8137);胎牛血清（浙 江天杭生物科技有限公司Lot .No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司 Cat. No. 11810-033 Lot. No. 1088387) ; TrypsinUMRESCO公司批号：2010/04);抓TA (AMRESC0公司批号：2009/10);化nicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号：2010242); Streptomycin Sulfate(AMRESC0公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司批 号：080310182) ;MTT(Biosha巧批号：0793) ;PBS(实验室自配）；
[0022] 1.4实验器材:莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检测 仪(美国MD公司型号:S阳CTRA MAX 190) ;C02培养箱(FORMA型号:3111);超净台（苏净集团 安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号：S/N 020579);精密移液器 (法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压 灭菌锅（日本SANYO公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型 号:DHG9123A);冰箱（西口子公司型号:KGl8V2ITI);液氮罐(CBS型号：2001);低速离屯、机 (上海安亭科学仪器厂型号:KA-1000);0.2皿滤器(MILLIP0RE型号：SLGP033RB); IOcm培养 皿(肥ST公司）、96孔培养板(肥ST公司）；细胞计数板;离屯、管、移液管、Tips若干。
[0023] 2实验方法：1)大鼠垂体瘤細3细胞用DMEM+10 %FBS于37 °C、5 % C02进行常规培养 (IOcm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25 %膜蛋白酶-0.04 %抓TA，37 °C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打 细胞后将其转入离屯、管中，100化pm离屯、5min，调整细胞悬液浓度3 X 104个/ml。2)将细胞种 入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液18化1，培养板放入细胞培养箱中（37 °C，5 % C02)常规 培养。3)根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入小儿感冒颗粒溶液，继续培养2地。4) 24h后加入MTT溶液巧mg/ml，即0.5%MTT)，继续培养地。5)地后扣板法倒去上清，用吸 水纸轻轻拍干，每孔加入20化1二甲基亚讽，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。 在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液）， 对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚讽），每组设定6个复孔。7) 结果W药物对细胞的抑制率表示:细胞增值抑制率（％ )=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照 孔OD值X 100%。实验重复3次。
[0024] 3实验结果:MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对 大鼠垂体瘤GH3细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在lOmg/ml时该差异具有显著性(P< 0.0 l)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.0 Ol)。
[00巧]表1小儿感冒颗粒对大鼠垂体瘤細始田胞增殖抑制影响研究提±3仍
[0027] 注：与对照组比较，冲<0.0 l ;*冲<0.0 Ol
[00%] 4实验结论:小儿感冒颗粒可W抑制大鼠垂体瘤GH3细胞增殖，减少大鼠垂体瘤GH3 细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种小儿感冒颗粒的制备方法，由广藿香75g、连翘75g、板蓝根75g、菊花75g、大青叶 125g、地黄75g、地骨皮75g、白薇75g、薄荷50g、石膏125g作为原料药制成，其特征在于所述 的方法由下列步骤组成:取上述中药材，加水煎煮提取，收集提取液，滤过，将滤液减压浓缩 至相对密度为1.02~1.18的浓缩液，上HPD400大孔吸附树脂柱，用水溶液洗脱，收集洗脱 液，浓缩成浸膏或浓缩液，喷雾干燥，加辅料制成颗粒剂，每袋重12g。2. 根据权利要求1所述小儿感冒颗粒的制备方法，其特征在于制备方法中煎煮条件为： 第一次加水为药材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第二次加水为药材重量的6-10倍量，煎煮1-2h〇3. 根据权利要求1所述小儿感冒颗粒的制备方法，其特征在于制备方法中喷雾干燥条 件为：进风温度为100_120°C，出风温度为80-90°C，物料温度为70-90°C，雾化压力为0.2- 0.4兆帕，喷雾速度为5-10ml/s。4. 根据权利要求1所述小儿感冒颗粒在制备抑制大鼠垂体瘤GH3细胞增殖药物中的应 用，其特征在于小儿感冒颗粒由广藿香75g、连翘75g、板蓝根75g、菊花75g、大青叶125g、地 黄75g、地骨皮75g、白薇75g、薄荷50g、石膏125g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组 成:取上述中药材，加水煎煮提取，收集提取液，滤过，将滤液减压浓缩至相对密度为1.02~ 1.18的浓缩液，上HPD400大孔吸附树脂柱，用水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩成浸膏或浓缩 液，喷雾干燥，加辅料制成颗粒剂，每袋重12g。5. 根据权利要求4所述小儿感冒颗粒在制备抑制大鼠垂体瘤GH3细胞增殖药物中的应 用，其特征在于制备方法中煎煮条件为:第一次加水为药材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第 二次加水为药材重量的6-10倍量，煎煮1-2h。6. 根据权利要求4所述小儿感冒颗粒在制备抑制大鼠垂体瘤GH3细胞增殖药物中的应 用，其特征在于制备方法中喷雾干燥条件为:进风温度为100-120°C，出风温度为80-90°C， 物料温度为70_90°C，雾化压力为0 · 2-0 · 4兆帕，喷雾速度为5-lOml/s。
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体提供一种小儿感冒颗粒的制备方法，由广藿香75g、连翘75g、板蓝根75g、菊花75g、大青叶125g、地黄75g、地骨皮75g、白薇75g、薄荷50g、石膏125g作为原料药制成，按比例取所述中药材，加水煎煮提取，收集提取液，滤过，将滤液减压浓缩至相对密度为1.02～1.18的浓缩液，上HPD400大孔吸附树脂柱，用水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩成浸膏或浓缩液，喷雾干燥，加辅料制成颗粒剂，每袋重12g，使得载药量有很大提高，本发明还提供了小儿感冒颗粒在制备抑制大鼠垂体瘤GH3细胞增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K9/16, A61K33/06, A61K36/815, A61K36/855, A61P11/00
【公开号】CN105663056
【申请号】CN201610115601
【发明人】赵明亮
【申请人】南京正亮医药科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月1日