一种高性能铁皮石斛茶多酚复合物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及铁皮石斛深加工技术，具体涉及一种高性能铁皮石斛茶多酚复合物的制备方法。
【背景技术】
[0002]铁皮石斛作为中华九大仙草之首，《神农本草经》中记载其具有“除痹、下气、补五脏虚劳、延年”等功效，现代科学研究表明，铁皮石斛具有抗氧化、增强免疫等健康功能。当前铁皮石斛是保健品开发的首选原料之一。
[0003]茶多酚是茶叶中最主要的活性物质，也是国内外最为关注的天然产物之一。研究表明茶多酚具有诸多健康功效，被认为在医药和食品行业有着广泛的应用前景。目前茶多酚在我国保健品行业中也具有重要的地位。
[0004]利用天然产物之间的协同互作效应，将不同功效成分进行复配，进行功能的互补已经成为保健品开发的一个趋势。尽管当前已有将铁皮石斛和茶多酚作为主要原料的功能产品开发，然而其互配技术大多仅仅停留在将不同成分进行混合的低水平状态，未能充分发挥各自的优势。因此，基于不同成分本身物理化学的特征进行结构上互配，发明一种全新的高性能的铁皮石斛茶多酚复合物，对于两者其在更多领域的应用尤为重要。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是，克服现有铁皮石斛与茶多酚简单混合未能充分发挥优势的缺陷，提供可以制备高性能的铁皮石斛茶多酚复合物的方法。
[0006]为解决技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的:
[0007]提供一种高性能铁皮石斛茶多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0008](I)称取新鲜的铁皮石斛的茎条，将其打碎后加入95%乙醇中，在50?60°C下提取3?4小时，离心过滤后得到滤渣；铁皮石斛质量与乙醇体积的比例为1: 10?20(g: ml)；
[0009](2)将步骤⑴中得到的滤渣加入纤维素酶水溶液中，在85?95°C下浸提2?3小时；然后超声提取30?40min，离心过滤后得到提取液；所加滤渣质量与纤维素酶水溶液体积的比例为1: 20?30(g: ml)，纤维素酶质量占铁皮石斛湿重的2?4% ;
[0010](3)将步骤(2)中得到的提取液在真空条件下浓缩到原体积的1/5?1/15，得到浓缩提取液；
[0011 ] (4)向步骤(3)中得到的浓缩提取液中加入等体积的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，在40?50°C下超声提取10?20min后，离心过滤后得到上清液；磷酸氢二钠_柠檬酸缓冲液的pH值为4?5，含有10?20% (m/m)的茶多酚；
[0012](5)将步骤(4)中的上清液浓缩后冷冻干燥，得到高性能铁皮石斛茶多酚复合物。
[0013]本发明中，步骤(I)中所述的离心过滤的条件是转速5500?6500rpm，时间25?35min0
[0014]本发明中，步骤(2)中所述的纤维素酶的活力多25000U/g ;超声提取时的功率是200?300W ;离心过滤的条件是转速3000?4000rpm，时间25?35min。
[0015]本发明中，步骤(4)中所述超声提取时的功率是200?300W ;离心过滤的条件是转速 3000 ?4000rpm,时间 5 ?15min。
[0016]与现有技术相比，本发明的有益效果在于:
[0017]应用本发明技术制备高性能铁皮石斛茶多酚复合物不仅有效地提高了茶多酚的稳定性，并且具有抑制癌细胞增殖、抑制酪氨酸酶活性、抗氧化、抑制α -淀粉酶活性等性能，在食品、化妆品、医药等行业有着广泛应用全景。
【附图说明】
[0018]图1为实施例1中制备的高性能铁皮石斛茶多酚复合物在模拟肠液中(PH6.8，37±1°C )的稳定性。
[0019]图2为实施例1中制备的高性能铁皮石斛茶多酚复合物的抗氧化作用。
[0020]图3为实施例1中制备的高性能铁皮石斛茶多酚复合物对酪氨酸酶活力的抑制作用。
[0021 ]图4为实施例1中制备的高性能铁皮石斛茶多酚复合物对α -淀粉酶活力的抑制作用。
【具体实施方式】
[0022]实施例1
[0023](I)称取新鲜的铁皮石斛茎条50g，将其打碎，以1: 10(g: ml)的比例加95%乙醇，在50°C下提取3小时后，经5500rpm离心25min，过滤后得到滤渣；
[0024](2)向步骤(I)中得到的滤渣以1: 20(g: ml)的比例加入含2%纤维素酶(占铁皮石斛湿重，酶活力25000U/g)的水溶液，在85°C下浸提3小时，再200W功率下超声提取40min后，经3000rpm离心25min过滤，得到提取液；
[0025](3)将步骤⑵中得到的提取液真空浓缩到原体积的1/5，得到浓缩提取液；
[0026](4)向步骤(3)中得到的浓缩提取液中以1:1的体积比例加入pH为4的含10%茶多酚的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，在40°C下，200W功率下超声提取lOmin，经3000rpm离心5min后过滤得到上清液；
[0027](5)将步骤(4)中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，得到高性能铁皮石斛茶多酚复合物；
[0028]实施例2
[0029](I)称取新鲜的铁皮石斛茎条50g，将其打碎，以1: 15(g: ml)的比例加95%乙醇，在55°C下提取3.5小时后，经6000rpm离心30min，过滤后得到滤渣；
[0030](2)向步骤(I)中得到的滤渣以1: 25(g: ml)的比例加入含3%纤维素酶(占铁皮石斛湿重，酶活力30000U/g)的水溶液，在90°C下浸提2.5小时，再250W功率下超声提取35min后，经3500rpm离心30min过滤，得到提取液；
[0031](3)将步骤(2)中得到的提取液真空浓缩到原体积的1/10，得到浓缩提取液；
[0032](4)向步骤(3)中得到的浓缩提取液中以1:1的体积比例加入pH为4.5的含15%茶多酚的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，在45°C下，250W功率下超声提取15min，经3500rpm离心1min后过滤得到上清液；
[0033](5)将步骤(4)中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，得到高性能铁皮石斛茶多酚复合物；
[0034]实施例3
[0035](I)称取新鲜的铁皮石斛茎条50g，将其打碎，以1: 20(g: ml)的比例加95%乙醇，在60°C下提取4小时后，经6500rpm离心35min，过滤后得到滤渣；
[0036](2)向步骤(I)中得到的滤渣以1: 30(g: ml)的比例加入含4%纤维素酶(占铁皮石斛湿重，酶活力35000U/g)的水溶液，在95°C下浸提2小时，再300W功率下超声提取30min后，经4000rpm离心35min过滤，得到提取液；
[0037](3)将步骤(2)中得到的提取液真空浓缩到原体积的1/15，得到浓缩提取液；
[0038](4)向步骤(3)中得到的浓缩提取液中以1:1的体积比例加入pH为5的含20%茶多酚的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，在50°C下，300W功率下超声提取20min，经4000rpm离心15min后过滤得到上清液；
[0039](5)将步骤(4)中得到的上清液浓缩后冷冻干燥，得到高性能铁皮石斛茶多酚复合物；
[0040]稳定性验证
[0041]采用常规模拟肠液(PH 6.8，温度37 土1°C )，通过相对茶多酚浓度评价复合物中茶多酚和未经复合的茶多酚的稳定性，具体步骤如下:
[0042]样品选择:
[0043]实施组:实施例1中制备的铁皮石斛茶多酚复合物；
[0044]对照组:测定实施例1制备的复合物中茶多酚的含量，通过复合物总量减掉茶多酚含量计算获得复合物中铁皮石斛提取物的含量，然后将同等含量的茶多酚固体与同等含量的铁皮石斛提取物(实施例1中步骤(2)中的浓缩液直接冷冻干燥制备的铁皮石斛提取物)充分混匀。
[0045]将样品(实施组和对照组)分别加入模拟肠液(PH 6.8，温度37±1°C)中进行