一种大鼠单侧肺肺纤维化模型的建立的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医疗技术领域，特别是涉及一种制作试验大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法。
【背景技术】
[0002]慢性肺纤维化疾病是目前导致全世界致死性肺脏疾病中的主要肺疾病之一。一种快速，有效，低死亡率的啮齿类动物的肺纤维化模型是目前该类疾病的病因学，病理学和药学研究所必需的。目前所采用的博来霉素诱导的啮齿类动物的肺纤维化模型都是非选择性的双肺肺纤维化。模型存在病变分布不均匀，变异性大，死亡率高等模型自身的不确定性因素，给肺纤维化疾病研究带来不便，特别是对肺纤维化治疗药物的研发影响巨大。因此，我们的团队建立了一种大鼠单侧肺肺纤维化模型，弥补了现有模型的诸多弊端，达到病变分布均匀，变异性小，动物死亡率接近零。为慢性肺纤维化疾病研究提供了一个稳定，可靠和有效的动物模型。
【发明内容】
[0003]本发明主要解决的技术问题是提供一种制作大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法，在实验大鼠上建立与人类肺纤维化疾病高度相似疾病模型用于肺纤维化疾病的病因学，病理学和药学评价的模型。开发一种简单易行、能广泛推广的、可真实模拟肺纤维化自然发生过程、模型稳定的方法。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是:提供一种制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，包括步骤为:(I)麻醉动物；(2)气管切开、气管插管；(3)单侧肺博来霉素灌注；(4)缝合气管；(5)术后护理；步骤(2)气管插管和(3)单侧肺灌注博来霉素诱发灌注侧肺肺损伤，造成单侧肺肺纤维化。
[0005]在本发明一个较佳实施例中，步骤(3)中所述博来霉素剂量为1.5,3.0,5.0mg/
kg ο
[0006]在本发明一个较佳实施例中，所述动物为各类种系的实验性雌雄大鼠。
[0007]本发明的有益效果是:本发明的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，该方法制作过程简单，可广泛推广，实验成果率高，病变分布均匀，结果稳定，变异小，死亡率低。在对肺纤维化疾病的病因学，病理学和药学评价中具有重要意义。
【附图说明】
[0008]图1是本发明的实验操作概图、图2是正常肺与博来霉素灌注后两周肺的对比图、图3是正常肺与博来霉素灌注后两周肺不同染色的对比图、图4是正常肺，博来霉素灌注后一周、两周、三周肺的HE染色对比图。
[0009]图1中I是主气管，2是肺灌注导管，主要对应【具体实施方式】中的步骤(3);图2中3是正常肺，4是用博来霉素诱导左侧肺肺纤维化两周后的肺；图3中5是正常肺的HE染色，6是博来霉素灌注后两周肺的HE染色，7是博来霉素灌注后两周肺的Masson Trichrome染色，8是博来霉素灌注后两周肺的天狼星红染色，可体现本发明实验方法真实模拟肺纤维化的病理过程。图4中9是正常肺的HE染色，10是博来霉素灌注后一周肺的HE染色，可体现终末细支气管上皮增生，肺泡壁损伤，炎细胞浸润，11是博来霉素灌注后两周肺的HE染色，可体现肺泡壁增厚，肺泡上皮再生，肺泡壁纤维母细胞增生，炎细胞浸润，12是博来霉素灌注后三周肺，可体现肺泡壁纤维化，肺泡壁肉芽肿形成，炎细胞浸润，总体表现了早期肺泡壁破坏、炎症反应、纤维膜细胞增生到中后期的胶原纤维沉积、肉芽肿形成、血管新生、细小支气管慢性病变等明确的肺纤维化病理改变。
【具体实施方式】
[0010]下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0011]以Sprgue-Dawley (SD)雄性大鼠为例，提供一种制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，包括步骤为:
[0012](I)用50mg/kg戊巴比妥钠诱导麻醉动物。
[0013](2)动物颈部正中线剃毛，消毒，切开暴露主气管。在气管软骨环之间行气管切开，气管插管，连接呼吸机，呼吸比为1: 2，频率为110次/分钟，潮气量为约10ml/kg。
[0014](3)沿气管插管通道导入PE-50导管进入左肺主支气管，缓注博来霉素，150ul。然后启动呼吸机，使得动物在呼吸机的控制下呼吸4-5分钟，促使博来霉素液体均匀分布与左肺。
[0015](4)造模完成，缝合气管、逐层缝合各组织。缝合完毕，消毒表皮。
[0016](7)术后动物安置在37度温控毯，时时观察，直至完全清醒，返回饲养房。
[0017]博来霉素诱导的肺纤维化动物模型广泛应用于肺纤维化研究的模型之一，是公认的药效评价模型。本发明采用博来霉素诱导单侧肺肺纤维化动物模型，符合目前肺纤维化动物模型制作的基本理念。能真实模拟肺纤维化的病理过程，模型成功率高，稳定性好，死亡率低。改变了目前非选择性双肺肺纤维化模型的诸多弊端。可观察到早期肺泡壁破坏，炎症反应，纤维膜细胞增生，中后期的胶原纤维沉积，肉芽肿形成，血管新生，细小支气管慢性病变等明确的肺纤维化病理改变。
[0018]本发明具有的优点有:在实验大鼠上建立与人类肺纤维化疾病高度相似疾病模型用于肺纤维化疾病的病因学，病理学和药学评价的模型。开发一种简单易行、能广泛推广的、可真实模拟肺纤维化自然发生过程、模型稳定的方法。因其病理过程与人慢性肺纤维化病理过程高度相似，具备较高病因学和病理学研究价值，在对抗肺纤维化药物的评价中具有重要意义。
[0019]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种制作大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为:麻醉动物，气管切开、气管插管，单侧肺博来霉素灌注，缝合气管，术后护理。2.根据权利要求1所述的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为:气管切开、气管插管的手术操作和步骤。3.根据权利要求1所述的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为:所述的博来霉素剂量为1.5，3.0，5.0mg/kg。4.根据权利要求1-3任一所述的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征在于，所述动物为各种种系和性别的实验大鼠。
【专利摘要】本发明涉及医疗技术领域，特别是涉及一种制作试验大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法。本发明公开了一种制作大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法，包括步骤为：麻醉动物；气管插管，单侧肺博来霉素灌注，术后护理；单侧肺博来霉素灌注浓度分别为1.5、3.0、5.0mg/kg。该方法制作过程简单，可广泛推广，实验成果率高，结果稳定，病变变异小，死亡率低。因其病理过程与人慢性肺纤维化病理过程高度相似，具备较高病因学和病理学研究价值，在对抗肺纤维化药物的评价中具有重要意义。
【IPC分类】A61K38/14
【公开号】CN105148254
【申请号】CN201510252698
【发明人】庄永杰, 陈继巧
【申请人】南京凯斯艾生物科技有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年5月15日