液，上清液减压浓缩，备用； c. 取步骤b制得的上清液加10%的碱溶液调pH至11~12,静置，离心，收集沉淀；上 清液继续加10%的碱溶液调pH至12~13,静置，离心，收集沉淀；合并两次沉淀； d. 取步骤c制得的沉淀加有机溶剂提取，过滤，收集滤液，滤液经浓缩、干燥，即得地榆 总皂苷。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于： 步骤a中，加地榆药材8倍量的有机溶剂回流提取2次，每次1. 5小时；其中，有机溶剂 为乙醇或甲醇，乙醇浓度为30 %~95% v/v ; 步骤b中，提取液加10 %的碱溶液调pH至12~14,静置过夜，离心，抽滤得上清液，上 清液减压浓缩至适当体积，加水适量至乙醇浓度为20% v/v，备用；其中，所述的碱溶液为 NaOH、KOH 或 Ca (OH) 2溶液； 步骤c中，静置时间为12h，收集的沉淀于70°C减压干燥； 步骤d中，取步骤c制得的沉淀，用有机溶剂回流45min，过滤，收集滤液，减压回收有机 溶剂至有固形物析出，挥干，所得固形物减压干燥12小时，即得地榆总皂苷；其中，所述的 有机溶剂为无水乙醇或无水甲醇。8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于： 步骤a中，所述有机溶剂为乙醇，乙醇浓度为90% v/v ; 步骤b和步骤c中，所述的碱溶液为NaOH溶液； 步骤d中，所述的有机溶剂为无水乙醇。9. 权利要求1-5任意一项所述的地榆总皂苷提取物在制备具有升高白细胞作用的药 物中的用途。10. -种升高白细胞的药物组合物，其特征在于：它是由权利要求1-5任意一项所述的 地榆总皂苷提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用 的制剂。11. 根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂。
【专利摘要】本发明提供了一种地榆总皂苷提取物及其制备方法和用途。本发明制备的地榆总皂苷提取物中，总皂苷含量达到98.50％。与现有方法比较，本发明制备的地榆总皂苷含量显著增加，且升高白细胞的活性也得到了显著提升。本发明工艺操作简便，效率高，生产成本低，有利于地榆总皂苷的工业化大生产。本发明制备的地榆总皂苷提取物升高白细胞的活性强，为白细胞减少症的临床治疗提供了一种新的药物。
【IPC分类】A61K36/739, A61P7/00
【公开号】CN105147804
【申请号】CN201510541406
【发明人】杨世林
【申请人】四川英路维特医药科技有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月28日