一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法，包括以下步骤：（1）将磷脂溶于有机溶剂中，再加入氧化苦参碱混匀，加热反应制成氧化苦参碱磷脂复合物；（2）氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料的质量比为1:0.1?0.3:1?2:1，分别粉碎，过10?24目筛；（3）采用等量递增法将氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料进行混合，加入95%的乙醇溶液制软材，过筛，干燥装入肠溶胶囊，得到氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊。该方法制备的胶囊，在肠内缓慢释放药物，可降低药物的毒副作用，在体内达到持续稳定的血药浓度，获得良好的治疗效果。
【专利说明】
一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的 制备方法。
【背景技术】
[0002] 氧化苦参碱又名苦参素，系从豆科属植物苦参（Sophora flavescens Ait.)或平 科植物广豆根(Sophora subprostrata Chun et T .Chen)中分离出来的生物碱。溶于水，氯 仿，乙醇，难溶于乙醚，甲醚，石油醚。
[0003] 氧化苦参碱有抗乙型肝炎病毒作用，可降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏HBsAg 和HBcAg的含量，且对两者作用一致，无选择性作用，氧化苦参碱是一种较强的免疫抑制剂， 可以抑制多种炎性因子的释放，有明确的抗炎作用，对IL-2诱导的LAK细胞杀瘤活性亦有较 强抑制作用。
[0004] 由于氧化苦参碱在体内吸收差、生物利用度低，限制其在临床的应用。磷脂复合物 是一种新型载药系统，是药物和磷脂分子通过电荷迀移作用而形成的较为稳定的化合物或 络合物，可是生物有效性显著改善。与氧化苦参碱相比，其磷脂复合物的生物利用度显著提 高。磷脂广泛存在于自然界中且无不良反应，氧化苦参碱磷脂复合物的研发，改善了原来 药物自身的一些弱点，使药物在低剂量下发挥作用，增加了用药的安全性。
[0005] 氧化苦参碱形成磷脂复合物后脂溶性增加，在胃肠道中的吸收增加，消除缓慢，生 物利用度提高，从而减少给药剂量和次数。磷脂复合物局部用药时，药物可以较为缓慢的从 复合物中释放出来，可减轻药物的不良反应，延长作用时间。
[0006]
【发明内容】
[0007] 为解决上述问题，本发明提供一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方 法，该方法制备的胶囊，在肠内缓慢释放药物，可降低药物的毒副作用，在体内达到持续稳 定的血药浓度，获得良好的治疗效果。
[0008] 本发明是通过以下技术方案实现的： 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法，包括以下步骤： (1) 将磷脂溶于有机溶剂中，浓度为5-35mg/ml，再加入氧化苦参碱混匀，氧化苦参碱与 磷脂的质量比为1:1-3，加热反应至溶液澄清，过滤得滤液，干燥，制成氧化苦参碱磷脂复合 物； (2) 氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料质量比为1:0.1-0.3:1-2: 1，分别粉碎，过10-24目筛； (3 )采用等量递增法将氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂、缓释材料进行混 合，加入95%乙醇溶液制软材，过筛，置40 °C干燥2h后，装入肠溶胶囊，每粒装0.32-0.38g，得 到氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊。
[0009]上述方法中步骤(2 )中的中药组合物的制备方法为： (1) 将原料姜黄块、枸杞、甘草根粉碎成粗粉混合，加入占其总重8倍的65vol%乙醇，在 78-82Γ下回流提取2次，每次90min，过滤，得滤液和滤渣，合并两次滤液；中国药典规定的 粗粉粉末，指能全部通过二号筛，但混有能通过四号筛不超过40 %的粉末； (2) 滤渣加入其质量10倍的纯净水，在50-80 °C下提取30min，过滤得滤液； (3) 将步骤(2)与步骤(1)的滤液合并，过滤干燥制成粉状的中药组合物;其中姜黄块、 枸杞与甘草根的质量比为1:2-5:1-3。
[0010] 优选地，步骤（1)中所述的加热反应的温度为20-40°C，干燥的温度为30_50°C，时 间为6-8小时。
[0011] 优选地，步骤(2)中所述吸湿剂为蔗糖与磷酸氢钙配比时，质量比为1:1-1.5;所述 吸湿剂为葡萄糖与淀粉配比时，质量比为1:1-2。
[0012] 优选地，步骤(2)中缓释材料选自乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和邻苯二甲酸乙 基纤维素中的两种或三种。
[0013] 优选地，步骤(2)中缓释材料为乙基纤维素与羟丙基甲基纤维素配比时，质量比为 3:1-2;所述缓释材为乙基纤维素与邻苯二甲酸乙基纤维素配比时，质量比为1-2:1;所述缓 释材羟丙基甲基纤维素与邻苯二甲酸乙基纤维素配比时，质量比为1.5:1-2。
[0014] 上述所述的方法，步骤(1)中所述有机溶剂为无水乙醇、四氢呋喃和丙酮中的一种 或多种，磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺 的一种或多种。
[0015] 本发明的有益效果： 1.本发明采用特定的缓释材料和吸湿剂制备缓释胶囊，制成的肠溶缓释颗粒粒径均 匀，释药稳定，在胃酸中不释药，在肠道和肝脏中缓慢持续释放药物，具有靶向释药的特性， 可降低药物的毒副作用，减少服药次数，在体内达到持续稳定的效果，提高了患者的依从 性，同时该肠溶缓释胶囊由千百粒粒径均匀的颗粒组成，个别颗粒的破损不会导致整个胶 囊的释放，安全、血药浓度平稳，有效提高了临床疗效。
[0016] 2本发明制备的肠溶缓释胶囊性能稳定，肠粘附性强，达到肠内定位释放，克服了 药物缓释制剂易出现的突释现象。本发明采用的各种环糊精可与药物生成包接物以及其具 有的良好的抗氧化作用使在小肠的偏碱的环境中稳定化。本发明采用的材料安全无毒副作 用、具有良好的生物相容性、生物可降解性、成膜性能好等特点。
[0017] 3.本发明加入姜黄块、枸杞、甘草根提取出来的有效成分，尤其是姜黄块提出的姜 黄素、枸杞提出的枸杞多糖、甘草根提出的甘草甜素与氧化苦参碱磷脂复合物复配使用，对 乙肝的治疗及并发症的防治具有更加优异的效果。
【附图说明】
[0018] 图1为氧化苦参碱、磷脂、实施例1制成的氧化苦参碱磷脂复合物与氧化苦参碱磷 脂物理混合物的紫外光谱图。
[0019] 图2为氧化苦参碱、磷脂、实施例1制成的氧化苦参碱磷脂复合物与氧化苦参碱磷 脂物理混合物红外光谱图，氧化苦参碱磷脂混合物和复合物的红外光谱对比图。
[0020] 图3为氧化苦参碱、磷脂、实施例1制成的氧化苦参碱磷脂复合物与氧化苦参碱磷 脂物理混合物的X-粉末衍射图。
[0021]图4为空白组小鼠肝脏病理形态学变化。
[0022]图5为模型组小鼠肝脏病理形态学变化。
[0023]图6为苦参素组小鼠肝脏病理形态学变化。
[0024]图7为实施例1氧化苦参碱磷脂复合物组小鼠肝脏病理形态学变化。
[0025]图8为对比例1氧化苦参碱磷脂复合物组小鼠肝脏病理形态学变化。
【具体实施方式】 [0026] 实施例1 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法，包括以下步骤： (1)将磷脂酰乙醇胺溶于四氢呋喃中，浓度为5mg/ml，再加入氧化苦参碱混匀，氧化苦 参碱与磷脂的质量比为1:1，20°C加热反应至溶液澄清，过滤得滤液，40°C干燥滤液7小时， 制成氧化苦参碱磷脂复合物。
[0027] (2)将原料姜黄块、枸杞、甘草根粉碎成粗粉混合，加入占其总重8倍的65vol%乙 醇，在78 °C下回流提取2次，每次90min，过滤，得滤液和滤渣，合并两次滤液;滤渣加入其质 量10倍的纯净水，在50 °C下提取30min，过滤得滤液;将滤液合并，过滤干燥成粉状的中药组 合物。其中姜黄块、枸杞与甘草根的质量比为1:2:1。
[0028]中国药典规定的粗粉粉末，指能全部通过二号筛，但混有能通过四号筛不超过 40%的粉末。
[0029] (3)氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料的比为I: :0.1:1:1， 粉碎，过10目筛;所述吸湿剂为蔗糖与磷酸氢钙配比时，质量比为1:1，缓释材料为乙基纤维 素与羟丙基甲基纤维素配比时，质量比为3:2。
[0030] (4)采用等量递增法将氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料进 行混合，加入95%乙醇溶液制软材，制成的软材手握成团，轻压即散，过筛，置40°C干燥2h后， 粉碎，装入肠溶胶囊，每粒装0.32-0.38g，得到氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊。
[0031] 图1为紫外光谱图。
[0032] 1-1:氧化苦参碱紫外光谱图；1-2:磷脂紫外光谱图；1-3:氧化苦参碱磷脂复合物 紫外光谱图；1-4:氧化苦参碱磷脂物理混合物紫外光谱图。
[0033] 图2为红外光谱图。
[0034] 2-1:氧化苦参碱红外光谱图；2-2:磷脂红外光谱图；2-3:氧化苦参碱磷脂混合物 红外光谱图；2-4:氧化苦参碱磷脂复合物红外光谱图；2-5:氧化苦参碱磷脂混合物和复合 物的红外光谱对比图。
[0035] 图3为X-粉末衍射图。
[0036] 3-1:氧化苦参碱X-粉末衍射图；3-2:磷脂X-粉末衍射图；3-3:氧化苦参碱磷脂混 合物X-粉末衍射图；3-4:氧化苦参碱磷脂复合物X-粉末衍射图。
[0037] 实施例2 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法，包括以下步骤： (1)将二棕榈酰磷脂酰胆碱溶于四氢呋喃中，浓度为5mg/ml，再加入氧化苦参碱混匀， 氧化苦参碱与磷脂的质量比为1:3,40°C加热反应至溶液澄清，过滤，50°C干燥滤液6小时， 制成氧化苦参碱磷脂复合物。
[0038] (2)将原料姜黄块、枸杞、甘草根粉碎成粗粉混合，加入占其总重8倍的65vol%乙 醇，在80°C下回流提取2次，每次90min，过滤，得滤液和滤渣，合并两次滤液;滤渣加入其质 量10倍的纯净水，在80 °C下提取30min，过滤得滤液;将滤液合并，过滤干燥成粉状的中药组 合物。其中姜黄块、枸杞与甘草根的质量比为1:5:3。
[0039] (3)氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料的比为1::0.3:1:1， 粉碎，过20目筛;所述吸湿剂为葡萄糖与淀粉配比时，质量比为1:1，缓释材料为乙基纤维素 与邻苯二甲酸乙基纤维素配比时，质量比为2:1。
[0040] (4)采用等量递增法将氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料进 行混合，加入95%乙醇溶液制软材，制成的软材手握成团，轻压即散，过筛，置40°C干燥2h后， 粉碎，装入肠溶胶囊，每粒装0.32-0.38g，得到氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊。
[0041 ] 实施例3 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法，包括以下步骤： (1)将二棕榈酰磷脂酰胆碱溶于四氢呋喃中，浓度为35mg/ml，再加入氧化苦参碱混匀， 氧化苦参碱与磷脂的质量比为1:2，30 °C加热反应至溶液澄清，过滤，30 °C干燥滤液8小时， 制成氧化苦参碱磷脂复合物。
[0042] (2)将原料姜黄块、枸杞、甘草根粉碎成粗粉混合，加入占其总重8倍的65vol%乙 醇，在82 °C下回流提取2次，每次90min，过滤，得滤液和滤渣，合并两次滤液;滤渣加入其质 量10倍的纯净水，在70 °C下提取30min，过滤得滤液;将滤液合并，过滤干燥成粉状的中药组 合物。其中姜黄块、枸杞与甘草根的质量比为1:3:2。
[0043] (3)氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料的比为1::0.2:1:1， 粉碎，过24目筛;所述吸湿剂为葡萄糖与淀粉配比时，质量比为1:1.5，缓释材料为羟丙基甲 基纤维素与邻苯二甲酸乙基纤维素配比时，质量比为1.5:1。
[0044] (4)采用等量递增法将氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料进 行混合，加入95%乙醇溶液制软材，过筛，置40 °C干燥2h后，粉碎，装入肠溶胶囊，每粒装 0.32-0.38g，得到氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊。
[0045] 对比例1 将苦参素与大豆软磷脂按重量比1:1的量加入四氢呋喃溶液中，苦参素浓度20mg/ml， 70°C加热搅拌2小时至溶液澄清，回收四氢呋喃，剩余沉淀为苦参素磷脂复合物，低温减压 干燥，粉碎，过筛，加入辅料复合物重量18.75%的糊精和6.25%的微粉硅胶，装入胶囊。
[0046] 1.氧化苦参碱磷脂复合物缓释肠溶胶囊体外释放度的考察 取实施例1-3的供试品各6粒，采用升降式崩解仪，主要结构为一能升降的金属支架与 下端镶有筛网的吊篮，并附有挡板。按上述装置与方法，先在盐酸溶液(9-1000)中不加挡 板检查2小时，每粒的囊壳均不得有裂缝或崩解现象，将吊篮取出，用少量水洗涤后，再按上 述方法，改在人工肠液中进行检查，1小时内全部崩解。
[0047] 2.氧化苦参碱磷脂复合物缓释肠溶胶囊对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的影响 健康昆明小鼠60只，于实验室喂养3天后随机分组，分别设正常对照组、CCl 4肝损伤模 型组、氧化苦参碱组(78mg/kg)和实施例1制成的氧化苦参碱磷脂复合物组(78 mg/kg)、对 比例1制成的氧化苦参碱磷脂复合物组即对比例1组(39mg/ml)，共5组，每组小鼠12只。各组 均灌胃给药，每天给药早晚2次，正常对照组和模型组给同体积生理盐水溶液。给药第7天， 除正常对照组ip200 ml/kg橄榄油外，其余各组小鼠均ip0.1%CCl4橄榄油200ml/kg-次。全 部动物于中毒后36h，摘取小鼠眼球收集血样，分离血清，以全自动生化测定仪检测血清中 丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平，并开胸切取肝脏标本作病理切 片检查。
[0048]与正常对照组比较，P〈0.01，与模型组相比较，#P〈0.05。
[0049] 与正常对照组相比，模型组小鼠肝脏出现水肿等病理学变化，肝脏指数和肾脏指 数水平显著升高(P〈〇.01)。氧化苦参碱磷脂复合物组的肝脏指数与肾脏指数与模型组相比 均具有显著性差异(P〈〇.05)。说明氧化苦参碱磷脂复合物对CCL 4所致小鼠急性肝损伤具有 明显的治疗作用。
[0050] 表2为各组小鼠血清中咎丙、咎草含量比较（n=12'x土s)
与正常对照组比较，P〈0.01，与模型组相比较，# P〈〇.〇5，## P〈0.01。
[0051] 结果表明，模型组小鼠血清ALT、AST明显高于正常对照组(P〈0.01);氧化苦参碱组 的血清AST明显低于模型组(P〈0.05)，与模型组相比较具有显著性差异;实施例1的氧化苦 参碱磷脂复合物组及对比例组均能显著降低血清中ALT、AST水平，说明氧化苦参碱磷脂 复合物组和对比例组对CCl 4所致小鼠急性肝损伤具有明显的治疗作用，并且实施例1的氧 化苦参碱磷脂复合物组对肝脏损伤的治疗作用比对比例组要明显。
[0052] 肝组织病理学检查 各组小鼠均取相同部位肝组织，置于中性福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，切片，HE染 色后于光镜下观察肝脏的形态变化。
[0053] 正常对照组小鼠肝脏病理形态学变化如附图4;图中可以看出：4-1肝索肝窦清 晰，无变性坏死;4-2肝索肝窦清晰，无变性坏死；4-3肝索肝窦清晰，无变性坏死;4-4肝索 肝窦清晰，无变性坏死;4-5肝索肝窦清晰，无变性坏死。
[0054]模型组小鼠肝脏病理形态学变化如附图5;图中可以看出：5_1肝细胞局灶性坏死； 5-2有灶性炎，灶性坏死;5-3灶性炎和灶性坏死;5-4灶性炎和灶性坏死;5-5灶性坏死和 灶性炎。
[0055] 氧化苦参碱组小鼠肝脏病理形态学变化如附图6;图中可以看出：6_1肝细胞颗粒 变性和灶性坏死;6-2局灶性坏死，灶性炎，部分区域颗粒变性；6-3肝细胞颗粒变性和灶 性坏死;6-4肝细胞颗粒变性和灶性坏死，灶性炎;6-5肝细胞颗粒变性和灶性坏死，灶性炎。
[0056] 实施例1的氧化苦参碱磷脂复合物组小鼠肝脏病理形态学变化如附图7;图中可以 看出：7-1灶性炎和灶性坏死，轻度颗粒变性;7-2灶性炎，少量灶性坏死;7-3灶性炎，肝细胞 轻度变性;7-4肝细胞坏死、变性;7-5肝细胞灶性坏死和炎症，无变性。
[0057] 对比例1氧化苦参碱磷脂复合物组小鼠肝脏病理形态学变化如附图8;图中可以看 出：8-1灶性炎，无坏死;8-2灶性炎和灶性坏死;8-3大面积坏死，肝细胞变性;8-4灶性炎和 灶性坏死，肝细胞变性;8-5轻微灶性炎，轻微灶性坏死，部分肝细胞变性。
[0058]正常对照组:肝细胞结构正常完好，肝索肝窦结构清晰，无变性坏死。模型组:肝细 胞局灶性坏死，肝组织结构有破坏。氧化苦参碱组:肝细胞部分区域颗粒变性，局灶性坏死， 灶性炎，与模型组比较有明显差别。实施例1的氧化苦参碱磷脂复合物组:肝细胞灶性炎和 局灶性坏死，与模型组比较有显著性差别。对比例1组:肝细胞灶性炎，灶性坏死，部分肝细 胞变性。
[0059] 3.释放度的测定 取实施例1组制成的肠溶缓释胶囊及对比例1组制成的胶囊，喂食小鼠，按78mg/kg给 药，定位监测胃和肠内药物量，测定药物在小鼠体内的释放度。
[0060] 实施例1组制成的胶囊在小鼠体内胃内无释放，对胃无刺激，在肠内缓慢释放，持 续作用;对比例1组制成的胶囊在胃内释放，容易对胃产生刺激，造成不良反应，在肠内迅速 释放，使肠内血药浓度迅速升高，导致靶部位有效药物量的减少，极大减小胶囊的药效。
[0061] 4.临床试验： 乙肝患者病例共治疗20例，年龄40-70岁。将上述患者化疗后，分为2组，每组10例，在 常规保肝降酶，促肝细胞生长治疗的基础上，服用胶囊，每次两粒，每日三次，温水送服，三 个月一疗程，治疗六个月。
[0062]疗效判定标准： 有效:症状消失，TbiL，ALT下降50%;显效:症状基本上消失，TbiL，ALT下降或下降25-50%;无效:症状无好转或加重。
[0063] 经过治疗，发现： 对于实施例1制备的胶囊，有效6例，显效4例； 对于对比例1制备的胶囊，有效2例，显效6例，无效2例； 由此可见，实施例1制备的胶囊的疗效出乎意料地高于对比例1，且在用药期间实施例1 组无不良反应，对比例2组出现轻微腹泻的症状。
【主权项】
1. 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 将磷脂溶于有机溶剂中，浓度为5-35mg/ml，再加入氧化苦参碱混匀，氧化苦参碱与 磷脂的质量比为1:1-3，加热反应至溶液澄清，过滤得滤液，干燥，制成氧化苦参碱磷脂复合 物； (2) 氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂与缓释材料质量比为1:0.1-0.3:1-2: 1，分别粉碎，过10-24目筛； (3) 采用等量递增法将氧化苦参碱磷脂复合物、中药组合物、吸湿剂、缓释材料进行混 合，加入95%乙醇溶液制软材，过筛，置40 °C干燥2h后，装入肠溶胶囊，每粒装0.32-0.38g，得 到氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊。2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2 )中的中药组合物的制备方法为： (1)将原料姜黄块、枸杞、甘草根粉碎成粗粉混合，加入占其总重8倍的65vol%乙醇，在 78-82 °C下回流提取2次，每次90min，过滤，得滤液和滤渣，合并两次滤液； (2 )滤渣加入其质量10倍的纯净水，在50-80 °C下提取30min，过滤得滤液； (3)将步骤(2)与步骤(1)的滤液合并，过滤干燥制成粉状的中药组合物； 其中姜黄块、枸杞与甘草根的质量比为1:2-5:1-3。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的加热反应的温度为20-40°C，干燥的温度为30-50°C，时间为6-8小时。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述吸湿剂为蔗糖与磷酸氢 钙配比时，质量比为1:1-1.5;所述吸湿剂为葡萄糖与淀粉配比时，质量比为1:1-2。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中缓释材料选自乙基纤维素、羟 丙基甲基纤维素和邻苯二甲酸乙基纤维素中的两种或三种。6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中缓释材料为乙基纤维素与羟 丙基甲基纤维素配比时，质量比为3:1-2;所述缓释材为乙基纤维素与邻苯二甲酸乙基纤维 素配比时，质量比为1-2:1;所述缓释材羟丙基甲基纤维素与邻苯二甲酸乙基纤维素配比 时，质量比为1.5:1-2。7. 如权利要求1-6之一所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中所述有机溶剂为无水 乙醇、四氢呋喃和丙酮中的一种或多种，磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂 酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺的一种或多种。
【文档编号】A61K31/4375GK106075277SQ201610411903
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月13日 公开号201610411903.8, CN 106075277 A, CN 106075277A, CN 201610411903, CN-A-106075277, CN106075277 A, CN106075277A, CN201610411903, CN201610411903.8
【发明人】陈新梅, 郭辉, 段章好
【申请人】山东中医药大学