一种硒化多糖免疫增强剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种硒化多糖免疫增强剂，所述硒化多糖免疫增强剂由以下重量份的物质制成：硒化多糖120?150份、黄秋葵提取物15?20份、油茶籽粕改性提取物20?35份与蜂胶提取物10?30份。本发明的硒化多糖免疫增强剂具有调节免疫功能、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗金属中毒、延长寿命、降低血糖和血脂、增强愈伤等作用，并提供了如黄酮类化合物、银杏黄酮等必须的营养物质，提高免疫力，抗衰老、清除自由基。
【专利说明】
一种砸化多糖免疫増强剂
技术领域
[0001] 本发明涉及一种硒化多糖，尤其涉及一种含硒量高、稳定性高、生物学效价高的硒 化多糖免疫增强剂。
【背景技术】
[0002] 多糖是一种免疫增强剂，它能增强动物的非特异性免疫功能，提高机体抗病能力， 有抗衰老、防癌、抗癌、抗肝炎等作用，而且服用后机体无药残，近年来受到人们的普遍重 视。硒多糖具有调节免疫功能、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗金属中毒、延长寿命、降低血糖和 血脂、增强愈伤等作用。已有报道硒多糖生物活性普遍高于多糖和硒，且易于机体的吸收和 利用。
[0003] 硒是人和动物必需的微量元素。它是构成谷胱甘肽过氧化物酶的活性成分，能防 止胰岛辟田胞氧化破坏，使其功能正常，促进糖代谢、降低血糖和尿糖，改善糖尿病患者的症 状;硒可保护视网膜，增强玻璃体的光洁度，提高视力，有防止白内障的作用；它也是维持心 脏功能正常的重要元素，对心脏肌体有保护和修复的作用。目前研究表明，人体血硒水平的 降低，会导致体内清除自由基的功能减退，造成有害物质沉积增多，血压升高、血管壁变厚、 血管弹性降低、血流速度变慢，送氧功能下降，从而诱发心脑血管疾病的发病率升高。所以 科学补硒对预防心脑血管疾病、高血压、动脉硬化等都有较好的作用。
[0004] 人们经常食用的黄油、鱼粉、龙虾、蘑菇、猪肾、大蒜等食物虽然含有一定的硒元 素，但吸收率不太理想。营养学家提倡补充有机硒，如硒酸酯多糖、硒酵母、硒蛋白、富硒蘑 菇、富硒麦芽、富硒天麻、富硒茶叶、富硒大米等。
[0005] 专利CN1085750A公开了一种多糖、多糖硒锗及其组合五味型饮料的制法，该法是 将香菇、银耳、灵芝或枸杞搅碎提取，作为一种富硒的饮料;专利CN1388094A公开了一种富 硒氨基酸及其生产方法，通过增加农产品中的硒含量，来促进农作物生长，从而提高作物产 量的方法;专利CN 1162391A公开了一种富硒糖的生产方法，该法是将含硒化合物用于甘蔗 的种植过程中，得到的甘蔗糖的硒含量是普通种植的5-100倍;专利CN 1082360A公开了一 种富硒果茶及生产方法；专利CN 1143457A公开了一种富硒咸蛋及其生产方法；专利 CN1435081A公开了一种富硒梨的生产方法，将含硒营养液通过喷施或滴注施于梨树，从而 增加梨的硒含量;专利CN 1403017A富硒绿茶保健食品，该保健食品是将富硒提取物与富硒 绿茶混合配制而成。
[0006] 专利CNlOl 104644A公开了 一种多糖亚硒酸酯的制法及其应用，该法是以糊精、右 旋糖酐、阿拉伯糖基木聚糖与氟氧化硒加入到吡啶中，加热反应0.1-100小时，得到一种多 糖亚硒酸酯，最高硒含量可达45%，但该法反应时间过长，而且使用的氟氧化硒不易合成， 不适合大规模的工业化生产；专利ZL88103347授权了种硒化卡拉胶的制法，该法制备的硒 化卡拉胶，硒含量较低（2500-15000ppm)，生成如硒化氢等有毒的副产物；专利CN 101024664A公开了硒半乳糖及其化学合成，该法是将半乳糖与有机硒化试剂反应，该法制 备过程复杂，而且单糖不具有天然多糖所具有的药理活性;专利CN 101190951A公开了一种 多糖硒酸酯的制备方法，该法是在二氧六环或甲苯中进行多糖硒化反应，采用的是非均相 反应，使用的多糖是无水葡聚糖或无水黄芪多糖，合成的是硒酸酯，反应时间在5小时左右， 硒含量为769-2250yg/g;专利ZL200410071806.6授权了 一种硒酸多糖及其制备方法，该法 是先合成亚硒酸，将亚硒酸还原成硒酸，然后硒酸根导入多糖中，硒含量为3mg-200mg/g;专 利CN 1560088A公开了一种硒化葡甘聚糖的制备方法，在一种Se6+溶液中加入乙醇和盐酸， 制成硒化反应液，然后加入葡甘聚糖，制成硒化葡甘聚糖，硒含量为125.4-197.3mg/kg;专 利CN1284509A公开了壳聚糖亚硒酸盐及其制备方法，该法是用将壳聚糖的胺基与加入的亚 硒酸反应，产物的硒含量为0-26%。
[0007] 以上专利中提到的硒化技术存在着反应时间长，反应副产物多，硒含量普遍低，反 应过程复杂等缺点。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于为了解决现有硒化多糖制成的产品反应副产物多，硒含量普遍 偏低的缺陷而提供一种含硒量高、稳定性高、生物学效价高的硒化多糖免疫增强剂。
[0009] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 一种硒化多糖免疫增强剂，所述硒化多糖免疫增强剂由以下重量份的物质制成:硒化 多糖120-150份、黄秋葵提取物15-20份、油茶籽柏改性提取物20-35份与蜂胶提取物10-30 份。在本技术方案中，蜂胶是工蜂采集长寿胶源植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌 物混合形成的一种带有柔和香气的胶粘性物质，是蜜蜂用来修补巢房和内环境消毒杀菌以 防护抵御病虫害和病原微生物入侵巢房的一种特殊物质。蜂胶中黄酮类化合物含量很高， 是人体必须的营养素之一，体内不能合成，只能从饮食中摄取，因此蜂胶既是天然保健食 品，又是天然抗生素，其具有强烈的广谱抗菌、抗氧化活性。黄秋葵营养丰富，幼果中含有大 量的粘滑汁液，具有特殊的香味。其汁液中混有果胶，牛乳聚糖及阿拉聚糖等。它的果胶为 可溶性纤维，在现代保健新观念中极为重视。经常食用有健胃肠，滋补阴阳之功效。
[0010] 作为优选，蜂胶提取物是通过二氧化碳超临界萃取制备而成的，具体步骤为:将蜂 胶原料冷冻粉粹后，用超临界二氧化碳萃取，萃取塔压力为20_25MPa，萃取温度为65-75°C， 萃取时间l_2h，夹带剂为萃取塔进料重量的20-25 %的体积浓度为95 %的乙醇溶液，分离塔 压力10-15MPa，分离温度55-65 °C，从分离塔出料得到蜂胶提取物。
[0011] 作为优选，硒化多糖的制备方法如下:将多糖溶于醋酸溶液中得到A液，将亚硒酸 钠溶于醋酸溶液得到B液，将A液与B液混合均匀后用醋酸溶液调节pH至3.1-3.5，在70-85°C 下搅拌反应6-10h，反应液降至室温后进行透析至用抗坏血酸检测无红色为止;然后浓缩、 冷冻干燥得到硒化多糖。
[0012] 作为优选，多糖与醋酸溶液的固液比为lg: 35-45mL，亚硒酸钠与醋酸溶液的固液 比为lg:l〇-15mL，醋酸溶液的质量浓度为5-12%。
[0013] 作为优选，所述油茶籽柏改性提取物的制备方法如下:取榨油后的油茶籽柏，研磨 成粉，按液固比16_20mL/g将油茶籽柏添加到浓度为70-80wt%的乙醇溶液中并搅拌均匀， 将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为60-70°C，提取时间为2-4min， 微波功率为800-1000W;提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤 液体积0.02-0.04倍的30wt %双氧水溶液，在50-60 °C下加热10_20min，然后向溶液中添加 溶液质量0.4-0.6 %壳聚糖，在室温下静置10-20h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干 燥后制得油茶籽柏提取物;将油茶籽柏提取物溶于酸性溶液中配得浓度为4_6wt%、pH为3-4的油茶籽柏提取物酸性溶液，在2-4h内向油茶籽柏提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油 茶籽柏提取物〇. 4-0.6倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为60-8(TC ;反应结束后经过浓缩、 真空干燥制得油茶籽柏改性提取物。
[0014] 作为优选，黄秋葵提取物的制备方法为:取黄秋葵70-80°C烘箱干燥，干燥至恒重 后粉碎，称取相应所需的量，并按Ig: 30-45mL的物料比，加双蒸水回流提取1-5次，过滤;合 并滤液、减压浓缩，并采用浓缩后10倍质量的90 %乙醇静置过夜，得沉淀物;2-3次水提醇沉 后，沉淀用无水乙醇洗涤，并采用真空冷冻干燥技术得到黄秋葵提取物。
[0015] 作为优选，多糖为岩藻多糖、莱茵衣藻多糖或海地瓜多糖中的一种。
[0016] 作为优选，硒化多糖免疫增强剂的制备方法为:将硒化多糖溶解在10倍质量的去 离子水中，超声震荡30_60min后加入黄秋葵提取物与油茶籽柏改性提取物升温至100-130 °C后保持75-90min，冷却至室温后透析12-24h，然后在50-65 °C、0.06-0.08MPa下减压浓缩 至原体积的60 %，加入蜂胶提取物，在6000-8000rpm下离心10min，最后收集沉淀物将沉淀 物置于_30°C、50Pa的条件下冷冻干燥12-15h，得到硒化多糖免疫增强剂。
[0017]作为优选，超声震荡的频率为65-7 5KHz。
[0018] 本发明的有益效果是本发明的硒化多糖免疫增强剂具有调节免疫功能、抗氧化、 抗肿瘤、抗病毒、抗金属中毒、延长寿命、降低血糖和血脂、增强愈伤等作用，并提供了如黄 酮类化合物、银杏黄酮等必须的营养物质，提高免疫力，抗衰老、清除自由基。
【具体实施方式】
[0019] 下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
[0020] 本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。 下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0021] 实施例1 一种硒化多糖免疫增强剂，所述硒化多糖免疫增强剂由以下重量份的物质制成:硒化 多糖120份、黄秋葵提取物15份、油茶籽柏改性提取物20份与蜂胶提取物10份。多糖为分子 量4万左右的岩藻多糖。
[0022] 硒化多糖免疫增强剂的制备方法为:将硒化多糖溶解在10倍质量的去离子水中， 超声频率为65KHz下震荡30min后，加入黄秋葵提取物与油茶籽柏改性提取物升温至100°C 后保持75min，冷却至室温后透析12h，然后在50°C、0.06MPa下减压浓缩至原体积的60%，加 入蜂胶提取物，在6000rpm下离心10min，最后收集沉淀物将沉淀物置于-30°C、50Pa的条件 下冷冻干燥12h，得到硒化多糖免疫增强剂。
[0023] 其中，蜂胶提取物是通过二氧化碳超临界萃取制备而成的，具体步骤为:将蜂胶原 料冷冻粉粹后，用超临界二氧化碳萃取，萃取塔压力为20MPa，萃取温度为65°C，萃取时间 Ih，夹带剂为萃取塔进料重量的20 %的体积浓度为95 %的乙醇溶液，分离塔压力IO-MPa，分 离温度55°C，从分离塔出料得到蜂胶提取物。
[0024] 硒化多糖的制备方法如下:将多糖溶于醋酸溶液中得到A液，将亚硒酸钠溶于醋酸 溶液得到B液，将A液与B液混合均匀后用醋酸溶液调节pH至3.5,在85°C下搅拌反应10h，反 应液降至室温后进行透析至用抗坏血酸检测无红色为止;然后浓缩、冷冻干燥得到硒化多 糖。多糖与醋酸溶液的固液比为Ig: 45mL，亚硒酸钠与醋酸溶液的固液比为Ig: 15mL，醋酸溶 液的质量浓度为12%。
[0025]所述油茶籽柏改性提取物的制备方法如下:取榨油后的油茶籽柏，研磨成粉，按液 固比16mL/g将油茶籽柏添加到浓度为70wt %的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至 微波提取器中进行加热提取，提取温度为60°C，提取时间为2min，微波功率为800W;提取后 得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积〇. 02倍的30wt %双氧水 溶液，在50 °C下加热IOmin，然后向溶液中添加溶液质量0.4 %壳聚糖，在室温下静置IOh，离 心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽柏提取物;将油茶籽柏提取物溶于酸 性溶液中配得浓度为4wt%、pH为3的油茶籽柏提取物酸性溶液，在2h内向油茶籽柏提取物 酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽柏提取物0.4倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为60°C; 反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽柏改性提取物。
[0026]黄秋葵提取物的制备方法为:取黄秋葵70 °C烘箱干燥，干燥至恒重后粉碎，称取相 应所需的量，并按Ig: 30mL的物料比，加双蒸水回流提取1次，过滤;合并滤液、减压浓缩，并 采用浓缩后10倍质量的90%乙醇静置过夜，得沉淀物;2次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗 涤，并采用真空冷冻干燥技术得到黄秋葵提取物。
[0027] 实施例2 一种硒化多糖免疫增强剂，所述硒化多糖免疫增强剂由以下重量份的物质制成:硒化 多糖130份、黄秋葵提取物18份、油茶籽柏改性提取物25份与蜂胶提取物15份。多糖为分子 量5万左右的莱茵衣藻多糖。
[0028] 硒化多糖免疫增强剂的制备方法为:将硒化多糖溶解在10倍质量的去离子水中， 超声频率为70KHz下震荡40min后，加入黄秋葵提取物与油茶籽柏改性提取物升温至120°C 后保持80min，冷却至室温后透析20h，然后在55°C、0.07MPa下减压浓缩至原体积的60%，加 入蜂胶提取物，在7000rpm下离心10min，最后收集沉淀物将沉淀物置于-30°C、50Pa的条件 下冷冻干燥13h，得到硒化多糖免疫增强剂。
[0029] 其中，蜂胶提取物是通过二氧化碳超临界萃取制备而成的，具体步骤为:将蜂胶原 料冷冻粉粹后，用超临界二氧化碳萃取，萃取塔压力为20_25MPa，萃取温度为73°C，萃取时 间1.5h，夹带剂为萃取塔进料重量的22 %的体积浓度为95 %的乙醇溶液，分离塔压力 13MPa，分离温度60°C，从分离塔出料得到蜂胶提取物。
[0030] 硒化多糖的制备方法如下:将多糖溶于醋酸溶液中得到A液，将亚硒酸钠溶于醋酸 溶液得到B液，将A液与B液混合均匀后用醋酸溶液调节pH至3.1，在70°C下搅拌反应6h，反应 液降至室温后进行透析至用抗坏血酸检测无红色为止;然后浓缩、冷冻干燥得到硒化多糖。 多糖与醋酸溶液的固液比为Ig: 35mL，亚硒酸钠与醋酸溶液的固液比为Ig: IOmU醋酸溶液 的质量浓度为5 %。
[0031] 所述油茶籽柏改性提取物的制备方法如下:取榨油后的油茶籽柏，研磨成粉，按液 固比18mL/g将油茶籽柏添加到浓度为75wt %的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至 微波提取器中进行加热提取，提取温度为65°C，提取时间为3min，微波功率为900W;提取后 得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积〇. 03倍的30wt %双氧水 溶液，在55 °C下加热15min，然后向溶液中添加溶液质量0.5 %壳聚糖，在室温下静置15h，离 心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽柏提取物;将油茶籽柏提取物溶于酸 性溶液中配得浓度为5wt%、pH为3.8的油茶籽柏提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽柏提取 物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽柏提取物0.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为75 °C ;反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽柏改性提取物。
[0032]黄秋葵提取物的制备方法为:取黄秋葵75 °C烘箱干燥，干燥至恒重后粉碎，称取相 应所需的量，并按Ig: 40mL的物料比，加双蒸水回流提取2次，过滤;合并滤液、减压浓缩，并 采用浓缩后10倍质量的90%乙醇静置过夜，得沉淀物;3次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗 涤，并采用真空冷冻干燥技术得到黄秋葵提取物。
[0033] 实施例3 一种硒化多糖免疫增强剂，所述硒化多糖免疫增强剂由以下重量份的物质制成:硒化 多糖150份、黄秋葵提取物20份、油茶籽柏改性提取物35份与蜂胶提取物30份。多糖为分子 量3万左右的海地瓜多糖。
[0034] 硒化多糖免疫增强剂的制备方法为:将硒化多糖溶解在10倍质量的去离子水中， 超声频率为75KHz下震荡60min后，加入黄秋葵提取物与油茶籽柏改性提取物升温至130°C 后保持90min，冷却至室温后透析24h，然后在65°C、0.08MPa下减压浓缩至原体积的60%，加 入蜂胶提取物，在8000rpm下离心10min，最后收集沉淀物将沉淀物置于-30°C、50Pa的条件 下冷冻干燥15h，得到硒化多糖免疫增强剂。
[0035] 其中，蜂胶提取物是通过二氧化碳超临界萃取制备而成的，具体步骤为:将蜂胶原 料冷冻粉粹后，用超临界二氧化碳萃取，萃取塔压力为25MPa，萃取温度为75°C，萃取时间 2h，夹带剂为萃取塔进料重量的25 %的体积浓度为95 %的乙醇溶液，分离塔压力15MPa，分 离温度5°C，从分离塔出料得到蜂胶提取物。
[0036] 硒化多糖的制备方法如下:将多糖溶于醋酸溶液中得到A液，将亚硒酸钠溶于醋酸 溶液得到B液，将A液与B液混合均匀后用醋酸溶液调节pH至3.2，在75 °C下搅拌反应8h，反应 液降至室温后进行透析至用抗坏血酸检测无红色为止;然后浓缩、冷冻干燥得到硒化多糖。 多糖与醋酸溶液的固液比为Ig: 40mL，亚硒酸钠与醋酸溶液的固液比为Ig: 12mL，醋酸溶液 的质量浓度为8 %。
[0037] 所述油茶籽柏改性提取物的制备方法如下:取榨油后的油茶籽柏，研磨成粉，按液 固比20mL/g将油茶籽柏添加到浓度为80wt %的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至 微波提取器中进行加热提取，提取温度为70°C，提取时间为4min，微波功率为1000W;提取后 得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积〇. 04倍的30wt %双氧水 溶液，在60 °C下加热20min，然后向溶液中添加溶液质量0.6 %壳聚糖，在室温下静置20h，离 心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽柏提取物;将油茶籽柏提取物溶于酸 性溶液中配得浓度为6wt%、pH为4的油茶籽柏提取物酸性溶液，在4h内向油茶籽柏提取物 酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽柏提取物0.6倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为80°C; 反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽柏改性提取物。
[0038]黄秋葵提取物的制备方法为:取黄秋葵80 °C烘箱干燥，干燥至恒重后粉碎，称取相 应所需的量，并按Ig: 45mL的物料比，加双蒸水回流提取5次，过滤;合并滤液、减压浓缩，并 采用浓缩后10倍质量的90%乙醇静置过夜，得沉淀物;3次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗 涤，并采用真空冷冻干燥技术得到黄秋葵提取物。
[0039] 将实施例1-3制备的硒化多糖免疫增强剂进行小鼠免疫增强实验，具体实验如下： 试验小鼠管理 选用6-8周龄雄性BALB/c小鼠，购入后实验室适应性饲养三天，自由摄食饮水，饲养室 温度为23 土 1°C，然后开始正式实验。
[0040] 小鼠分组及给药 选用50只6-8周龄雄性BALB/c小鼠，适应性饲养三天后正式开始实验。试验分为4个处 理组，每组10只。空白对照组、硒多糖(实施例1-3制备的)+环磷酰胺组 表1、动物分组及给药
Compared with normal control group，a:P<0·01;compared with CPA group,b：P <0.05 从表1可以看出，CPA免疫活性试验观察发现模型小鼠脾/体比例与正常组相比下降较 多，并且达到极明显状态；当注射CPA+实施例1-3制备的硒化多糖免疫增强剂后，脾/体比例 显著提高，说明硒化多糖对环磷酰胺复制的免疫低下小鼠脾脏的发育有显著的恢复作用。
[0041] 模型小鼠胸/体比例下降，说明胸腺器官明显萎缩，免疫功能显著下降，经过CPA+ 实施例1-3制备的硒化多糖免疫增强剂灌胃后，胸/体比例提高，促进了免疫低下小鼠胸腺 的生长发育，增强免疫能力。
[0042]表3、硒化多糖免疫增强剂对免疫低下小鼠 NK细胞活性的影响
compared with CPA group,a:P<0.01b：P<0.05 NK细胞没有特异性抗原受体，也无需抗体参加和抗原预先致敏，因此在机体早起病毒 感染的免疫防御过程中和早期非特异性杀伤突变肿瘤细胞的免疫监视过程中有重要作用， 采用LDH法测定脾脏NK细胞活性，结果如表3所示。
[0043] 环磷酰胺复制的免疫低下小鼠，NK细胞活性显著低于正常小鼠的水平，经过CPA+ 实施例1-3制备的硒化多糖免疫增强剂灌胃后NK细胞活性明显提高，因此本发明制备的硒 化多糖免疫增强剂对免疫低下小鼠 NK细胞活性的提高预示着能显著激活NK细胞，以增强免 疫效果。
[0044]以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的 限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
【主权项】
1. 一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，所述硒化多糖免疫增强剂由以下重量份的 物质制成:硒化多糖120-150份、黄秋葵提取物15-20份、油茶籽柏改性提取物20-35份与蜂 胶提取物10-30份。2. 根据权利要求1所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，蜂胶提取物是通过二 氧化碳超临界萃取制备而成的，具体步骤为:将蜂胶原料冷冻粉粹后，用超临界二氧化碳萃 取，萃取塔压力为20-25MPa，萃取温度为65-75°C，萃取时间l_2h，夹带剂为萃取塔进料重量 的20-25 %的体积浓度为95 %的乙醇溶液，分离塔压力10-15MPa，分离温度55-65°C，从分离 塔出料得到蜂胶提取物。3. 根据权利要求1所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，硒化多糖的制备方法 如下:将多糖溶于醋酸溶液中得到A液，将亚硒酸钠溶于醋酸溶液得到B液，将A液与B液混合 均匀后用醋酸溶液调节pH至3.1-3.5,在70-85Γ下搅拌反应6-10h，反应液降至室温后进行 透析至用抗坏血酸检测无红色为止;然后浓缩、冷冻干燥得到硒化多糖。4. 根据权利要求3所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，多糖与醋酸溶液的固 液比为lg: 35-45mL，亚硒酸钠与醋酸溶液的固液比为lg: 10-15mL，醋酸溶液的质量浓度为 5-12% 〇5. 根据权利要求1所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，所述油茶籽柏改性提 取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽柏，研磨成粉，按液固比16_20mL/g将油茶籽柏添 加到浓度为70-80wt %的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加 热提取，提取温度为60-70°(：，提取时间为2-41^11，微波功率为800-10001 ;提取后得到粗提 液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积〇. 02-0.04倍的30wt %双氧水溶 液，在50-60 °C下加热10_20min，然后向溶液中添加溶液质量0.4-0.6 %壳聚糖，在室温下静 置10-20h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽柏提取物;将油茶籽柏 提取物溶于酸性溶液中配得浓度为4_6wt%、pH为3-4的油茶籽柏提取物酸性溶液，在2-4h 内向油茶籽柏提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽柏提取物〇. 4-0.6倍的亚硒酸钠进 行反应，反应温度为60-80°C;反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽柏改性提取物。6. 根据权利要求1所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，黄秋葵提取物的制备 方法为：取黄秋葵70-80°C烘箱干燥，干燥至恒重后粉碎，称取相应所需的量，并按lg: 30-45mL的物料比，加双蒸水回流提取1-5次，过滤;合并滤液、减压浓缩，并采用浓缩后10倍质 量的90%乙醇静置过夜，得沉淀物;2-3次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗涤，并采用真空冷 冻干燥技术得到黄秋葵提取物。7. 根据权利要求1或2或3或5或6所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，多糖为 岩藻多糖、莱茵衣藻多糖或海地瓜多糖中的一种。8. 根据权利要求1或2或3或5或6所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，硒化多 糖免疫增强剂的制备方法为：将硒化多糖溶解在10倍质量的去离子水中，超声震荡30-60min后加入黄秋葵提取物与油茶籽柏改性提取物升温至100-130 °C后保持75-90min，冷却 至室温后透析12-24h，然后在50-65°C、0.06-0.08MPa下减压浓缩至原体积的60%，加入蜂 胶提取物，在6000-8000rpm下离心10min，最后收集沉淀物将沉淀物置于-30°C、50Pa的条件 下冷冻干燥12_15h，得到硒化多糖免疫增强剂。9. 根据权利要求8所述的一种硒化多糖免疫增强剂，其特征在于，超声震荡的频率为
【文档编号】A61P39/06GK106074868SQ201610569610
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月15日
【发明人】相兴伟, 郑斌, 闻正顺, 杨会成, 洪瑶, 顾丽霞, 廖妙飞, 周宇芳
【申请人】浙江省海洋开发研究院