一种吸附有益生菌的护垫及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明涉及一种吸附有益生菌的护垫及其制备方法，该护垫，包括益生菌除臭层，所述的益生菌除臭层由吸附有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、酵母菌的载体颗粒构成。本发明还涉及该护垫的制备方法与应用。本发明所述吸附有益生菌的护垫，采用枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌以芽孢体状态吸附于载体颗粒中，再与活性干酵母混合，以休眠状态存在，一旦使用，借助于人体的体温、湿气进行萌发，遇到粪便等排泄物时可以大量繁殖，进行代谢，分解其中的NH3、H2S等臭味物质；酵母在生长繁殖过程中会产生香气成分，从而达到净化空气、消除异味的作用。同时，上述混合菌在代谢过程中产生抗菌活性物质，可以显著预防卧床老人、瘫痪病人的二次感染。
【专利说明】
-种吸附有益生菌的护垫及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明设及一种吸附有益生菌的护垫及其制备方法，属于日用品技术领域。
【背景技术】
[0002] 恶臭污染物在《恶臭污染物排放标准》（国家恶臭污染物排放标准，GB/T 14554- 93)中，被定义为"一切刺激嗅觉器官引起人们不愉快及损害生活环境的气体物质"，氨、硫 化氨和吗I噪等是长期擁痕病人房间容易产生的有害气体，它们主要来源于主食蛋白质的代 谢终产物，或粪便中代谢产物和残留养分经细菌分解产生的恶臭物质，大肠杆菌与葡萄球 菌是肠道中最常见的细菌，随着粪便排出体外后，二者在生长繁殖过程中促使粪便中未消 化完全的蛋白质分解，蛋白质在分解过程中产生有机胺、硫化氨、硫醇、吗I噪、粪臭素等，导 致环境空气恶臭难闻。恶臭不仅给人带来嗅觉上的不适，对呼吸、消化、屯、血管、内分泌及神 经系统都会造成影响，长期生活于恶臭污染的环境中会引起厌食、失眠、记忆力下降等功能 性疾病，不仅影响着病人和家人的正常生活，而且降低了居住质量，危害病人和家人的身体 健康，因此老人防护垫的成分就起到了关健作用。
[0003] 枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌与酵母菌是自然界中广泛存在的一种非致病性细 菌，枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌在生长代谢过程中能够产生多种抗菌物质，如枯草菌素、 多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肤等活性物质，运些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致 病菌有明显的抑制作用。运些抗菌物质可W抑制细菌、真菌和酵母，同时，枯草芽抱杆菌在 生理代谢过程中可W产生氨基氧化酶及分解硫化物的酶类，将臭源吗I噪类等化合物氧化成 无臭、无毒害、无污染的物质，减少空气中NH3、也S浓度。樊杰等研究表明，枯草芽抱杆菌好氧 发酵一段时间内，枯草芽抱杆菌对NH4+-N、N02-N、N03-N的总削减率达到了98.51%、 84.90%、96.51%。而且具有溫度、pH值、储藏稳定性好等特点。因此，其在食品、医药、化工 和防病等方面有重要的应用价值。
[0004] 中国专利文献CN102247611A(申请号201110189038.4)公开了一种微生物除臭剂 及其制备方法，其菌种组成为:嗜酸乳杆菌1〇6~1〇9个/mL、短小芽抱杆菌106~10 9个/mL、枯 草芽抱杆菌1〇6~1〇9个/血、巧光假单胞菌1〇5~1〇7个/mL、沼泽红假单胞菌10 5~107个/mL、 班图酒香酵母菌104~106个/mL、平常假丝酵母菌104~10 6个/mL、扩张青霉104~106个/mL、 米根霉104~106个/mL、绿色木霉104~106个/mL、细黄链霉菌10 4~106个/mL和灰色链霉菌 1〇4 ~1〇6 个/mL。
[0005] 中国专利文献CN104371959A(申请号201410657323.8)公开了生物除臭灭蛹复合 菌剂包括酵母菌、乳酸菌、功能芽抱杆菌、光合细菌和白僵菌，按顺序各菌种的质量比为0.5 ~2:0.5~2.5 :1.5~3.5 :1.5~2.5:1;微生物活菌总数> 10吃即/g。所述功能芽抱杆菌为 包括巨大芽抱杆菌、解淀粉芽抱杆菌、枯草芽抱杆菌、蜡状芽抱杆菌、地衣芽抱杆菌、短小芽 抱杆菌和苏云金芽抱杆菌的混合菌剂。W及生物除臭灭蛹复合菌剂在垃圾回收过程中除臭 与灭蛹的应用。
[0006] 中国专利文献CN104126515A(申请号201410345580.8)公开了一种畜禽生物降解 垫，由载体和混合菌剂混合后粉碎制成，所述混合菌剂由w下短小芽抱杆菌、枯草芽抱杆 菌、地衣芽抱杆菌、乙酸巧不动杆菌、脱氮副球菌、粪球产碱菌混合后经发酵、干燥制成。
【发明内容】
[0007]本发明针对现有技术的不足，提供一种吸附有益生菌的护垫及其制备方法与应 用。
[000引术语说明
[0009] 本发明所述的益生菌是枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌与酵母菌的统称。
[0010] 为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
[0011] -种吸附有益生菌的护垫，其特征在于，包括益生菌除臭层，所述的益生菌除臭层 由吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒构成，所述枯草芽抱杆菌、短小 芽抱杆菌与酵母菌的数量之比为1:(0.5~1):(1~2)，每克载体颗粒吸附的处于休眠状态 的益生菌菌体总数为107~IQiiCRJ。
[0012] 根据本发明优选的，所述载体颗粒是将枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌芽抱悬浮于 P册.5~6.8的憐酸缓冲液后用活性炭吸附，干燥后与活性干酵母混合后制得。
[0013] 根据本发明优选的，所述载体颗粒为活性炭或娃藻±。活性炭、娃藻±具有微孔发 达、比表面积大、有超强吸附功能的材料，由于它的吸附性使其更容易与枯草芽抱杆菌、短 小芽抱杆菌芽抱及酵母菌融合在一起。
[0014] 根据本发明优选的，所述枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌与酵母菌的活菌数之比为 1:1:1。
[0015] 根据本发明优选的，所述枯草芽抱杆菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中 屯、(CGMCC)的保藏编号为1.933的枯草芽抱杆菌。
[0016] 根据本发明优选的，所述短小芽抱杆菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中 屯、(CGMCC)的保藏编号为1.937的短小芽抱杆菌。
[0017] 根据本发明优选的，所述酵母菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中屯、 (CGMCC)的保藏编号为2.0559的酵母菌。
[0018] 根据本发明优选的，所述吸附有益生菌的护垫还包括设置有包覆益生菌除臭层的 透气层;进一步优选的，透气层材质为棉布。
[0019] 上述吸附有益生菌的护垫的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0020] (1)取枯草芽抱杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为100~150亿/毫升、 芽抱形成率达95% W上的枯草芽抱杆菌发酵液，固液分离，制得枯草芽抱杆菌；
[0021] (2)取短小芽抱杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为25~35亿/毫升、芽 抱形成率达95% W上的短小芽抱杆菌发酵液，固液分离，制得短小芽抱杆菌；
[0022] (3)取酵母菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为40~50亿/毫升的酵母菌发 酵液，固液分离，取固体制得菌体，向菌体中按质量比1:(1~3)的比例添加辅料，混匀，干 燥，制得活性干酵母；
[0023] (4)将步骤（1)制得的枯草芽抱杆菌、步骤(2)制得的短小芽抱杆菌按比例悬浮于 P册.5~6.8的憐酸缓冲液后用活性炭吸附，在30~60度条件下恒溫干燥后，与步骤(3)制得 的活性干酵母按比例混合，制得吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒， 每克吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒吸附的处于休眠状态的益生 菌菌体总数为1〇7~i〇iic即；
[0024] (5)将步骤(4)制得的吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒包 覆透气层，制得吸附有益生菌的护垫。
[0025] 根据本发明优选的，所述步骤（1)中的活化培养为将枯草芽抱杆菌接种于活化培 养基中，在36~38°C活化培养16~20h;
[00%]上述枯草芽抱杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0027] 葡萄糖0.5~2.0%，蛋白腺0.5~1.0%，酵母粉0.3~0.8%，牛肉膏0.1~0.3%， 余量水，P册.7~7.2;
[0028] 根据本发明优选的，所述步骤(1)中的发酵培养，步骤如下：
[0029] 将活化后的枯草芽抱杆菌接种于枯草芽抱杆菌发酵培养基中，在36~38Γ发酵培 养28~32h，制得枯草芽抱杆菌发酵液；
[0030] 上述枯草芽抱杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0031] 玉米粉0.5%~2.5%，玉米浆0.5%~1.0%，蛋白腺0.1 %~0.4%，糊精0.1%~ 0.6%，憐酸二氨钟0.1 %~0.3%，硫酸儀0.01 %~0.05%，豆巧粉0.5~1.5%，氯化钢 0.1 %~0.3%，硫酸儘0.01 %~0.03%，余量水，P册.8~7.2。
[0032] 根据本发明优选的，所述步骤(2)中的短小芽抱杆菌活化培养为将菌株接种于活 化培养基中，在36~38°C活化培养16~22h;
[0033] 上述短小芽抱杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0034] 葡萄糖0.5~1.5，硫酸锭0.3~1.0 %，酵母粉0.3~1.0 %，憐酸氨二钟0.1~ 0.5%，余量水，P册.5~7.3。
[0035] 根据本发明优选的，所述步骤(2)中的发酵培养，步骤如下：
[0036] 将活化后的短小芽抱杆菌接种于短小芽抱杆菌发酵培养基，在36~38Γ发酵培养 26~30h，制得短小芽抱杆菌发酵液；
[0037] 上述短小芽抱杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[003引葡萄糖0.5~2%、玉米淀粉1~2%、蛋白腺0.5~1.5%、硫酸锭0.3~0.7%、玉米 浆0.1~1%、1(出口04 0.1~0.5%、]\%504.7出0 0.1~0.2%，余量水，口册.7~7.0。
[0039] 根据本发明优选的，所述步骤(3)中的活化培养为将酵母菌株接种于活化培养基 中，在28~32°C活化培养15~22h;
[0040] 上述酵母菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0041 ] 葡萄糖0.5~2.0%，酵母粉0.1~0.8%，蛋白腺0.5~1.0%，氯化钢0.1-0.5%，余 量水，P册.5~7.0。
[0042] 根据本发明优选的，所述步骤(3)中的发酵培养，步骤如下：
[0043] 将活化后的酵母菌接种于酵母菌发酵培养基，在28~32°C发酵培养26~30h，制得 酵母菌发酵液；
[0044] 葡萄糖0.5~2.0%，麦芽糖0.5~2.0%，酵母粉0.1~0.8%，蛋白腺0.5~1.0%， 硫酸锭0.5~1.5%，余量水，P册.5~7.0。
[0045] 根据本发明优选的，所述步骤(3)中的辅料组分如下，均为重量份：
[0046] 淀粉20~50份、甘油0.5~2.5份、维生素 C 0.5~3份、吐溫-80 0.4~2.0份。
[0047]上述吸附有益生菌的护垫在制备邸床老人、擁痕病人、婴儿床上护理用品中的应 用。
[004引有益效果
[0049] 1、本发明所述吸附有益生菌的护垫，采用枯草芽抱杆菌和短小芽抱杆菌W芽抱体 状态吸附于载体颗粒中，再与活性干酵母混合，在运输、货架等干燥的环境中W休眠状态存 在，一旦使用，借助于人体的体溫、湿气进行萌发，遇到粪便等排泄物时可W大量繁殖，进行 代谢，分解其中的NH3、此S等臭味物质;酵母在生长繁殖过程中会产生香气成分，从而达到净 化空气、消除异味的的作用。同时，上述混合菌在代谢过程中产生抗菌活性物质，对致病菌 如金黄色葡萄球菌、绿脈杆菌及大肠杆菌等的生长繁殖也有抑制作用，可W显著预防邸床 老人、擁痕病人的二次感染；
[0050] 2、本发明所采用的枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌及酵母菌W休眠形式存在于产品 中，其中芽抱具有对不良环境有很强的抵抗能力，一旦遇到合适的环境，又会重新萌发成菌 体，发挥作用的功效;从而解决了产品在运输、胆存及使用中益生菌菌体失去活性，降低效 果的问题，并且使用方便、效果理想。弥补了 W往微生态制剂在菌种存活时间短和储藏难的 缺陷和不足，延长了该类产品的有效期及存放问题；
[0051] 3、本发明所述的一种吸附有益生菌的护垫及其制备方法，本发明所采用的吸附剂 如活性炭、娃藻±等，因具有微孔发达、比表面积大、有超强吸附功能，可W起到吸附臭味、 致病菌及尿液，对除臭抗菌起到辅助作用。
【附图说明】
[0052] 图1为本发明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌垫的结构示意图；
[0053] 图中：1、益生菌除臭层，2、载体颗粒，3、透气层。
【具体实施方式】
[0054] 下面结合实施例及说明书附图对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但本发 明所保护范围不限于此。
[0055] 实施例1~2中所述枯草芽抱杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中屯、 (CGMCC)，保藏编号为1.933;
[0056] 实施例1~2中所述短小芽抱杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中屯、 (CGMCC)，保藏编号为1.937;
[0057] 实施例1~2中所述酵母菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中屯、（CGMCC)，保藏 编号为2.0559。
[0化引实施例1
[0059] -种吸附有益生菌的护垫及其制备方法，采用如下方法制备：
[0060] (1)取枯草芽抱杆菌，在37 °C活化培养16h，然后在37 °C发酵培养27h，制得活菌浓 度为102亿/毫升，芽抱形成率达95 % W上的枯草芽抱杆菌发酵液，500化pm离屯、20min，取沉 淀，制得枯草芽抱杆菌；
[0061 ]上述枯草芽抱杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0062] 葡萄糖0.8%，蛋白腺0.5%，酵母粉0.3%，牛肉膏0.1%，余量水，P册.7~7.2;
[0063] 上述枯草芽抱杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0064] 玉米粉2.0 %，玉米浆0.5 %，蛋白腺0.2 %，糊精0.6 %，憐酸二氨钟0.1 %，硫酸儀 0.05%，豆巧粉0.5%，氯化钢0.3%，硫酸儘0.01 %，余量水，P册.8~7.2。
[0065] (2)取短小芽抱杆菌，在37 °C活化培养17h，然后在37 °C发酵培养3化，制得活菌浓 度为29亿/毫升的短小芽抱杆菌发酵液，500化pm离屯、20min，取沉淀，制得短小芽抱杆菌；
[0066] 上述短小芽抱杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0067] 葡萄糖1.5 %，硫酸锭0.3 %，蛋白腺0.8 %，憐酸氨二钟0.1 %，余量水，pH6.5~ 7.3。
[0068] 上述短小芽抱杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0069] 葡萄糖2%、酵母粉0.5%、硫酸锭0.3%、玉米浆0.3%、Κ出P〇4 0.2%、MgS〇4 · 7此0 0.2%，余量水，P册.7~7.0。
[0070] (3)取酵母菌接种于活化培养基中，在3(TC活化培养15h，然后在30发酵培养22h， 制得活菌浓度为41亿/毫升的酵母菌发酵液，50(K)rpm离屯、20min，取固体制得菌体，向菌体 中按质量比1:3的比例添加辅料，干燥，制得活性干酵母菌；
[0071] 根据本发明优选的，所述步骤(3)中的辅料组分如下，均为重量份：
[0072] 淀粉30份、甘油2份、维生素 C 1.5份、吐溫-80 2份。
[0073] 上述酵母菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0074] 葡萄糖1.5 %，酵母粉0.3 %，蛋白腺0.5 %，氯化钢0.1 %，余量水，P册.5。
[0075] 上述酵母菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0076] 葡萄糖2.0 %，麦芽糖0.5 %，酵母粉0.1 %，蛋白腺0.5 %，硫酸锭0.5 %，余量水， 抑 7.0。
[0077] (4)将步骤（1)制得的枯草芽抱杆菌、步骤(2)制得的短小芽抱杆菌按比例悬浮于 pH6.7的憐酸缓冲液后用活性炭吸附，在45度条件下恒溫干燥后，与步骤(3)制得的活性干 酵母按比例混合，制得吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒；
[0078] (5)将步骤(4)制得的吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒包 覆透气层，制得吸附有益生菌的护垫。
[0079] 上述制得的吸附有益生菌的护垫，如图1所示，包括益生菌除臭层1，所述的益生菌 除臭层1由吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒2构成;所述载体颗粒2 为活性炭。益生菌除臭层1包覆有透气层3;透气层对才质为棉布。
[0080] 经检测，每克吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒吸附的处于 休眠状态的益生菌菌体总数为lO^CFU;枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的活菌数之比 为1:1:1 〇
[0081 ] 实施例2
[0082] -种吸附有益生菌的护垫及其制备方法，采用如下方法制备：
[0083] (1)取枯草芽抱杆菌，在37 °C活化培养1她，然后在37 °C发酵培养3化，制得活菌浓 度为113亿/毫升，芽抱形成率达95 % W上的枯草芽抱杆菌发酵液，500化pm离屯、20min，取沉 淀，制得枯草芽抱杆菌；
[0084] 上述枯草芽抱杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[00化]葡萄糖1.2%，蛋白腺0.5%，酵母粉0.3%，牛肉膏0.3%，余量水，P册.7;
[0086] 上述枯草芽抱杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0087] 玉米粉2.5 %，蛋白腺0.1 %，糊精0.2%，憐酸二氨钟0.3 %，硫酸儀0.03 %，豆巧粉 1.5 %，氯化钢0.1 %，硫酸儘0.01 %，余量水，pH7.2。
[0088] (2)取短小芽抱杆菌，在37°C活化培养16h，然后在37°C发酵培养30h，制得活菌浓 度为29亿/毫升的短小芽抱杆菌发酵液，500化pm离屯、20min，取沉淀，制得短小芽抱杆菌；
[0089] 上述短小芽抱杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0090] 葡萄糖1.5%，硫酸锭0.5%，酵母粉0.35%，憐酸氨二钟0.2%，余量水，P册.5。
[0091] 上述短小芽抱杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0092] 葡萄糖2%、蛋白腺0.5%、硫酸锭0.3%、玉米浆0.5%、Κ出P〇4 0.3%、MgS〇4 · 7此0 〇.1%，余量水，口册.8。
[0093] (3)取酵母菌接种于活化培养基中，在3(TC活化培养16h，然后在30发酵培养2地， 制得活菌浓度为48亿/毫升的酵母菌发酵液，50(K)rpm离屯、20min，取固体制得菌体，向菌体 中按质量比1:1的比例添加辅料，干燥，制得活性干酵母菌；
[0094] 根据本发明优选的，所述步骤(3)中的辅料组分如下，均为重量份：
[00M]淀粉50份、甘油1.5份、维生素 C 2份、吐溫-80 1.4份。
[0096] 上述酵母菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0097] 葡萄糖1.2%，酵母粉0.5%，蛋白腺0.5%，氯化钢0.2%，余量水，P册.5~7.0。
[0098] 上述酵母菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0099] 麦芽糖2.0 %，酵母粉0.8 %，蛋白腺0.5 %，硫酸锭0.5 %，玉米浆1.0 %，余量水， 抑 7.0。
[0100] (4)将步骤（1)制得的枯草芽抱杆菌、步骤(2)制得的短小芽抱杆菌按比例悬浮于 PH6.0的憐酸缓冲液后用活性炭吸附，在40度条件下恒溫干燥后，与步骤(3)制得的活性干 酵母按比例混合，制得吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒；
[0101] (5)将步骤(4)制得的吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒包 覆透气层，制得吸附有益生菌的护垫。
[0102] 上述制得的吸附有益生菌的护垫，包括益生菌除臭层1，所述的益生菌除臭层1由 吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒2构成;所述载体颗粒2为娃藻±。 益生菌除臭层1包覆有透气层3;透气层对才质为棉布。
[0103] 经检测，每克吸附有枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的载体颗粒吸附的处于 休眠状态的益生菌菌体总数为IQiiCFU;枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌、酵母菌的活菌数之比 为1:0.5:2。
[0104] 对比例1
[0105] 按实施例2所述制备方法制得的吸附有益生菌的护垫，不同之处在于，步骤(4)采 用将步骤（1)制得的枯草芽抱杆菌、步骤(2)制得的短小芽抱杆菌芽抱及步骤(3)制得的酵 母菌悬浮于抑7.0的憐酸缓冲液中，用娃藻±按比例比吸附。
[0106] 对比例2
[0107] 按实施例1所述制备方法制得的吸附有益生菌的护垫，不同之处在于，步骤(3)中 将枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌与酵母菌按数量比1:2:5的比例混合。
[010引实验例1
[0109] 菌体成活率试验：
[0110] 将实施例2和对比例1制得的吸附有益生菌的护垫在室溫干燥条件下放置一段时 间，然后取出吸附有益生菌的娃藻±进行无菌操作，在质量百分比浓度为1%的葡萄糖溶液 中进行萌发试验，用稀释平板法计数总菌数，结果如表1所示：
[0111] 表1
[0112]
[0113] 由表1中可W看出，枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌先与娃藻±吸附，干燥后再与活 性干酵母混合制得的护垫，菌体成活率显著高于对比例1，对比例1中，Ξ种菌一起混合吸 附，因菌体的特性不同，在操作过程中酵母菌的死亡率会很高，影响了整个菌数的含量，从 而影响了作用效果。
[0114] 实验例2
[0115] 抑菌试验：
[0116] 将实施例1与对比例2制得的护垫在室溫干燥条件下放置Ξ个月，然后取出吸附有 益生菌的活性炭无菌操作进行下列抑菌试验：
[0117] 将质量相同的吸附活性炭无菌操作分别加入盛有100毫升LB培养基的液体发酵培 养液中，然后分别按体积百分比3%接种量接种大肠杆菌和葡萄球菌(浓度108个/毫升），W 没有放吸附益生菌的活性炭作为空白对照，培养16小时，分别平板计数，计算抑菌率，结果 如表2所示：
[011引表2
[0119]
[0120]
[0121]由表2中可W看出，实施例1的抑菌效果要显著优于对比例2,从而说明Ξ种菌的抑 菌性能不同，枯草芽抱杆菌的抑菌性较高，酵母菌较低，在样品存放过程中，芽抱菌的耐受 性比较高，因此存活率及作用效果也高，因而Ξ种菌体的比例不同会对抑菌性能有影响，Ξ 种菌的混合比例会直接影响抑菌效果。
【主权项】
1. 一种吸附有益生菌的护垫，其特征在于，包括益生菌除臭层，所述的益生菌除臭层由 吸附有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、酵母菌的载体颗粒构成，所述枯草芽孢杆菌、短小芽 孢杆菌与酵母菌的数量之比为1: (0.5~1): (1~2)，每克载体颗粒吸附的处于休眠状态的 益生菌菌体总数为1〇7~l〇nCFU。2. 如权利要求1所述的护垫，其特征在于，所述载体颗粒是将枯草芽孢杆菌、短小芽孢 杆菌芽孢悬浮于PH5.5~6.8的磷酸缓冲液后用活性炭吸附，干燥后与活性干酵母混合后制 得； 优选的，所述载体颗粒为活性炭或娃藻土； 优选的，所述枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌与酵母菌的活菌数之比为1:1:1。3. 如权利要求1所述的护垫，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为来源于中国普通微生物 菌种保藏管理中心(CGMCC)的保藏编号为1.933的枯草芽孢杆菌； 优选的，所述短小芽孢杆菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC)的保 藏编号为1.937的短小芽孢杆菌； 优选的，所述酵母菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC)的保藏编号 为2.0559的酵母菌； 优选的，所述吸附有益生菌的护垫还包括设置有包覆益生菌除臭层的透气层;进一步 优选的，透气层材质为棉布。4. 权利要求1所述吸附有益生菌的护垫的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 取枯草芽孢杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为100~150亿/毫升、芽孢 形成率达95%以上的枯草芽孢杆菌发酵液，固液分离，制得枯草芽孢杆菌； (2) 取短小芽孢杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为25~35亿/毫升、芽孢形 成率达95%以上的短小芽孢杆菌发酵液，固液分离，制得短小芽孢杆菌； (3) 取酵母菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为40~50亿/毫升的酵母菌发酵 液，固液分离，取固体制得菌体，向菌体中按质量比1: (1~3)的比例添加辅料，混匀，干燥， 制得活性干酵母； (4) 将步骤（1)制得的枯草芽孢杆菌、步骤(2)制得的短小芽孢杆菌按比例悬浮于pH5.5 ~6.8的磷酸缓冲液后用活性炭吸附，在30~60度条件下恒温干燥后，与步骤(3)制得的活 性干酵母按比例混合，制得吸附有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、酵母菌的载体颗粒，每克 吸附有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、酵母菌的载体颗粒吸附的处于休眠状态的益生菌菌 体总数为1〇 7~l〇nCFU; (5) 将步骤(4)制得的吸附有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、酵母菌的载体颗粒包覆透 气层，制得吸附有益生菌的护垫。5. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中的活化培养为将枯草芽 孢杆菌接种于活化培养基中，在36~38°C活化培养16~20h; 上述枯草芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖0.5~2.0%，蛋白胨0.5~1.0%，酵母粉0.3~0.8%，牛肉膏0.1~0.3%，余量 水，口册.7~7.2; 优选的，所述步骤(1)中的发酵培养，步骤如下： 将活化后的枯草芽孢杆菌接种于枯草芽孢杆菌发酵培养基中，在36~38°C发酵培养28 ~32h，制得枯草芽孢杆菌发酵液； 上述枯草芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比： 玉米粉0.5%~2.5%，玉米浆0.5%~1.0%，蛋白胨0.1%~0.4%，糊精0.1%~ 0 · 6 %，磷酸二氢钾0 · 1 %~0 · 3 %，硫酸镁0 · 01 %~0 · 05 %，豆柏粉0 · 5~1 · 5 %，氯化钠 0· 1 %~0.3%，硫酸锰 0.01 %~0.03%，余量水，ρΗ6·8~7.2。6. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的短小芽孢杆菌活化培 养为将菌株接种于活化培养基中，在36~38°C活化培养16~22h; 上述短小芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖0.5~1.5，硫酸铵0.3~1.0 %，酵母粉0.3~1.0 %，磷酸氢二钾0.1~0.5 %，余 量水4册.5~7.3。7. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的发酵培养，步骤如下： 将活化后的短小芽孢杆菌接种于短小芽孢杆菌发酵培养基，在36~38°C发酵培养26~ 30h，制得短小芽孢杆菌发酵液； 上述短小芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖0.5~2 %、玉米淀粉1~2%、蛋白胨0.5~1.5%、硫酸铵0.3~0.7 %、玉米浆0.1 ~1%、ΚΗ2Ρ〇4 0.1 ~0.5%、MgS〇4.7H20 0.1 ~0.2%，余量水，ρΗ6·7~7.0。8. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的活化培养为将酵母菌 株接种于活化培养基中，在28~32 °C活化培养15~22h; 上述酵母菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖0.5~2.0%，酵母粉0.1~0.8%，蛋白胨0.5~1.0%，氯化钠0.1-0.5%，余量 水，ρΗ5·5~7.0; 优选的，所述步骤(3)中的发酵培养，步骤如下： 将活化后的酵母菌接种于酵母菌发酵培养基，在28~32°C发酵培养26~30h，制得酵母 菌发酵液； 葡萄糖0.5~2.0%，麦芽糖0.5~2.0%，酵母粉0.1~0.8%，蛋白胨0.5~1.0%，硫酸 铵0.5~1.5%，余量水，ρΗ5· 5~7.0。9. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的辅料组分如下，均为重 量份： 淀粉20~50份、甘油0.5~2.5份、维生素 C 0.5~3份、吐温-80 0.4~2.0份。10. 权利要求1所述吸附有益生菌的护垫在制备用解卧床老人、瘫痪病人、婴儿床上护 理用品中的应用。
【文档编号】A61L15/36GK105999369SQ201610348844
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月24日
【发明人】楚杰, 刘可春, 韩利文, 何秋霞, 韩建, 张云, 李晓彬, 孙晨, 陈维云
【申请人】山东省科学院生物研究所