2kgf/cm 2 和减压时的压力为600±50mmHg。将提取温度设定为75°C。对从所述变压提取装置中获得的 人参提取物进行过滤，然后在减压下干燥上清。将所获的干燥产品(干重= 〇.57g)溶解于水 中，然后用乙酸乙酯进行提取。待去除所述乙酸乙酯层后，用丁醇提取所述水层，然后在减 压下进行干燥(干重=2.7g)。
[0072] 在以下分析仪器和分析条件下，通过利用HPLC分析实施例1的人参提取物中所含 有的人参皂苷。基于其结果，将所述提取物中含有的各人参皂苷成分的含量以单位wt%进 行计算。其结果在表2和图2中展示。
[0073] HPLC分析仪器及分析条件
[0074] 仪器:Waters 2998PDA检测仪、1525栗、2707自动进样器；
[0075] 柱：Sun fire C18 305ym，4.6xl50mm;
[0076] 检测仪：UV 203nm;
[0077] 流量：lmL/分钟；
[0078]注射量：20yL;
[0079]条件:梯度(A:水，B:乙腈）。
[0080]【表1】
[0084] 如表2和图2中所示，本发明的实施例1的人参提取物包含2.91wt%(即，2.5wt%或 以上）人参皂苷Rb2、3.14wt% (即，3wt%或以上）人参皂苷Rc、6.23wt% (即，6wt%或以上） 人参皂苷Re及2. Iwt % (即，2. Owt %或以上)人参皂苷Rgl。
[0085]【对比实施例1】普通的人参提取物的制备
[0086] 用水清洗人参(Geumsan人参，从Geumsaninsam Nonghyup购买），干燥，然后碎成细 粉。在75°C下，用IOOmL的50%乙醇提取2g所获的人参粉，提取两小时。待过滤之后，在减压 下干燥上清(干重= 0.30g)。
[0087] 在实施例1中使用的分析仪器和分析条件下，通过利用HPLC分析对比实施例1的人 参提取物中所含有的人参皂苷。基于其结果，将所述提取物中含有的各人参皂苷成分的含 量以单位wt%进行计算。其结果在表3和图3中展示。
[0088] 【表3】
[0090] 如表3和图3中所示，对比实施例1的人参提取物包含0.33wt %人参皂苷Rb2、 0.55￥七％人参皂苷此、0.16￥七％人参皂苷1^及0.14￥七％人参皂苷1^1。由此可确定，本发明 的实施例1的人参提取物中各人参皂苷的含量比普通的人参提取物多出5-15倍。此外，可以 确定在本发明的实施例1的人参提取物中所含有的人参皂苷的总重量比对比实施例1多出 很多。
[0091] 【测试实施例1】毛乳头细胞中毛发生长因子VEGF的表达的评估
[0092]通过采用体外系统涂抹所述人参提取物之后，评估血管内皮生长因子（VEGF)， VEGF是过渡到毛发周期中的生长期时所必要的用于血管形成的生长因子。
[0093] 将47岁成年男性的4xl05毛乳头细胞(DPC) (P. 11)接种于12孔板上，且在含有10% 胎牛血清(FBS)的DMEM培养基(Dulbecco ' s modif ied Eagle ' s medium)内培养一晚上。然 后，用实施例1或对比实施例1的20ppm人参提取物处理所述细胞。DMSO被用作阴性对照组。 待24小时后，收集(soup collect)经由实施例1或对比实施例1的提取物处理过的细胞培养 基，然后通过利用VEGF ELISA试剂盒（血管内皮生长因子的酶联免疫吸附检测；R&D Biosystems)研究VEGF的表达水平。其结果在图4中展示。
[0094] 如图4中所示，对比实施例1的普通人参提取物与未经人参提取物处理的对照组相 比没有显示出显著差异。反之，与对比实施例1中的人参提取物处于相同浓度的本发明实施 例1的人参提取物使毛乳头细胞中毛发生长因子VEGF的表达提高了约3倍。也就是说，与对 比实施例1的普通人参提取物相比，含有大量的人参皂苷Rb2、Rc、Rgl等的实施例1的人参提 取物有效地提高了所述毛乳头细胞中毛发生长因子VEGF的表达。由此可确认，本发明的人 参提取物具有优异的促进生发的效果。
[0095]【测试实施例2】对毛乳头细胞的增殖的评估
[0096] 组成毛发的蛋白质，角蛋白，是由毛发根部的角质形成细胞所生成，且角质形成细 胞是从毛乳头细胞分化而来的。因此，如若本发明的人参提取物可以促进毛乳头细胞的活 性，则所述人参提取物也能促进从毛乳头细胞中分化而来的角质形成细胞的活性并可以促 进生发。
[0097] 因此，如下评估所述人参提取物对所述毛乳头细胞的活性的促进效果。
[0098] 该实验中使用人毛乳头细胞株。在保持有5%⑶2和37°C的孵化器内，在含有10% 胎牛血清(FBS)的DMEM培养基(Gibco BRL,Gaithersburg ,MD ,USA)中培养所述细胞株24小 时，然后用IOppm或20ppm的实施例1的人参提取物或者用20ppm的对比实施例1的人参提取 物进行处理。DMSO用作阴性对照组。待用所述测试物质处理经过24小时后，通过使用WST-I 试剂盒(Roche)测量细胞增殖率（％ )。其结果在图5中展示。
[0099]如图5中所示，本发明的实施例1的人参提取物在IOppm和20ppm下显著地提高了所 述细胞的增殖。尤其，当所述细胞被IOppm的实施例1的人参提取物处理时与所述细胞被 20ppm的实施例1的人参提取物处理时相比，前者能使所述毛乳头细胞的增殖率提高了约 1.5倍。本发明的人参提取物要比现有的普通人参提取物更能促进毛乳头细胞的增殖的这 一事实，意味着本发明的人参提取物可以更为有效地促进角质形成细胞的活性并毛发的生 成。
[0100] 【测试实施例3】通过使用人毛囊对毛发生长促进效果的评估
[0101] 通过使用人毛囊，对本发明的人参提取物的毛发生长促进效果进行评估。
[0102] 首先，根据与测试实施例2相同的方法，分别用Ο.ΙμΜ或ΙμΜ的作为所述人参提取物 的主要成分的人参皂苷仙1、仙2、此、1?(1、1^和1^1处理毛乳头细胞。待24小时后，通过使用 WST-I试剂盒(Roche)测量细胞增殖率（％ )。其结果在图6中展示。
[0103] 然后，从55岁成年男性的枕区的头皮组织中一个接一个分离出毛囊，并在 Wi 11 iam ' s培养基(2mM的L-谷氨酰胺、10yg/mL胰岛素、40ng/mL氢化可的松、1 %抗生素、1 % 抗真菌剂）中进行培养。待3天后，将已成长的毛囊组织切成3mm的大小，然后分别用无处理 (对照组）、2ppm或5ppm的实施例1的人参提取物、或者5ppm的对比实施例1的人参提取物进 行处理。待所述处理经过8天之后，测量并拍摄所述毛囊组织。此外，根据与如上所述的方法 相同的方法，分别用5ppm的人参皂苷Rb I、Rb2、Re、Rd、Re和Rgl，对比实施例1的人参提取物 以及实施例1的人参提取物处理毛囊组织。其结果在图7和8中展示。
[0104] 如图6中所示，人参皂苷Rbl、Rc和Rgl在所述人参皂苷中展示出清晰的且统计学上 显著的毛发生长促进效果。
[0105] 此外，如图7中展示，与对比实施例1的人参提取物或所述对照组相比，经由5ppm的 实施例1的人参提取物处理的毛囊组织展示出优异的毛发生长促进效果，即：毛发长度增 加。尤其，对比实施例1比对照组展示出更少的平均生长长度。如图8中所示，尽管人参皂苷 仙1、仙2、1^、1?(1、1^和1^1也比对比实施例1具有更长的平均生长长度，但实施例1展示了最 长的平均生长长度。
[0106] 因此，从图6、图7和图8的结果可见，本发明的人参提取物提供优异的促进毛囊中 的毛发生长的效果，因为本发明的人参提取物与所述现有的人参提取物相比包含浓度得到 提高的具有毛发生长促进效果的人参皂苷Rbl、Rc和Rgl。
[0107]【测试实施例4】对脱发患者的临床试验
[0108]将患有脱发的年龄在20~60岁之间的成年女性分成测试组（实施例1)和对照组， 每组各有23名患者。要求每组在脱毛区涂抹含有2%实施例1的人参提取物的头皮精华或未 含该提取物的对照头皮精华，且每天晚上涂抹一次。在16周内，根据测试受试者的主观判 断、基于照片的研究人员的客观判断、以及通过使用作为无创毛发评价方法的毛发摄像图 (phototrichograms)来对作为生物变量的毛发密度、毛发粗大程度、毛发生长速率和毛发 脱落数量，评估防止脱发及促进毛发生长的效果。所述测试被设计成随机的、双盲性的、对 照性的临床研究。其结果在表4-8中展示。
[0109] 在表4中比较了实施例1和对照组之间的毛发密度。对实施例1而言，经过8周和16 周后，毛发密度分别显著地提高了5.485%和7.409%。经过8周和16周后，体验到有所改善 的受试者的比例分别为86.364%和86.364%。反之，对对照组而言，经过8周和16周后，毛发 密度分别提高了 1.615%和1.334%。
[0110] 在表4中比较了实施例1和对照组之间的毛发生长速率。对实施例1而言，经过8周 和16周后，毛发生长速率分别显著地提高了3.218%和8.783%。经过8周和16周后，体验到 有所改善的受试者的比例分别为68.182 %和81.818 %。反之，对对照组而言，经过8周后毛 发生长速率提高了2.480%，而经过16周后毛发生长速率下降了 1.142%。
[0111] 【表4】
[0112]
[011