山蜡梅叶片在制备抑制黑色素瘤细胞b16细胞增殖药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种山蜡梅叶片在制备抑制黑色素瘤细胞 B16细胞增殖药物中的应用及山蜡梅叶片的制备方法。
【背景技术】
[0002] 山蜡梅叶片标准号WS-11310(ZD-1310)-2002,记载于国家中成药标准汇编内科内 科肺系(一)分册。由山蜡梅叶1500g作为原料药制成，具有辛凉解表，清热解毒的功效。用于 风热感冒，发热，恶寒，咽痛。
[0003] 现有技术中，尚未有山蜡梅叶片在在制备抑制小鼠黑色素瘤细胞B16细胞增殖药 物中的应用的报道，也未见有山蜡梅叶片提取制备方面采用超临界萃取的报道，而水煎煮、 水蒸气蒸馏法提取挥发油的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服 用，严重影响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：本发明的目的在于提供一种山蜡梅叶片在制备抑制黑色素瘤细胞B16 细胞增殖药物中的应用。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种山蜡梅叶片的制备方法。
[0006] 本发明的目的是通过如下的方案实现的： 山蜡梅叶片在制备抑制黑色素瘤细胞B16细胞增殖药物中的应用，所述山蜡梅叶片由 山錯梅叶1500g作为原料药制成，所述山錯梅叶片的制备方法由下列步骤组成：取山錯梅 叶，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C〇2流量l_3ml/g生药· min，萃取时间700-800min，得 超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重 0 · 35g〇
[0007] 优选的，上述的山蜡梅叶片在制备抑制黑色素瘤细胞B16细胞增殖药物中的应用， 所述山蜡梅叶片的制备方法由下列步骤组成:取山蜡梅叶，加入到CO 2超临界萃取器中，乙 醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40°C，C0 2流 量2ml/g生药· min，萃取时间750min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇 制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.35g。
[0008] 现有技术中，山蜡梅叶片口服，一次6~7片，一日3次。山蜡梅叶片服药量大。采用 本发明方法制备成的山蜡梅叶片每片重〇.35g，每次仅需3片，一日服用3次。在具有更多活 性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
[0009] 试验一、不同方法制备的山蜡梅叶片中槲皮素和山柰素含量的比较 1、仪器及试药本发明山蜡梅叶片:按实施例1方法制备，使用1500g原料药，经提取制成 500片，每片重0.35g。原山蜡梅叶片，按照WS-11310 (ZD-1310) -2002标准方法制备。 Agilentl200高效液相色谱仪;METTLER AE240电子分析天平;槲皮素和山柰素对照品（中国 药品生物制品检定所）。
[0010] 2、方法 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
[0011]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.5%磷 酸溶液(45: 55)为流动相;检测波长为365nm。理论板数分别按槲皮素、山柰素峰计算均应不 低于1500。
[0012]对照品溶液的制备精密称取槲皮素、山柰素对照品适量，分别加甲醇制成每1ml 含6μ g、8μ g的溶液，即得。
[0013 ]供试品溶液的制备取本发明山蜡梅叶片10片，精密称定，研细，取0.60g，精密称 定，加甲醇加热回流2次(50ml、50ml )，每次1小时，滤过，合并滤液，残渣加甲醇适量洗涤，滤 过，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至3~4,加醋酸乙酯振 摇提取5次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至IOml量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0014] 对照产品供试品溶液的制备取对照的山蜡梅叶片20片，精密称定，研细，取 1.2g，精密称定，加甲醇加热回流2次(50ml、50ml)，每次1小时，滤过，合并滤液，残渣加甲醇 适量洗涤，滤过，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至3~4， 加醋酸乙酯振摇提取5次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移 至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0015] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液、对照产品供试品溶液各5μ1，注 入液相色谱仪，测定，即得。
[0016] 3、结果 结果表明，本发明山蜡梅叶片中槲皮素和山柰素的含量为220-362^^ /片;而原山蜡梅 叶片中槲皮素和山柰素的含量为36μ8 /粒，每次服用量3片的槲皮素和山柰素含量为原片 剂6粒含量的3-5倍，在服用量减少的情况下，槲皮素和山柰素含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明，采用本发明制备方法制备的山蜡梅叶片，有效成分含量远远高于 WS-11310 (ZD-1310) -2002标准记载的方法制备的山蜡梅叶片。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解 本发明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述 内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0019] 实施例1 取山蜡梅叶1500g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂 的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药· min，萃取时间750min， 得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片 重0.35g。
[0020] 经检测，成品中槲皮素和山柰素的含量为362μ8 /片。
[0021] 实施例2 取山蜡梅叶1500g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂 的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30°C，CO2流量lml/g生药· min，萃取时间800min， 得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片 重0.35g。
[0022]经检测，成品中槲皮素和山柰素的含量为22(?^ /片。
[0023] 实施例3 取山蜡梅叶1500g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂 的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度60°C，C02流量3ml/g生药