许与ECL (增强化学发光)检测试剂反应1分钟，并且随后在室温下暴露于X光胶片。结果证实IL-8在 通过LPS与越橘细胞提取物处理的样品中是降低的。
[0079] 角叉菜胶诱导的大鼠爪水肿炎症模型
[0080]通过角叉菜胶诱导的炎症是急性、无免疫、充分研究和高度重现性的。炎症主征-水肿、痛觉过敏和红斑-在皮下注射后立即发展，起因于促炎因子-缓激肽、组胺、速激肽、补 体和活性氧、以及氮分子(nitrogen species)的作用。此类因子可在创伤部位处原位生成 或通过浸润细胞生成。嗜中性粒细胞迅速迀移至炎症部位，并且可生成促炎活性氧及其他 种类。炎症应答通常通过爪尺寸的增加(水肿)进行定量，所述爪尺寸在角叉菜胶注射后大 约5小时是最大的，并且通过炎症级联内的特异性分子的抑制剂进行调节。小鼠爪水肿用于 测试越橘细胞提取物的抗炎活性。
[0081] 人皮肤急性炎症测定
[0082]新鲜的全层厚度皮肤样品在伦理上得自美容外科手术。该测定通过局部加入越橘 细胞提取物或将越橘细胞提取物加入培养基中（模拟全身存在），用于评价越橘细胞的抗炎 效应。验证的测定对于LPS、PHA和UV光诱导的急性炎症可获得。上清液可就大范围的细胞因 子、生物标记物和炎症调节剂进行分析，使用从相同活组织检查可能的多个时间点取样。
[0083] VI.实例
[0084] 实例 1
[0085] 实例1描述了用于获得具有所需多酚谱的培养的细胞的方法，其中多酚浓度基于 干重很高，而花青素和叶绿素色素的浓度很低或不存在。
[0086]新鲜的欧洲越橘材料例如在不同成熟阶段时的叶和衆果得自Corval I i S，Oregon， USA的Oregon State University。叶和衆果取自在Oregon地方性生长的样本。在原材料灭 菌后，收集外植体且置于具有不同生长培养基的皮氏培养皿中。在培养数周后，外植体开始 去分化成愈伤组织材料。随后选择最增殖性和松散型的愈伤组织，并且移动到液体悬浮液 内用于进一步的细胞选择。
[0087] 一旦悬浮于液体培养基中，细胞系就经过数月关于生长特征和原花青素生产重复 选择，使用修饰版本的Swain和Hi 11 is方法以及Porter等人方法。丁醇-HCl提取测定用于测 量在基于丙酮的欧洲越橘提取物中，以(-)_表儿茶素和花青色素单体水解的那些原花青素 的浓度；将出现与单体浓度关联的粉红色，并且通过在520nm处的吸光度进行测量。使用 Folin-Ciocalteau测定来测量越橘细胞提取物的总多酸含量，且以没食子酸当量表示。 [0088]经过三年选择过程，多酚(和占优势的原花青素）的产生增加大致30x倍，如下文再 现的图3中突出显示的。在开发过程中晚期的一些较低数据点的存在仅揭示测试最佳生长 和生产条件的不同实验。在三年开发自始至终，分析了超过1〇,〇〇〇种细胞系，并且使用适于 高流通量筛选和巨大相关数据生成的生物信息学平台进行排序。图3显示了通过培养的越 橘细胞系的多酚生产的时序，其举例说明了生成的数据。
[0089]在反复选择后获得的最终产物是产生按干重计约30%多酚的细胞系，其中大比例 的多酚由原花青素构成，如举例说明了培养的越橘细胞的HPLC谱的图4中所示。
[0090]特定细胞系就其高生长率和原花青素的产生加以选择。代谢组成谱是令人惊讶 的，因为细胞系由浆果外植体生长，但代谢组成更接近于越橘叶的那种。绿原酸令人惊讶地 不存在，有可能作为朝向其他多酚例如原花青素的再定向流出的补偿。
[0091]下表1提供了与整颗浆果(第二列）、整片叶(第三列)和来自浆果的商业提取物(第 四列)相比较，在本发明的培养的细胞(第一列）中发现的多酚化合物的比较。
[0094]如表1中可见，培养的细胞在多酚方面更类似于整片叶而不是整颗浆果或提取物， 但就其他化合物例如绿原酸而言仍不同于整片叶。 _5] 实例2:冷冻干燥的研磨的越橘细胞粉末的制备
[0096]实例2描述了冷冻干燥的越橘材料的制备。从生物反应器中收获通过实例1的方法 制备的新鲜的越橘细胞，并且将细胞用DI水洗涤以去除残留的耗尽培养基。将细胞冷冻，随 后冷冻干燥至< 5 %水分。将干燥细胞通过250μπι筛磨碎，以获得灰白色粉末。
[0097] 实例3:越橘细胞提取物的制备
[0098]实例3描述了用于制备越橘细胞提取物的方法。将新鲜或干燥的越橘细胞悬浮于 一定体积的70%乙醇中。将混合物匀浆化随后过滤，以获得澄清滤液。固体细胞团块用另一 份70 %乙醇再提取，且再次过滤。将合并的滤液蒸发至干燥，以获得粗制越橘细胞提取物。 [0099] 实例4:皮肤病学制剂
[0100]实例4提供了根据本发明的一个实施例的化妆乳霜的制剂。
[0102] 实例5:皮肤病学制剂
[0103] 实例5提供了根据本发明的一个实施例的示例皮肤病学制剂。
[0106] 实例6:功能皮肤病学软膏
[0107]实例6提供了根据本发明的一个实施例的皮肤病学软膏的制剂。
【主权项】
1. 一种生物学相容性组合物，所述生物学相容性组合物包含： 培养的越橘细胞，所述培养的越橘细胞包括在干重基础上至少10 %的多酚化合物和小 于1.0 %干重的花青素化合物;和 一种或多种生物学相容性组分，所述一种或多种生物学相容性组分包括皮肤病学组分 或食物组分，所述生物学相容性组分与所述培养的越橘细胞混合，以获得所述生物学相容 性组合物。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述多酚化合物包括至少50%的选自由（-)-表 儿茶素、（+ )_儿茶素、原花青素、懈皮素、异懈皮素(懈皮素3-〇_匍糖苷）、懈皮素3-〇_阿拉伯 糖、柚皮素或这些的组合组成的组中的一种或多种抗氧化剂和/或抗炎化合物。3. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述培养的细胞具有小于1%绿原酸。4. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种生物学相容性组分是皮肤病学 组分，并且所述皮肤病学组分和所述培养的细胞的组合获得皮肤病学悬浮液、乳状液、糊 剂、凝胶、乳膏、洗剂、粉末、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳状液粉底、蜡粉 底或喷雾剂。5. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物配制为糊剂、乳膏或凝胶，所述组合 物包括动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二 氧化硅、滑石或氧化锌。6. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种生物学相容性组分是食物组分， 并且所述食物组分和所述培养的细胞的组合获得功能食物。7. 根据权利要求6所述的组合物，其中所述食物组分包括面粉、油、糖、乳制品、水果、 肉、草药、香料或其组合。8. 根据权利要求6所述的组合物，其中所述功能食物是煎饼、饼干、沙拉酱、冰沙、乳、烤 饼、炸薯片、酸奶、干酪、蔬菜制品、豆类制品、鸡蛋制品、面包、谷物或面团。9. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种生物学相容性组分是食物组分， 并且所述食物组分和所述培养的细胞的组合获得饮食补充剂。10. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述饮食组分是维生素、矿物质、植物性药材、 氨基酸、酶、器官组织、腺体或代谢产物。11. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述饮食补充剂配制为片剂、胶囊、软胶囊、囊 形片、液体或粉末。12. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括浓度范围为按重量计0.1%-20%的培养的细胞。13. 根据权利要求12所述的组合物，其中所述培养的细胞是选自由节、节间、嫩叶、成熟 叶、茎、根及其组合组成的组中的非花营养组织的细胞。14. 一种用于制备生物学相容性组合物的方法，所述方法包括： 在包括液体培养基的悬浮培养物中培养经分离的越橘细胞； 通过去除所述液体培养基收获所述培养的越橘细胞，并且任选从所述培养的越橘细胞 获得提取物;和 将收获的所述培养的越橘细胞或其提取物与选自皮肤病学组分或食物组分的至少一 种或多种生物学相容性组分混合。15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述越橘细胞和液体培养基选择为产生这样的 培养的细胞，所述培养的细胞具有在干重基础上的至少25%多酚化合物、小于1.0%花青素 化合物和小于1 %绿原酸。16. 根据权利要求14所述的方法，其中所述组合物包括浓度范围为按重量计0.1%-20%的培养的细胞。17. 根据权利要求14所述的方法，其中所述培养的越橘细胞的提取物与所述生物学相 容性组分混合，其中所述提取物通过使用提取溶剂提取所述越橘细胞进行生产，所述提取 溶剂包括水、无水或水性的含有1-4个碳的低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷 (CH2C12)、氯仿、己烷、1，3_ 丁二醇或其组合。18. 根据权利要求14所述的方法，其中所述至少一种组分是皮肤病学组分，所述皮肤病 学组分与所述培养的越橘细胞或其提取物组合，以获得溶液、悬浮液、乳状液、糊剂、凝胶、 乳膏、洗剂、粉末、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳状液粉底、蜡粉底或喷雾 剂。19. 一种生物学相容性组合物，所述生物学相容性组合物包含： 包括培养的越橘细胞的干粉，所述培养的越橘细胞具有在干重基础上的至少20 %多酚 化合物、小于1.0 %花青素化合物和小于1 %绿原酸。20. 根据权利要求19所述的组合物，其中所述培养的细胞是选自由节、节间、嫩叶、成熟 叶、茎、根及其组合组成的组中的非花营养组织的细胞。
【专利摘要】本发明公开了组合物，包括与化妆品组分或食物组分混合的培养的越橘细胞或其提取物，以获得化妆品、饮食补充剂和/或功能食物。培养的越橘细胞或提取物可具有高水平的多酚，伴随很少的花青素或无花青素。与来自常规越橘植物组织的多酚级分相比较，来自培养的越橘细胞的多酚级分是独特的。培养的细胞具有高水平的天然黄酮醇、黄烷-3-醇和原花青素，但显著缺乏花青素和绿原酸。
【IPC分类】A61K8/97, A61Q19/00, A23L33/10, A61Q19/08, A61K36/45
【公开号】CN105473129
【申请号】CN201480045088
【发明人】科尔比·G·考德威尔, 圣镛·H·尹
【申请人】戴安娜植物科学公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2014年6月26日
【公告号】EP3013428A1, US20150004142, WO2014210391A1