Agilent Zorbax SB C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0046] 流动相：A为乙腈，B为0. 1 %甲酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 0);
[0047] 梯度洗脱程序：0 ~5min，A 35%;5 ~10min，A 35%-70%;10 ~15min，A 70% -35% ;
[0048] 15 ~20min，A 35% ;
[0049] 流动相流速：1. OmL · min S
[0050] 检测波长：274nm ;
[0051] 柱温：30°C;
[0052] 进样量 10 μ L。
[0053] 对用10批不同批次樱桃叶制备的提取物进行分析，建立指纹图谱进行匹配，结果 1~9号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定9个峰为共有指纹峰，据此建立该提取 物的HPLC指纹图谱，结果见图1。
[0054] 实施例7 :樱桃叶提取物药理试验
[0055] 一、实验材料
[0056] 1、动物：SD系大鼠和NIH小鼠购自广东省医学实验动物中心。
[0057] 2、药物与试剂：樱桃叶提取物①~⑤分别依照实施例1~5所述方法制得，使 用前用蒸馏水混悬；西米替丁胶囊，（中外合资）尼克美制药（中山）有限公司产品，批 号：140301 ;西米替丁注射剂，购自广州中医药大学第一附属医院，批号：140401 ;利血平 注射剂，上海医科大学红旗制药厂，批号：141003 ;乙醇，分析醇纯，广州化学试剂厂，批号： 141201 ;吐温-80,广州市医药公司化学试剂玻璃仪器批发部，批号：140115。
[0058] 3、仪器：三用电热恒温水浴箱，上海跃进医疗器械厂产品。
[0059] 二、实验方法和结果
[0060] 1、对大鼠改进的急性胃粘膜损伤模型的影响
[0061] 取SD大鼠 110只，禁食24h，随机分成11组，每组10只，即对照组、樱桃叶提取 物①~⑤分别设高、低剂量组，樱桃叶提取物①~⑤灌胃给予樱桃叶提取物①~⑤，对照组 灌胃等容积蒸馏水，50min后每只大鼠灌服盐酸-乙醇溶液1. 5ml，再过50min脱颈椎处死 大鼠，剖腹取出大鼠胃，用夹子夹住食管，由幽门每胃灌入1%甲醛溶液5ml，并将全胃置于 1 %甲醛中固定lOmin。然后沿胃大垂剪开大鼠胃，观察胃黏膜损伤的情况，以损伤长度（若 损伤长度大于1_则加倍）总和的毫米数作为溃疡指数，进行统计学处理，计算溃疡抑制百 分率，分析药物作用。结果见表1(注：**:与对照组相比有非常显著性差异（P〈〇.〇l) 与 对照组相比有显著性差异（P〈〇. 05);下表皆同）。溃疡抑制率（％) =(对照组溃疡长度 总和-实验组溃疡长度总和）/对照组溃疡长度总和X 100%
[0062] 表1樱桃叶提取物对大鼠急性胃黏膜损伤的影响（X土s)
[0064] 2、对小鼠利血平型急性胃溃疡的影响
[0065] 取NIH小鼠120只，禁食24小时，随机分组为模型组、西米替丁组、樱桃叶提取物 ①~⑤高、低剂量组，各组动物腹腔注射给药。lh后各组动物均予利血平5mg/kg。模型组： 蒸馏水+0. 2%吐温-80腹腔注射；西米替丁组：西咪替丁 0. 2mg/kg腹腔注射；樱桃叶提取 物低剂量组：150mg/kg樱桃叶提取物+0. 2 %吐温-80腹腔注射；樱桃叶高剂量组：300mg/ kg樱桃叶提取物+0. 2%吐温-80腹腔注射。各组注射药物lh后，腹腔注射5mg/kg利血平， 18h后处死小鼠。取胃前向注入1 %甲醛溶液lml，将全胃浸入胃醛溶液中，固定lOmin。取 出胃，沿胃大弯剪开，冲洗杂物，展开胃于平台上，用放大镜观察溃疡形成的情况。溃疡指数 和抑制率的测定方法同上。结果见表2。
[0066] 表2樱桃叶提取物对小鼠利血平型胃溃疡的影响（X土s)
[0068] 3、对大鼠醋酸慢性胃溃疡的影响
[0069] 取清洁级大鼠120只，体重180~200g，雌雄各半，随机分组。实验前，大鼠先禁食 12小时自由饮水。实验时，将动物用乙醚轻度麻醉，常规消毒。剑突下腹部正中切开1. 5~ 2cm，用无齿镊子将胃轻轻拉出，在胃的腹外侧面，胃体与胃幽门窦交界处，将微量注射器平 刺入胃浆膜下0. 4~0. 5mm，注射0. 8 %醋酸0. 02ml，形成丘疹。将胃轻轻送回，缝合腹壁 肌和皮肤。用碘酒、酒精消毒，外涂青霉素，常规饲养。从手术第二天开始，每天灌胃给药一 次，对照组给予等容积的生理盐水（含0. 2 %吐温-80)，连续给药11天，第12天处死大鼠， 开腹，取胃，同时向胃注入1 %甲醛溶液5ml，将全胃浸入甲醛溶液中，固定lOmin。沿胃大弯 剪开，用溃疡的最长径与最短径的均值表示溃疡指数，进行统计学处理，计算溃疡愈合百分 率，评定药物对溃疡愈合的促进作用。结果见表3。愈合百分率（％) =(对照组溃疡直径 均值总和-实验组溃疡直径均值总和）/对照组溃疡直径均值总和X 100
[0070] S = 31 X (d/2) X (d2/2)
[0071] S :溃疡面积；:π :圆周率；dl :溃疡最长径；d2 :溃疡最短径
[0072] 表3樱桃叶提取物对大鼠醋酸损伤型胃溃疡的影响（X土s)
[0074] 本实验以盐酸-乙醇损伤、利血平诱导以及醋酸方法造成实验性胃溃疡，研究本 发明提供的樱桃叶提取物对多种胃溃疡的影响。实验结果表明，本发明提供的樱桃叶提取 物对小鼠利血平型胃溃疡、大鼠急性胃黏膜损伤、大鼠醋酸损伤型胃溃疡具有明显的抑制 作用；苦参含量对樱桃叶提取物的前述药理活性具有至关重要的影响。
[0075] 实施例8 :片剂的制备
[0076] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:8的比例加入赋形剂，制 粒压片。
[0077] 实施例9 : 口服液的制备
[0078] 按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。
[0079] 实施例10 :胶囊剂或颗粒剂的制备
[0080] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制 成胶囊或颗粒剂。
[0081] 实施例11 :注射液的制备
[0082] 按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0083] 实施例12 :无菌粉针的制备
[0084] 按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗 过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
[0085] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。
【主权项】
1. 一种樱桃叶提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：(a)以重量计，每100 份药材包含干燥的樱桃叶80~90份和干燥的苦参10~20份，混合粉碎；(b)用乙醇热 回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液；(c)对步骤（b)浓缩液依次用石油醚、 乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（d)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用20~30%乙醇冲洗7~9个柱体积除杂，再用 55~65%乙醇洗脱9~11个柱体积，收集55~65%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。2. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（d)中所述大孔树脂为AB-8型大 孔树脂。3. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（b)中所述用乙醇热回流提取采 用的乙醇浓度为65~75%。4. 根据权利要求3所述的提取物，其特征在于：步骤（b)中所述用乙醇热回流提取采 用的乙醇浓度为70%。5. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（d)为用正丁醇萃取物用大孔树 脂富集，先用25%乙醇冲洗8个柱体积除杂，再用60%乙醇洗脱10个柱体积，收集60%乙 醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。6. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为： 色谱柱：AgilentZorbaxSBC18 柱（4.6mmX250mm，5ym); 流动相：A为乙腈，B为0. 1 %甲酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 0); 梯度洗脱程序：〇 ~5min，A35% ;5 ~lOmin，A35% - 70% ;10 ~15min，A70% -35% ;15 ~20min，A35% ; 流动相流速：1.OmL·minS 检测波长：274nm; 柱温：30°C; 进样量10μL。7. 药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可接 受的载体。8. 权利要求1所述的提取物在制备治疗胃溃疡的药物中的应用。9. 权利要求7所述的药物制剂在制备治疗胃溃疡的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种治疗胃溃疡的樱桃叶提取物及其制备方法，制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含干燥的樱桃叶80～90份和干燥的苦参10～20份，混合粉碎；(b)用乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液；(c)对步骤(b)浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(d)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用20～30％乙醇冲洗7～9个柱体积除杂，再用55～65％乙醇洗脱9～11个柱体积，收集55～65％乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。该提取物对胃溃疡具有治疗作用。
【IPC分类】A61K127/00, G01N30/02, A61K36/736, A61P1/04
【公开号】CN105287782
【申请号】CN201510683220
【发明人】李敬, 殷旭东
【申请人】李敬
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月19日