54] 培养的植物细胞通常与作为干粉或粒状生物质的食物组分混合。例如，粉末状的 植物细胞可与面粉混合，或者在食物例如烘焙制品中用作面粉，或者与饮料例如乳或果汁 混合，或者加入液体或悬浮液例如酸奶中或掺入面团内（例如用稀面糊(batter)挤出以制 备面团）。研磨或未研磨的粒状植物细胞可包括在燕麦棒或谷物中。
[0055] 在一些实施例中，食物组分还可包括粉末或粒状组分。在一些实施例中，食物组分 的中值粒度可小于15(^111、10(^111、5(^1]1或1(^111，和/或大于0.5以111、]^1]1或5以111，或在前述较高尺 寸和较低尺寸的范围内。
[0056] 当与面粉组合或烘焙成食物产品时，培养的植物细胞可与食物组分密切混合。可 替代地，植物细胞和食物组分的混合物可为更宏观的。例如，植物细胞片可与传统片（例如 来源于栽培玉米的玉米片）混合。在一个实施例中，食物组分可为面粉、油、糖、乳制品、水 果、肉、草药和/或香料(spice)。
[0057] 食物产品中包括的培养的植物细胞的量可极大改变。然而，包括足够的植物细胞， 以对食物产品的营养或其他所需特性具有显著影响。在一些实施例中，培养的植物细胞的 量为按食物产品的重量计至少1%、5%、10%或20%，和/或按食物产品的重量计小于80%、 50%、30%、15%或5%，和/或在前述较高值和较低值的范围内。
[0058] 在一些实施例中，培养的植物细胞可用作亮肤剂。当用作亮肤剂时，培养的植物细 胞足够缺乏色素(例如花青素），当加入皮肤病学组分(dermatological component)、功能 食物组分或饮食补充剂组分中时，培养的植物细胞稀释总色素浓度，由此增亮生物学相容 性组合物。
[0059] V.用于选择具有所需特性的细胞系的方法
[0060] 如所述的，本发明的培养的细胞选择为具有所需特性，例如高多酚和/或特定代谢 产物，同时使某些化合物例如花青素、叶绿素和/或绿原酸的产生降到最低。下述方法提供 了技术的例子，所述技术可用于鉴定产生的细胞系中的所需特点，由此允许选择特别需要 的细胞系。可选择具有所需特性的细胞系，并且改变生长条件，以诱导细胞系中的变化直至 获得所需结果。
[0061 ] 越橘细胞的代谢产物谱分析
[0062]开发LC/PDA/MS方法，以测定通过越橘悬浮细胞产生的次级代谢产物的量和种类。 使用自动采样器，将1〇μ1越橘细胞提取物注射到配备超水性C18,3ym，100x2. Imm柱的 Waters 626HPLC内。代谢相由各自含有0.1 %甲酸的水(溶剂A) /乙腈(溶剂B)梯度组成。梯 度经过35分钟为90%A/10%B，在20分钟内至60%A/40%B，随后在30分钟内至100%B，随后 为在100%B处的5分钟保留。流速为0.3ml/分钟。检测通过从191到780nm的Waters 2996光 电二极管阵列(PDA)检测器，随后为四极杆质谱仪检测。质谱仪为以电喷射正电离模式(ESI + )操作的Micromass Quattromicro仪器，伴随从198到1980amu的四级杆扫描。使用这种方 法，由越橘细胞阐明一系列多酚次级代谢产物(图1)。
[0063] 用于测试活性的方法
[0064]越橘多酚的抗氧化剂活性是众所周知的且相对易于在实验上显示。体外抗氧化剂 测定例如ORAC、FRAP、FCR、TEAC、TRAP和DPPH是广泛使用的，并且在越橘中产生的多酚的抗 氧化能力是有据可查的（Huang D.，0u B.，Prior R.L.The chemistry behind antioxidant capacity assays.J Agric Food Chem.2005,23；53(6)：1841-56；Maatta-Riihinen KR，Kahkonen MP，Torronen AR等人Catechins and procyanidins in berries of vaccinium species and their antioxidant activity.J Agric Food Chem.2005,2； 53(22) :8485-91)。关于越橘多酚的抗炎活性的证据也是丰富的，并且几种体外测定已用于 该背景下（Triebel S , Tr ieu HL,Richling E .Modulation of inflammatory gene expression by a bilberry(Vacc inium myrtillus L.) extract and single anthocyanins considering their limited stability under cell culture conditions.J Agric Food Chem.2012,12；60(36)：8902-10；Chen J,Uto T,Tanigawa S, Kumamoto T?Fujii M?Hou DX.Expression profiling of genes targeted by bilberry (Vaccinium myrtillus)in macrophages through DNA microarray.Nutr Cancer.2008； 60Suppl I ：43-50；Karlsen A?Paur I ? B0I111 SK?Sakhi AK，Borge GI，Serafini M，Erlund I?Laake P，Tonstad S，Blomhoff R.Bilberry juice modulates plasma concentration of NF-kappaB related inflammatory markers in subjects at increased risk of CVD.Eur J Nutr.2010,49(6):345-55)。抗炎剂的功效通常通过其降低炎性标记物例如细 胞因子IL-UIL-6和IL-8、TNF-a的水平，以及更一般地阻断NF-kB的作用的能力进行测量。 [ 0065]抗氧化能力的测定
[0066] ORAC和总多酸含量用于测定越橘细胞的抗氧化潜力。如通过Brunswick Labs(用 于ORAC测试的行业领导者)测定的ORAC值为>10，000umole TE/g。如通过Folin-Ciocalteu 测定来确定的总多酚含量为按干重计> 20 % PP。
[0067] 针对促炎细胞因子TNF-α和I LI 4的活性的测定
[0068]越橘细胞提取物在促炎细胞因子抑制测定中进行测试。测定使用由脂多糖刺激的 经分离的人单核细胞，并且设计为测量在测试物质的存在下的TNF-α和IUI的抑制。诱导 的TNF-α和IL-Ιβ蛋白质通过ELISA进行测量。（Osteoarthritis Cartilage · 2002Dec; 10 (12) :961-7)对该测定添加越橘细胞提取物导致脂多糖诱导的细胞因子产生的显著抑制。 [0069] 基于细胞的针对NF-κΒ的测定
[0070] 越橘细胞提取物在基于细胞的生物测定中测试针对NF-κΒ的抑制活性，作为提取 物的抗炎活性的证实。A204NF-KB基于细胞的生物测定显示越橘细胞提取物降低NF-κΒ的水 平，且导致炎症应答的改善。
[0071] NF-kB ELISA测定
[0072] 该测定使用具有结合的NF-κΒ生物素化的共有序列的链霉抗生物素蛋白包被的平 板，以仅捕获活性形式的NF-kB。所捕获的活性NF-κΒ与特异性NF-κΒ p65抗体一起温育，所 述特异性NF-κΒ p65抗体随后使用HRP缀合的二抗进行检测。测定用化学发光底物进行显 色，并且信号使用光度计进行检测。
[0073] 脂多糖(LPS)诱导的炎症模型
[0074] LPS诱导的炎症模型提供了关于治疗候选物的功效研究的测试系统，所述治疗候 选物旨在降低和/或消除过度炎症应答。在LPS施用后，能够测量且表征召募的白细胞的细 胞谱，以及测量促炎细胞因子〇即-€(、几-10、11^6、几-1〇等)或诱导性一氧化氮（丨勵5)的水 平。LPS诱导的水肿提供了用于表征越橘细胞提取物的细胞因子调节活性的有用的功能模 型。
[0075] IL-Ιβ表达的抑制
[0076]伴随脂多糖(LPS)的刺激，IL-Ιβ是过表达的并且它的产物通过炎症信号转导而增 加。人二倍体成纤维(HDF)细胞用LPS和不同体积的越橘细胞提取物进行处理，并且每6小时 收集HDF细胞，以通过蛋白质印迹定量IL-Ιβ表达。将定量的蛋白质与溴酚蓝染料溶液混合， 并且随后实施10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)。在电泳后，将蛋白质转移至聚偏 二氟乙烯膜(Millipore)，并且浸入含0.5%脱脂乳的TBS(Tris缓冲盐水)-吐温溶液（IOmM Tris.HCUlOOmM NaCl、0.l%Tween 20，pH 7.5)中，以阻断非特异性反应。随后，允许膜与 对于IL-Ιβ的抗小鼠抗体的1:500稀释物在室温下反应3小时，并且随后与作为二抗的抗小 鼠 IgG抗体反应。在反应完成后，膜用TBS(Tris缓冲盐水)-吐温溶液洗涤4次，并且允许与 ECL(增强化学发光)检测试剂反应1分钟，并且随后在室温下暴露于X光胶片。结果证实IL-I β在通过LPS与越橘细胞提取物处理的样品中是降低的。
[0077] IL-8表达的抑制
[0078]伴随脂多糖(LPS)的刺激，IL-8是过表达的并且它的产物通过炎症信号转导而增 加。人二倍体成纤维(HDF)细胞用LPS和不同体积的越橘细胞提取物进行处理，并且每6小时 收集HDF细胞，以通过蛋白质印迹定量IL-8表达。将定量的蛋白质与溴酚蓝染料溶液混合， 并且随后实施10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)。在电泳后，将蛋白质转移至聚偏 二氟乙烯膜(Millipore)，并且浸入含0.5%脱脂乳的TBS(Tris缓冲盐水)-吐温溶液（IOmM Tris.HCUlOOmM NaCl、0.l%Tween 20，pH 7.5)中，以阻断非特异性反应。随后，允许膜与 对于IL-8的抗小鼠抗体的1:500稀释物在室温下反应3小时，并且随后与作为二抗的抗小鼠 IgG抗体反应。在反应完成后，膜用TBS(Tris缓冲盐水)-吐温溶液洗涤4次，并且允