连翘苷元在制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及连翘苷元的一种新的医药用途，特别涉及连翘苷元在制备治疗乙型病 毒性肝炎药物中的用途，属于医药领域。
【背景技术】
[0002] 乙型病毒性肝炎是由乙型病毒性肝炎病毒（HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并 可引起多器官损害的一种病。本病广泛流行于世界各国，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者 可转化为肝硬化或肝癌。因此，它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流 行最为广泛、危害性最严重的一种病。乙型病毒性肝炎无一定的流行期，一年四季均可发 病，但多属散发。近年来乙型病毒性肝炎发病率呈明显增高趋势。
[0003] 慢性乙型病毒性肝炎治疗的目的是在肝脏发生明显损伤之前抑制HBV的复制。治 疗的初期目标是抑制病毒复制，阻止肝脏损伤；治疗的远期目标是清除病毒，阻止疾病向肝 硬化以及肝癌的发展，延长生存期。抗病毒治疗还用于防止肝移植后、化疗或免疫抑制治疗 时乙型病毒性肝炎病毒的再复制。因为目前所有的抗病毒药物不能有效的清除HBV DNA，所 以实现长期清除HBV的目标几乎不可能实现。慢性乙型病毒性肝炎的治疗有两种方式：免 疫调节和抑制病毒。肝移植可用于对药物治疗无效的终末期肝病患者。
[0004] 目前市场上治疗乙型病毒性肝炎的方法主要有注射干扰素类药物、服用阿德福韦 酯，恩替卡韦等核苷类似物类药物以及注射乙型病毒性肝炎疫苗三种方式。但上述三种方 式均存在比较大的缺点，长期服用干扰素会造成患者出现流感感样症状、并可能使患者出 现消化道症状、脱发等不良反应。严重者还能抑制骨髓导致白细胞、血小板减少，这样就会 导致患者的凝血功能下降。而服用阿德福韦酯，恩替卡韦等核苷类似物类则会导致乳酸性 酸中毒和重度的脂肪性肝肿大，且很多患者服用半年左右就会耐药，而且还不能随时停药， 否则可能会导致病情迅速恶化，甚至转化为肝硬化、肝癌。虽然乙型病毒性肝炎疫苗能够抑 制HBV的复制，其安全性和耐受性都很好，但是还不足以打破乙型病毒性肝炎的免疫耐受 状态进而清除HBV，仍需辅以抗乙型病毒性肝炎药物的治疗。
[0005] 连翘为我国传统中草药，其味苦，性凉主治胆汁扩散引起的目、身发黄，协日热宿 于五脏，肠刺痛，血协日性腹泻等症，现代植物化学研究显示，其果实中含木脂体类化合物： 连翘苷（forsythin，phillyriy)，连翘苷元（Phillygenin)，右旋松脂酸（pipores-inol); 黄酮类化合物：芸香苷（rutin);苯乙烷类衍生物：连翘酯苷（forsythoside)A、C、D、E，毛 柳苷（salidroside);乙基环己醇类衍生物：株木苷（cornoside)，连翘环己醇（rengyol)， 异连翘环己醇（sorengyol)，连翘环已醇氧化物（renyoxide)，连翘环己醇酮（rengydone)， 连翘环己醇苷（rengyoside)A、B、C ;三砲类化合物：白桦脂酸（betulinic acid)，齐墩果 酸（oleanolicacid)，熊果酸（ursolic acid)。药理学研究显示，其具有多种药理活性，其 水煎剂具有显著的抗肝损伤，抗炎解热作用，镇吐以及抗病原微生物作用，连翘苷及连翘苷 元静脉注射后还具有明显的降压作用。
[0006] 发表于2014年6月的《连翘酯苷A抗LPS介导大鼠类风湿性关节炎机制研究》一 文中公开了连翘酯苷A可降低LPS刺激类风湿性关节炎组大鼠关节炎指数、抑制炎症因子 IL-I β和IL-17蛋白翻译，影响抗氧化酶及自由基含量，最终发挥抗炎功效。
【发明内容】
[0007] 为了克服现有乙型病毒性肝炎治疗药物毒副作用大，治疗过程中易出现耐受性等 不足，本发明提供一种治疗乙型病毒性肝炎的有效治疗药物。该治疗药物以连翘苷元为活 性成分，其用于乙型病毒性肝炎患者治疗时，疗效确切，毒副作用小，且连翘苷元的安全性 和耐受性均较好，具有十分广泛的医疗应用前景。
[0008] 为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
[0009] 本发明请求连翘苷元的一种新的医药用途，即连翘苷元用于制备治疗乙型病毒性 肝炎的药物中的应用。连翘苷元Phillygenin，其分子式为：C 21H24O6，结构式为：
[0010]
[0011] 本发明实施例9研究了连翘苷元体外抗!fepG2. 2. 15细胞的作用，研究发现，连翘 苷元对于IfepG2. 2. 15细胞具有明显的细胞抑制作用，并且连翘苷元对H印G2. 2. 15细胞分 泌HBsAg和HBeAg有显著的抑制作用，连翘苷元浓度在50 μ g/ml时对HBsAg和HBeAg的抑 制率分别为70. 9%和38. 5%，提示连翘苷元在体外对于HBV具有较强的抑制作用。本发明 实施例10研究了连翘苷元对鸭体内乙型病毒性肝炎病毒感染的治疗效果，研究证实连翘 苷元对感染鸭血清DHBV-DNA水平的具有显著的抑制效果，并有抑制停药反跳的特点，停止 给药后对乙型病毒性肝炎病毒仍有抑制作用。其中以连翘苷元高剂量组（5mg/kg)抑制效 果最佳。本发明实施例11研究了连翘苷元对刀豆蛋白A(ConA)致小鼠肝损伤作用，结果显 示：连翘苷元各剂量组能够修复ConA所导致的肝损伤，其能够显著降低小鼠血清ALT、AST， 与连翘提取物组或连翘苷组相比，具有极显著性或显著性的差异，表明连翘苷元治疗肝损 伤的效果优于连翘提取物或连翘苷。病理检测结果支持了上述实验结果。
[0012] 本发明还提供适用于上述用途的包含连翘苷元的药物制剂，所述包含连翘苷元的 药物制剂为其口服制剂或注射制剂，其中所述的口服制剂为其片剂、胶囊剂、或微乳制剂， 所述的注射制剂为其注射液，其由连翘苷元和药用辅料组成，所述的药用辅料可以为乙醇、 丙二醇、PEG400、PEG600、吐温80中的一种或多种。
[0013] 本发明的药效试验结果说明连翘苷元注射剂对HBsAg和HBeAg均有明显的抑制作 用，对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果也尤为显著，并有抑制停药反跳的特点，因此， 本发明的连翘苷元的注射剂治疗乙型病毒性肝炎病毒感染鸭有效，停药后对乙型病毒性肝 炎病毒仍有抑制作用。
[0014] 总之，本发明提供的连翘苷元注射剂同现有技术相比，具有如下突出的优势：
[0015] 1.连翘苷元有较强的抗病毒活性，并且不会产生耐药性；本发明的体外药效试验 结果说明连翘苷元不仅能够直接抑制乙型肝炎病毒的增殖，而且对于乙型肝炎病毒分泌的 HBsAg和HBeAg均有明显的抑制作用，
[0016] 2.连翘苷元对于体内抗乙肝病毒疗效确切，停药后不反跳；本发明药效实施例证 实，连翘苷元对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果也尤为显著，并有抑制停药反跳的特 点。
[0017] 3.连翘苷元能够修复乙型肝炎病毒感染导致的肝损伤，连翘苷元各剂量组能够修 复乙型肝炎病毒所导致的肝损伤，其能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组或连 翘苷组相比，具有极显著性或显著性的差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘提 取物或连翘苷。
[0018] 4.连翘苷元为从传统中药中提取得到的中药单体，其不良反应和毒副作用显著小 于现有的化学治疗药物，并且连翘苷元在乙型肝炎时疗效确切，其治疗效果上显著优于连 翘苷。
【具体实施方式】
[0019] 以下通过具体实施例进一步说明本发明的
【发明内容】
，但应该理解，本发明实施例 并不以任何方式限制本发明。凡在本发明基础上作出的等同替代均落入本发明请求专利保 护的范围。
[0020] 实施例1连翘苷元注射液
[0021] 连M苷元 IOg 丙二醇 3000ml 乙醇 500ml 0.9%氯化钠洛液 加至10000ml- 制备成 1000支
[0022] 制备工艺：将处方量的丙二醇和乙醇混合均匀，加入连翘苷元，搅拌溶解，加入处 方量的0. 9%氯化钠溶液，搅拌均匀，加入0. 5%针用活性炭搅拌脱炭后分装即得。
[0023] 实施例2连翘苷元注射液
[0024] 连翅苷元 Sg PEG-400 2000nl 乙醇 500ml 0.9%氯化钠溶液 加至10000ml 制备成 1000支
[0025] 制备工艺：将处方量的PEG-400与乙醇混合，加入连翘苷元，搅拌溶解后加入 0. 9%氯化钠溶液至10000ml，搅拌均匀，加入0. 5%针用活性炭搅拌脱炭后分装即得。
[0026] 实施例3连翘苷元注射液
[0027] 连翘苷元 5g 乙时： 2000ml 吐温-80 1500g 注射用水 加至10000ml: 制备成 1000支
[0028] 制备工艺：将处方量的乙醇和吐温-80混合均匀，加入连翘苷元，搅拌溶解，加入 注射用水至10000ml，搅拌均匀，加入0. 5%针用活性炭搅拌脱炭后分装即得。
[0029] 实施例4连翘苷元注射液
[0030] 连翘苷元 20g
[0031] 乙辟 3300ml 注射用水 加至10000ml 制备成 1000支
[0032] 制备工艺：取处方量的乙醇加入连翘苷元，搅拌溶解，加入注射用水至10ml，搅拌 均匀，加入0.5%针用活性炭搅拌脱炭后分装即得。
[0033] 实施例5连翘苷元片剂
[0034] 连翘苷元 2.5g 糖分 40g 乳糖 20g 羧甲基纤维素钠 ：2:g 硬脂酸镁 Ig
[0035] 制备工艺：将主药及各辅料成分烘干、粉碎过筛预处理，将主药与糖分、乳糖、羧甲 基纤维素钠混匀，以纯水作为粘合剂将混匀的物料制备软材，过20目筛制粒并于60度下干 燥制备干颗粒，将硬脂酸镁加入到上述干颗粒总混，压片即得。
[0036] 实施例6连翘苷元胶囊剂
[0037] 连翅苷元 35g 微晶纤维素 5〇g 羧甲基纤维素钙 l:5g 乳糖 40g 6%PVP的95%的乙醇溶液适量 微粉硅胶 5,g
[0038] 制备工艺：按胶囊剂常规制备工艺制备而成。
[0039] 实施例7连翘苷元微乳制剂
[0040] 连翘苷元 O.lg 薄荷油 40g 辛酸油酸乙酯 55g 1, 2-丙二醇 45g 聚乙二醇3350 40g
[0041] 制备工艺：称取处方量薄荷油、辛酸油酸乙酯、1，2-丙二醇、聚乙二醇3350,混合 后搅拌均匀，然后加入连翘苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为 连翘苷元微乳浓缩物。
[0042] 实施例8连翘苷元微乳制剂
[0043] 连翘苷元： 0425? 薄荷油 35g 聚氧乙烯'-23-月桂基醚 60g 1，:2-丙二醇 Dg
[0044] 制备工艺：称取处方量薄荷油、聚氧乙烯-23-月桂基醚、1，2-丙二醇，混合后搅拌 均匀，然后加入连翘苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为连翘苷 元微乳浓缩物。
[0045] 实施例9连翘苷元体外抗HBV药效测定
[0046] I、!fepG2· 2. 15 细胞培养
[0047] 本实验利用目前公认的研究HBV复制的细胞模型H印G2. 2. 15细胞为研究对象，实 验中采用的IfepG2. 2. 15细胞购买于中国典型微生物保藏中心。
[0048] 细胞培养液为MEN培养液，每100mL含胎牛血清10ml，质量百分比浓度为3%的谷 氨酰胺溶液lml，G418380 μ g/ml，庆大霉素50U/ml ;细胞消化液为含质量