一种稳定的抗vegf抗体制剂及其用图
【专利摘要】本发明涉及一种稳定的抗VEGF抗体制剂及其用途，具体地，所述制剂包括(i)治疗有效量的抗VEGF单克隆抗体；(ii)含100?200mM磷酸盐缓冲体系；(iii)抗体保护剂；以及(iv)表面活性剂，其中，所述制剂的pH为5.4?5.65。本发明的制剂的稳定性能够得到显著地提高，且制剂中聚合物的含量显著降低，使得制剂的存放时间得到有效延长。此外，本发明还公开了一种稳定抗体的方法以及该制剂的用途。
【专利说明】
-种稳定的抗VEGF抗体制剂及其用途
技术领域
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体地设及一种稳定的抗VEGF抗体制剂及其用途。
【背景技术】
[0002] 治疗用抗VEGF单克隆抗体药物，能够特异性结合VEGF-A并抑制VEGF-A与VEGF-R1 和VEGF-R2的结合，阻断PI3K-Akt/P邸和Ras-Raf-MEK-E服等信号通路的传导，抑制血管内 皮细胞的生长、增殖和迁移W及血管新生，降低血管渗透性，阻断肿瘤组织的血液供应，抑 制肿瘤细胞的增殖和转移，诱导肿瘤细胞调亡，产生抗肿瘤作用。
[0003] 目前已知的多数抗VEGF抗体制剂的稳定性不高，储存中易发生物理变化(例如聚 集和片段化）、化学变化(例如脱酷胺、氧化），导致聚合物和电荷异构体的增多，使得产品的 质量一致性和安全性受到潜在影响。因此有必要开发一种新型抗VEG巧亢体制剂W提高抗体 的稳定性，从而提高产品质量的均一性和临床使用安全性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种稳定的抗VEGF抗体制剂及其用途。
[0005] 本发明第一方面提供了一种抗体液体制剂，所述制剂包括：
[0006] (i)治疗有效量的抗VEGF单克隆抗体；
[0007] (ii)含100-200mM憐酸盐缓冲体系；
[000引（iii)抗体保护剂；W及
[0009] (iv)表面活性剂，
[0010] 其中，所述制剂的抑为5.4-5.65。
[00川在另一优选例中，所述抗VEGF单克隆抗体的重链区氨基酸序列如SEQ ID NO.: 1所 /J、- 0
[001^ 在另一优选例中，所述抗VEGF单克隆抗体的轻链区氨基酸序列如SEQ ID NO.: 2所 /J、- 0
[0013] 在另一优选例中，所述抗VEGF单克隆抗体为贝伐单抗(Bevacizumab)的抗体。
[0014] 在另一优选例中，所述抗VEGF抗体的浓度为20-30mg/ml，较佳地，22-28mg/ml。
[001引在另一优选例中，所述憐酸盐缓冲液的浓度为100-200mM，较佳地，130-195mM。
[0016] 在另一优选例中，所述憐酸盐缓冲液包括憐酸氨二钢和一水憐酸二氨钢。
[0017] 在另一优选例中，所述抗体保护剂和所述表面活性剂的浓度比为50-300,较佳地， 60-270。
[001引在另一优选例中，所述抗VEGF单克隆抗体与所述抗体保护剂的浓度比为1:1-1:3， 较佳地，1:1.5-1:2.8，更佳地，1:2-1:2.6。
[0019] 在另一优选例中，所述抗VEGF抗体为单克隆抗体。
[0020] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为全长抗体。
[0021 ]在另一优选例中，所述单克隆抗体为IgGl抗体。
[0022] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为人源化抗体。
[0023] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。
[0024] 在另一优选例中，所述抗体片段为化b或F(ab/ )2片段。
[0025] 在另一优选例中，所述单克隆抗体结合VEGF。
[0026] 在另一优选例中，所述制剂的pH为5.4-5.6，较佳地，5.45-5.55。
[0027] 在另一优选例中，所述抗体保护剂选自下组:海藻糖、薦糖、或其组合。
[00%]在另一优选例中，所述抗体保护剂的浓度为40-80mg/ml，较佳地，50-80mg/ml，更 佳地，60-80mg/ml。
[0029] 在另一优选例中，所述表面活性剂的浓度为0.1-1.5111旨/1111，较佳地，0.2-1111旨/1111， 更佳地，0.4-lmg/ml。
[0030] 在另一优选例中，所述制剂渗透压为235-315m0smol/kg。
[0031 ]在另一优选例中，所述表面活性剂包括非离子表面活性剂。
[0032] 在另一优选例中，所述非离子表面活性剂包括吐溫20(TWEEN-20)、吐溫80(TWEEN- 80)、或其组合。
[0033] 在另一优选例中，所述非离子型表面活性剂包括吐溫20(TWEEN-20)。
[0034] 在另一优选例中，所述制剂具有选自下组的一种或多种特征：
[0035] (a)所述制剂的多聚体含量< 1 %，较佳地，<0.8 %，更佳地，<0.5 % ;
[0036] (b)所述制剂在2-8°C下保存至少2年，且纯度下降的百分比低于2%;
[0037] (C)所述制剂在25°C下保存一个月，纯度下降的百分比低于0.03%，多聚体含量低 于0.5% ;
[003引（d)所述制剂在2-8°C下保存一个月，纯度下降的百分比低于0.01%，多聚体含量 低于0.5%。
[0039] 在另一优选例中，所述制剂包括：
[0040] (a)20-30mg/ml 抗 VEGF 单克隆抗体；
[0041 ] (b)14-30mg/ml-水憐酸二氨钢；
[0042] (c)1.4-5mg/ml 憐酸氨二钢；
[0043] (d)4〇-8〇mg/ml 海藻糖；
[0044] (e)0.1-1.5mg/ml 吐溫 20，
[0045] 并且所述制剂的抑为5.4-5.65。
[0046] 在另一优选例中，所述制剂包括：
[0047] (a)22-28mg/ml 抗 VEGF 单克隆抗体；
[004引（b)16-28mg/ml-水憐酸二氨钢；
[0049] (c)1.5-3mg/ml 憐酸氨二钢；
[(K)加](d)50-80mg/ml 海藻糖；
[0051] (e)0.2-lmg/ml吐溫 20，
[0化2] 并且所述制剂的抑为5.4-5.6。
[0053]在另一优选例中，所述制剂包括：
[0054] (a)22-28mg/ml 抗 VEGF 单克隆抗体；
[0055] (b)18-25mg/ml-水憐酸二氨钢；
[0056] (cH.e-ang/ml 憐酸氨二钢；
[0化7] (d)50-70mg/ml 海藻糖；
[0化引（e)0.2-lmg/ml吐溫 20，
[0059] 并且所述制剂的抑为5.45-5.55。
[0060]在另一优选例中，所述制剂由W下组分构成：
[0061 ] (a)20-30mg/ml 抗 VEGF 单克隆抗体；
[0062] (b)14-30mg/ml-水憐酸二氨钢；
[0063] (c)1.4-5mg/ml 憐酸氨二钢；
[0064] (d)50-80mg/ml 海藻糖；
[00化](e)0.1-1.5mg/ml 吐溫 20，
[0066] 并且所述制剂的抑为5.4-5.65。
[0067] 在另一优选例中，所述制剂由W下组分构成：
[0068] (a)22-28mg/ml 抗 VEGF 单克隆抗体；
[0069] (b)16-28mg/ml-水憐酸二氨钢；
[0070] (c)1.5-3mg/ml 憐酸氨二钢；
[0071] (d)5〇-7〇mg/ml 海藻糖；
[0072] (e)0.2-lmg/ml 吐溫 20，
[0073] 并且所述制剂的抑为5.4-5.6。
[0074] 在另一优选例中，所述制剂由W下组分构成：
[00 巧](a)22-28mg/ml 抗 VEGF 单克隆抗体；
[0076] (b)18-25mg/ml-水憐酸二氨钢；
[0077] (c)1.6-2mg/ml 憐酸氨二钢；
[007 引（d)60-70mg/ml 海藻糖；
[0079] (e)0.2-lmg/ml 吐溫 20，
[0080] 并且所述制剂的抑为5.45-5.55。
[0081] 本发明第二方面提供了本发明第一方面所述制剂的用途，用于制备治疗VEGF相关 性疾病的药物。
[0082] 在另一优选例中，所述的VEGF相关性疾病指由于VEGF过表达造成的病理性状态， 优选地，包括结直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、肾细胞癌、多形性胶质母细胞瘤和卵巢癌。
[0083] 本发明第Ξ方面提供了一种药盒，所述的药盒含有一容器W及位于所述容器内的 本发明第一方面所述的制剂。
[0084] 在另一优选例中，所述的容器的容积为3、5、10、20ml。
[0085] 本发明第Ξ方面提供了一种制备稳定的抗VEGF抗体制剂的方法，包括步骤：
[0086] (a)将治疗有效量的抗VEGF抗体、含100-200mM憐酸盐缓冲体系、抗体保护剂W及 表面活性剂进行混合；
[0087] (b)将混合后的混合物抑值调整至抑为5.4-5.65;
[008引从而获得一种稳定的抗VEGF抗体制剂。
[0089]在另一优选例中，所述稳定的抗VEGF抗体制剂具有有选自下组的一种或多种特 征：
[0090] (a)所述制剂的多聚体含量< 1 %，较佳地，<ο. 8 %，更佳地，<ο. 5 % ;
[0091] (b)所述制剂在2-8°C下保存至少2年，且纯度下降的百分比低于2%;
[0092] (C)所述制剂在25°C下保存一个月，纯度下降的百分比低于0.03%，多聚体含量低 于0.5% ;
[0093] (d)所述制剂在2-8°C下保存一个月，纯度下降的百分比低于0.01%，多聚体含量 低于0.5%。
[0094] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可W互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【具体实施方式】
[00M]本发明人经过广泛深入的研究发现，抗VEG巧亢体与特定浓度的含一水憐酸二氨钢 和憐酸二氨钢的缓冲体系、抗体保护剂(如海藻糖）、W及表面活性剂(如吐溫20)组成的液 体制剂在抑为5.4-5.65的条件下，制剂的稳定性能够得到显著提高，且制剂中聚合物的含 量显著降低，使得制剂的存放时间得到有效延长。发明人在此基础上完成了本发明。
[0096] 如本文所用，所述"液体制剂"是指如下形式的制备物，使得容许活性组分的生物 学活性有效，且不含别的对会施用该制剂的受试者有不可接受的毒性的成分。受试者包括 哺乳动物，优选为人。
[0097] 如本文所用，所述"抗体稳定性"是指一种抗体在胆藏后基本上保留其物理稳定性 和/或化学稳定性和/或生物学活性。胆藏期一般基于制剂的预定货架期来选择。多种用于 测量抗体稳定性的分析技术是本领域所公知的。
[0098] 可W在选定溫度下用选定时间测定稳定性。优选的是，所述制剂在25°C下能稳定 至少1个月和/或在大约2-8°C下稳定至少2年，且抗VEGF抗体纯度的下降小于2%，多聚体含 量低于1%;
[0099] 如果在通过对颜色和/或透明度进行肉眼检查，或通过UV光散射或通过大小排阻 层析测定时基本没有表现出明显的聚集，沉淀和/或变性的迹象，则制剂中的抗体保持它的 物理稳定性。
[0100] 如果在特定时间化学稳定性使得抗体被认为仍然保留了下面所定义的生物学活 性，则在制剂中，所述抗体保持它的化学稳定性。可W通过检测和定量所述抗体的化学改变 形式评估化学稳定性。化学改变可能设及大小改变(例如，剪切），例如，可W通过采用大小 排阻层析，SDS-PAGE和/或矩阵辅助的激光解析离子化/飞行时间质谱分析(MLDI/TOF MS) 进行评估。其他类型的化学改变包括电荷改变(例如，因为脱酷胺导致的改变），例如，可W 通过离子交换层析对它进行评估。
[0101] 如果一种制剂中的抗体具有它预期用途的生物学活性，则所述抗体在制剂中保持 它的生物学活性。例如，如果所述制剂中的抗体的生物学活性为在制备所述制剂时所表现 出的生物学活性的大约70%-130%(在测定的误差范围内）内，就认为保持了它的生物学活 性(例如，通过抗原结合测定确定）。
[0102] 如本文所用，所述"治疗有效量"或"有效量"表示在药理学含义上，在本发明的范 围内，在预防或治疗疾病方面的有效量。对于所述疾病的治疗来说，所述抗体是有效的。"治 疗"表示治疗性治疗和预防性或防御性措施。需要治疗的受试者包括业已患有有关病症的 受试者，W及需要预防有关疾病的受试者。
[0103] 如本文所用，所述"VEGF"是指人血管内皮生长因子，基因由8个外显子和7个内含 子组成，定位于染色体6P21.3,由于外显子剪切的不同而形成不同的亚型，其中VEGF121、 VEGF165和VEGF189在人类表达。如Mattei MG，et.al.Genomics 32(1) :168-169所述。肿瘤 组织生长，必须依靠新生血管生成来提供足够的氧气和营养物质来维持，运被认为是VEGF 临床应用的基础。
[0104] 如本文所用，所述"抗VEGF抗体"是指W足够亲和力和特异性结合VEGF的抗体。在 某些实施方案中，所选择的抗体通常会具有足够的对VEGF的结合亲和力。抗体亲和力可通 过例如基于表面等离振子共振的测定法;酶联免疫吸附测定法化LISA)和竞争测定法(例如 RIA)来测定。
[0105] 抗体液体制剂
[0106] 本发明的抗体液体制剂，主要包括：
[0107] (i)治疗有效量的抗VEGF单克隆抗体；
[010引（ii)含100-200mM憐酸盐缓冲体系；
[0109] (iii)抗体保护剂；W及
[0110] (iv)表面活性剂。
[0111] 其中，可用于本发明制剂中的抗VEGF抗体包括单克隆抗体，重组抗体，单链抗体， 杂合抗体，嵌合抗体，人源化抗体，或它们的片段。还可W使用包括一个或两个用于结合抗 原的结合位点和免疫球蛋白的化-部分的抗体分子。本发明优选为单克隆抗体，本发明所述 的抗VEGF单克隆抗体可来源 W下文献:Presta.化 al. Cancer Res. 1997.57:4593-4599，CN 1191276C，CN 100480629C，通过本领域所公知的方法进行制备，也可W选用其它基因工程 技术获得的抗VEGF单克隆抗体。用于本发明制剂中的优选抗体是人源化抗体，主要指鼠源 单克隆抗体W基因克隆及DNA重组技术改造，重新表达的抗体，其大部分氨基酸序列为人源 序列取代，基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了其异源性，特别优选的 人源化抗体是针对抗原VEGF，包括人VEGF的抗体。
[0112] 存在于本发明制剂中的抗体的治疗有效量是通过考虑需要的剂量体积和施用模 式决定的。在本发明中，抗体的浓度为20-30mg/ml，优选22-28mg/ml。本发明包括使用上述 任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。
[0113] 用于本发明制剂中的缓冲体系为包含憐酸氨二钢和一水憐酸二氨钢的缓冲体系。 抗体保护剂没有特别限制，通常包括了海藻糖、薦糖。本发明的制剂优选是等渗透的。在本 发明的优选实施方案中，抗体保护剂为海藻糖，浓度为40-80mg/ml，优选为50-80mg/ml，更 优选60-80mg/ml。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。
[0114] 本发明制剂中的表面活性剂优选非离子表面活性剂，如吐溫20(TWEEN-20)、吐溫 80(TWEEN-80)。所添加的表面活性剂的量使其能减少制剂中的抗体的聚集和/或减少颗粒 在制剂中的形成和/或减少吸附。在本发明的优选的表面活性剂为吐溫20。在一优选的实施 方案中，吐溫20的浓度为0.1-1.5mg/ml，优选为0.2-lmg/ml，更优选0.4-lmg/ml。本发明包 括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。
[0115] 本发明通过缓冲体系来调节制剂的pH值，W控制pH在5.4-5.65的范围内，在某些 实施方案中，制剂的抑处于5.4至5.65、5.4至5.6、5.45-5.55之间，本发明包括使用上述任 意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在一些优选的实施方案中，制剂抑为5.5。
[0116] 应理解，本发明的缓冲体系除包括憐酸氨二钢和一水憐酸二氨钢W外，还可进一 步包括一种或多种其他缓冲组分，通过与其他缓冲组分的组合将制剂的pH值控制在上述范 围。适合的其他缓冲组分包括组氨酸盐、巧樣酸盐、憐酸盐、班巧酸盐(例如班巧酸钢)等。
[0117] 本发明优选的实施方案中，缓冲体系优选憐酸氨二钢和一水憐酸二氨钢，其中憐 酸氨二钢浓度为1.4-5mg/ml，优选为1.5-3mg/ml，； 一水憐酸二氨钢浓度为14-30mg/ml，优 选为16-28mg/ml，。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在 另一种实施方案中，所述制剂的抑是用巧樣酸、乙酸或憐酸等无机酸调节的。
[0118] 此外，发明人经过反复的试验，对各类缓冲体系的组分及含量进行了大量的筛选， 并最终从大量的缓冲体系中筛选得到了本发明的憐酸盐缓冲体系，并且发现在该体系中， 抗体蛋白的稳定性明显提高。当本发明制剂中憐酸氨二钢和一水憐酸二氨钢的浓度之比低 于0.06时，缓冲体系的缓冲能力将受到明显的限制，当憐酸盐缓冲液的浓度高于200mM时， 对制剂稳定性并无提高作用。
[0119] 本发明的制剂中可包括一种或多种其它药学可接受载体、赋形剂或稳定剂，诸如 那些在Remington's PharmaceuticalSciences 16th edition,0sol,A.Ed. (1980)中记载 的，只要它们对制剂的期望特征没有不利影响。可接受载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂 量和浓度对接受者是无毒的，而且包括别的共溶剂;抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸； 整合剂，诸如EDTA;金属复合物（例如Zn-蛋白质复合物）；生物可降解聚合物，诸如聚醋； 和/或成盐反荷离子。
[0120] 本发明的制剂可采用本领域公知的方法将各种组分按一定的浓度进行组合制备。
[0121] -类优选的方法主要包括W下步骤：
[0122] 用叫化acel-30K超滤离屯、管将抗VEGF单克隆抗体通过离屯、（4500rpm，4-10°C)浓 缩换液至不同制剂缓冲液中，用制剂缓冲液将蛋白浓度调整到所需浓度。采用〇.22μπι Millex针头滤器将制剂过滤除菌。对所制备的制剂进行包装W方便使用，选用的包材可W 是玻璃瓶。
[0123] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可W任意组合。本案说明书所掲示 的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所掲示的各个特征，可W被任何提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所掲示的特征仅为均等或相似特 征的一般性例子。
[0124] 本发明的主要优点包括：
[0125] 1.本发明的制剂能够显著降低多聚体含量（多聚体含量低于1%，较佳地，低于 0.5% )，且能够显著提高抗体的稳定性，降低潜在的安全性风险。
[01 %] 2.本发明的制剂在2-8°C或25 °C下放置至少1个月后的纯度依旧高达97.7-98 %， 其多聚体含量极低，低于0.5%，因此可显著延长产品的货架期。
[0127] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，运些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0128] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中 所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0129] SEC-HPLC 测试方法
[0130] 1)蛋白含量测定
[0131 ]方法:紫外-可见分光光度法
[0132] 检测波长:280nm
[0133] 计算方法:吸收系数法化=1.7)
[0134] 2)纯度检测
[01巧]方法:分子筛排阻色谱法(SEC-HPLC)
[0136] 色谱条件：
[0137] a.流动相配制：
[0138] 取憐酸二氨钟13.6032旨（0.1111〇1几），硫酸钢21.3021旨（0.15111〇1几），精氨酸 34.8467(0.2mol/L)g加纯化水1000ml用憐酸调PH值至7.0摇匀过滤即得。
[0139] b.检测波长:280nm，流速 0.8ml/min
[0140] C.检测:直接取样品进样30ul，记录色谱图
[0141] d.色谱柱：TSKgel TSKel G3000SWXL(5)7.8*300
[0142] 纯度测定法:面积归一化法。
[0143] 抗体制备
[0144] 用CD19真核重组蛋白抗原分别免疫雌性健康的BALB/c小鼠，挑选出血清化ISA， WB，FC检测呈阳性的小鼠，对其提取脾脏细胞，与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞;将杂交 瘤细胞在HAT培养基中培养，对高通量流式筛选呈阳性的单克隆细胞进行化ISA复筛，获得 阳性克隆30多株，再进行WB复筛，获得阳性克隆9株，对WB阳性细胞进行亚克隆，经过2次亚 克隆，排除亚克隆过程中返阴细胞株，最终筛选出能够稳定分泌抗VEGF的单克隆抗体的单 克隆细胞3株;运用亚型鉴定试剂盒，鉴定单克隆抗体的亚型。
[0145] 对上述获得的单克隆抗体的编码序列进行测序。经测定，一株抗VEGF单克隆抗体 的序列如下：
[0146] 重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.: 1所示：
[0152] 经活性测定和分子量测定，结果表明，该抗VEGF单克隆抗体的特性与贝伐单抗相 同，故用于W下实施例1-5和对比例1-4。
[0153] 实施例1
[0154] 制剂中各组分与含量如表1所示：
[0155] 表1
[0156]
[0157] 实施例2
[0158] 制剂中各组分与含量如表2所示：
[0159] 表2
[0160]
[0161] ~实施例3
' '
[0162] 制剂中各组分与含量如表3所示：
[0163] 表3
[0164]
[01化]对比例1
[0166] 制剂中各组分与含量如表3a所不：
[0167] 表3a
[016 引
[0169]
[0170] 对比例2
[0171] 制剂中各组分与含量如表3b所示：
[0172] 表3b
[0173]
[0183]结果显示，实施例1的制剂在长期2-8°C和加速25°C下存放一个月后，本发明制剂 中的抗体纯度没有损失或损失很少，多聚体含量极低，低于ο. 5%。
[0184] 并且，实施例2与3的制剂在长期2-8°C和加速25°C下存放一个月后，其抗体纯度没 有损失或损失很少，多聚体含量也极低，低于0.5%。
[0185] 结果表明，本发明的制剂具有优异的稳定性。
[0186] 实施例5本发明的制剂与对比例制剂的稳定性比较
[0187] 5.1对实施例1、实施例2、实施例3和对比例1、对比例2、对比例3、对比例4的制剂分 别进行SEC检测，判断制剂中多聚体含量的变化，测试结果如表4所示。
[0188] 表4多聚体含量的变化结果
[0189]
[0190] 结果显示，本发明实施例1-3的多聚体含量显著低于对比例1-4,且稳定性较好。对 比例1(抑5.3)中多聚体含量的下降可能是由于缓冲体系的缓冲能力过弱从而使存放过程 中的pH发生改变而造成的。结果表明，本发明的制剂中的多聚体含量更低且更加稳定。
[0191 ] 5.2对实施例1、实施例2、实施例3和对比例1、对比例2的制剂分别进行SEC检测，判 断制剂中抗体纯度的变化，测试结果如表5所示。
[0192] 表5抗体纯度的变化结果
[0193]
[0194] 结果显示，本发明实施例1-3的抗体纯度显著高于对比例1-2。
[01M]本发明的制剂在放置1个月后，其抗体纯度的下降程度明显低于对比例1-2中抗体 纯度的下降值。因此，本发明制剂具有更好的稳定性。
[0196]在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可 w对本发明作各种改动或修改，运些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。
【主权项】
1. 一种抗体液体制剂，其特征在于，所述制剂包括： (i) 治疗有效量的抗VEGF单克隆抗体； (ii) 含100-200mM磷酸盐缓冲体系； (iii) 抗体保护剂；以及 (iv) 表面活性剂， 其中，所述制剂的pH为5.4-5.65。2. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述抗VEGF抗体的浓度为20-30mg/ml，较佳 地，22_28mg/ml。3. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH为5.4-5.6，较佳地，5.45-5.55。4. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述抗体保护剂选自下组:海藻糖、鹿糖、或 其组合。5. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述抗体保护剂的浓度为40-80mg/ml，较佳 地，50-80mg/ml，更佳地，60-80mg/ml。6. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为O . 1-1.5mg/ml，较 佳地，O · 2-lmg/ml，更佳地，O · 4-lmg/ml。7. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂具有选自下组的一种或多种特征： (a) 所述制剂的多聚体含量< 1 %，较佳地，<0.8 %，更佳地，<0.5 % ; (b) 所述制剂在2-8°C下保存至少2年，且纯度下降的百分比低于2%; (c) 所述制剂在25°C下保存一个月，纯度下降的百分比低于0.03%，多聚体含量低于 0.5% ； (d) 所述制剂在2-8°C下保存一个月，纯度下降的百分比低于0.01%，多聚体含量低于 0.5%〇8. 如权利要求1所述制剂的用途，其特征在于，所述制剂用于制备治疗VEGF相关性疾病 的药物。9. 一种药盒，其特征在于，所述的药盒含有一容器以及位于所述容器内的权利要求1所 述的制剂。10. -种制备稳定的抗VEGF抗体制剂的方法，其特征在于，包括步骤： (a) 将治疗有效量的抗VEGF抗体、含100-200mM磷酸盐缓冲体系、抗体保护剂以及表面 活性剂进行混合； (b) 将混合后的混合物pH值调整至pH为5.4-5.65; 从而获得一种稳定的抗VEGF抗体制剂。
【文档编号】A61K39/395GK105920600SQ201610244018
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月19日
【发明人】付德丽, 李春澍, 付爱玲, 孙海胜, 邱永锋, 杨君, 张磊, 钟慧丽, 周雪
【申请人】上海景泽生物技术有限公司