感觉改善剂的制作方法

专利名称：感觉改善剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有改善末梢感觉钝化的效果的感觉改善剂、以及配合有该感觉改善 剂的感觉改善用饮食品、饲料或化妆品，所述感觉改善剂以磷脂、或具有鞘氨醇的磷脂和/ 或其衍生物、尤其是鞘磷脂为有效成分。
背景技术：
近年来，伴随着高龄化，骨质疏松症、痴呆症等随着年龄增长而引发的疾病的增加 已构成社会问题。因此，为了预防或改善此种随着年龄的增长而引发的疾病，开发了各种药 品。然而，由于药品通常需要考虑副作用，因而，近年来，作出了通过纠正饮食生活或摄取特 定的食品成分来预防或改善随着年龄的增长而引发的疾病的尝试。例如，针对骨质疏松症， 已知有通过摄取牛乳中所含的碱性蛋白质来预防或改善该疾病的方法(专利文献1)。此 外，已知有以牛乳中较多地含有的磷脂即鞘磷脂为有效成分的记忆障碍预防治疗剂，其可 预防或改善阿耳茨海默病型记忆障碍(专利文献2)。作为随着年龄增长的症状之一，可列举末梢处感觉的钝化，该末梢处感觉的钝化， 不仅因年龄增长而引发，还伴随糖尿病等疾病而发生。末梢处感觉的钝化，例如，在与热的 物体接触时，不能准确地感觉到热，会发生下述问题烧伤等的危险性增高、因痛觉的钝化 而使得受伤的发现延迟。近年来，为了避免这样的危险性，进行了改善因年龄增长、疾病而 引起的末梢处感觉钝化的研究。例如，据报道，具有增加外源性神经酰胺或内源性神经酰胺 的生物合成效果的酶即鞘磷脂酶或磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C，可促进成纤维细胞株3T3 细胞介导的神经模型细胞P-12细胞的分化(非专利文献1)。促进神经模型细胞的分化意 味着具有末梢处感觉钝化的改善效果。但是，由于上述的神经酰胺或酶并非食品成分，在其 使用时需要对安全性进行研究。此外，由于上述实验为直接涂布于皮肤时的结果，因此关于 经口摄取时的效果还不清楚。在此种状况下，需要更安全、且通过日常摄取或对皮肤涂布而 具有改善末梢处感觉钝化的效果的制剂。尽管在乳中鞘磷脂含量多达磷脂中的20 30重量％，但对其功能的研究仅停留 在细胞水平，对在生物体中的生理学功能的见解较少。因此，到目前为止还未确认到其作为 营养素的成分之一的有效性。有关鞘磷脂的应用，已知有消炎镇痛外用剂、脂质的消化吸收 功能改善剂、肠道运动功能不全性疾病治疗剂(专利文献3 5)等，对于预防和改善末梢 处感觉的钝化的效果一点也不清楚。专利文献1 日本特开平8-151331号公报专利文献2 日本特开2003-146883号公报专利文献3 日本特开平5-186330号公报专利文献4 日本特开平11-269074号公报专利文献5 日本特开2003-252765号公报非专利文献1:中畑则道、大久保聪子皮膚保護作用&有t 3七，S K^生理作 用発現機構(二関寸3研究；^ Zj卜口夕一研究報告，第10号，200
发明内容
发明要解决的问题本发明的课题在于，提供安全、且通过日常摄取或对皮肤涂布而显示出改善末梢 处感觉钝化的效果的感觉改善剂。此外，本发明的课题还在于，提供通过经口摄取或对皮肤 涂布而显示出改善末梢处感觉钝化的效果的感觉改善用饮食品、饲料、或化妆品。用于解决问题的方案鉴于这些问题，本发明人等对安全且对感觉的钝化显示出优异的改善效果的成分 进行了深入的探索，结果发现通过经口摄取磷脂、或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、 尤其是鞘磷脂，或将其直接涂布于皮肤上，可以改善感觉、尤其是末梢处感觉的钝化。因此， 通过将该磷脂或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂作为有效成分来使用， 从而完成了感觉改善剂。此外，还发现在饮食品或饲料中配合该感觉改善剂，可以制成感 觉改善用饮食品、饲料或化妆品，从而完成了本发明。发明的效果根据本发明，可以提供以磷脂或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷 脂为有效成分的感觉改善剂、配合有磷脂的感觉改善用饮食品、饲料或化妆品。本发明的感 觉改善剂显示出改善末梢处感觉的钝化的效果。
具体实施例方式本发明的特征在于，以磷脂、或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂 为有效成分。磷脂可使用化学合成的磷脂，也可使用天然来源的磷脂，优选大豆、蛋黄等食 品来源的磷脂，特别优选乳来源的磷脂。作为乳来源的磷脂，可使用由牛、山羊、绵羊、人等 哺乳类的乳制得的磷脂。此外，也可由奶油乳清(butter serum)、酪乳等乳原料制得，该乳 原料由上述哺乳类的乳制得。它们未必需要纯化为磷脂，也可以使用全部固体成分中含有 30重量％以上的磷脂那样的、含乳来源磷脂的组合物。例如，本发明的含乳来源磷脂的组合 物，可通过对乳或乳原料进行孔径0. 1 2. 0 μ m的微滤(microfiltration，MF)膜处理或 截留分子量5 500kDa的超滤(UF)膜处理而获得。此外，本发明的含乳来源磷脂的组合 物，可通过在乳或乳原料中加酸调节PH值至4. 0 5. 0，使酪蛋白形成沉淀并将其除去后， 进行孔径0. 1 2. 0 μ m的MF膜处理或截留分子量5 500kDa的UF膜处理而获得。实际 上，作为由牛乳制得的含乳来源磷脂的组合物，已经上市的有磷脂含量为30重量％以上的 高浓度且廉价的产品，还可以使用此种原料。此外，作为其他的磷脂，上市的还有大豆卵磷 脂、蛋黄卵磷脂等。具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物，尤其是鞘磷脂可以使用纯化后的磷脂和/或 其衍生物，也可以以含有鞘磷脂的组合物形式来使用。在动物的脑或乳脂肪中含有较多鞘 磷脂，本发明的实施上，较佳为乳来源的鞘磷脂。作为乳来源的鞘磷脂，可以将生乳或乳清 蛋白浓缩物(WPC)等作为原料来进行制备。作为由生乳(raw milk)或WPC等获得含有鞘 磷脂的组合物的方法，可列举出用醚或丙酮提取的方法、使用将奶油加温熔解而获得的奶 油凝乳(buttercurd)或含奶油乳清的水溶性级分的方法等公知的方法。此外，通过透析、 硫酸铵分级、凝胶过滤、等电点沉淀、离子交换色谱、溶剂分级、超滤(UF)、微滤(MF)等方法对所得的含有鞘磷脂的组合物进行纯化，从而可以提高鞘磷脂的纯度。这些鞘磷脂或含有 鞘磷脂的组合物，可以适当采取液体、粉末、片剂等形态，并可直接经口投与。本发明的感觉改善剂，可将上述乳来源磷脂或含乳来源磷脂的组合物、大豆卵磷 脂、蛋黄卵磷脂等直接用作感觉改善剂，也可混合磷脂外的糖类、脂质、蛋白质、维生素类、 矿物质类、调味料(flavor)等其他药品、饮食品和饲料中通常使用的原料等、进而按照常 规方法制成粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、饮料剂等制剂。此外，作为涂布剂，可以乳液、乳 膏、洗剂、袋装剂(pack)等通常的涂布形态来使用。这些涂布剂按照常规方法来制造，在涂 布剂的制造过程中适当配合本发明的有效成分即磷脂、含乳来源磷脂的组合物等含磷脂的 组合物即可，也可作为化妆品来使用。此外，不仅使用磷脂，还可以同时使用其他显示出感 觉改善效果的成分，例如神经酰胺、鞘磷脂酶等。作为本发明的感觉改善剂的有效量，由于在后述对小鼠的试验中，每Ikg体重经 口摄取IOOmg以上、优选250mg以上含磷脂的组合物可以改善末梢处的感觉，因此通常成人 每人每天摄取IOOmg以上、优选250mg以上含磷脂的组合物，可期待改善感觉的钝化、尤其 是末梢处感觉的钝化，因此，只要能够确保该必要量即可。含乳来源磷脂的组合物由于含有 30%以上的乳来源磷脂，因此，通过摄取约30mg以上乳来源磷脂，可期待感觉改善效果。此 外，在对皮肤进行涂布时，作为乳来源磷脂量，以皮肤涂布剂的总量为基准，优选为0. 01 50重量％，更优选为0. 1 20重量％。作为鞘磷脂或含有鞘磷脂的组合物的形态下的有效量，从后述对人的试验的结果 来看，通常成人每人每天摄取4mg以上、优选8mg以上具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、 尤其是鞘磷脂，可期待改善感觉、尤其是末梢处感觉的钝化，因此只要能够确保该必要量即 可。此外，在对皮肤进行涂布时，没有特别的限制，以涂布剂中含有0. 001 30重量％，优 选0. 1 10重量％的具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂为佳。作为本发明的感觉改善用饮食品，只要在通常的饮食品、例如酸奶、乳饮料、威化 饼、甜食等中配合以磷脂或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂为有效成分 的感觉改善剂即可。有关这些感觉改善用饮食品，为了使成人每人每天摄取IOOmg以上的含磷脂的组 合物，虽根据饮食品的形态而不同，但优选每IOOg饮食品配合1 3000mg的含磷脂的组合 物。为了使成人每人每天摄取4mg以上的具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷 脂，虽根据饮食品的形态而不同，但优选每IOOg饮食品配合0. 5 2000mg的具有鞘氨醇的 磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂。此外，本发明的感觉改善用饲料，只要在通常的饲料、 例如家畜用饲料、宠物食品等中配合磷脂或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘 磷脂即可。例如有关这些饲料，在配合含乳来源磷脂的组合物时，为了使每天摄取30mg以 上的磷脂，优选每IOOg饲料配合1 5000mg的含乳来源磷脂的组合物。此外，为了使每天 摄取2mg以上的具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂，优选每IOOg饲料配合 0. 5 2000mg的具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂。本发明中，对于配合含磷脂的组合物或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其 是鞘磷脂的方法没有特别的限制，例如，在溶液中添加、配合时，将该组合物悬浮或溶解于 去离子水中，搅拌混合后，调制成药品、饮食品、饲料的形态来使用。作为搅拌混合的条件， 只要能均勻混合该组合物即可，还可使用超级分散器(ultra disperser)、TK均质混合器等进行搅拌混合。此外，为了使该组合物的溶液易于使用于药品、饮食品或饲料中，根据需要， 可用RO膜等浓缩、或冷冻干燥后来使用。本发明中，可进行通常制造药品、饮食品、饲料时 使用的杀菌处理，在粉末状时还可进行干热杀菌。因此，可以制造含有本发明的含磷脂的组 合物或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂的液状、凝胶状、粉末状、颗粒状 等各种形态的药品、饮食品或饲料。以下，示出实施例和试验例对本发明进行更详细的说明，它们仅仅是列举的例子， 本发明不受这些实施例和试验例的任何限制。实施例1(含磷脂的组合物的制造1)调制25%奶油乳清粉(Corman公司制，SM2)溶液，添加5N盐酸调节pH值至4. 5。 将该溶液在50°C下静置1小时，使酪蛋白沉淀。使用压滤机(filter press)将该沉淀除 去，对所得的水溶液用孔径1. 0 μ m的MF膜(S CT公司制)进行处理，获得浓缩液级分。对 该浓缩液级分进行冷冻干燥处理，得到含磷脂的组合物。该含乳来源磷脂的组合物相对于 全部固体成分含有脂质53%、磷脂31%、蛋白质24%、糖质15%、灰分8%，可直接作为本发 明的感觉改善剂使用。实施例2(含有磷脂组合物的制造2)调制20%酪乳粉(雪印乳业公司制)溶液，添加2N盐酸调节pH值至4. 5。将该 溶液在45°C下静置30分钟，使酪蛋白沉淀。使用澄清器将该沉淀除去后，对所得的上清用 孔径0. 1 μ m的MF膜(SCT公司制)进行处理，获得浓缩液级分。对该浓缩液级分进行冷冻 干燥处理，获得含乳来源磷脂的组合物。该含乳来源磷脂的组合物相对于固体成分含有脂 质62 %、磷脂38 %、蛋白质15 %、糖质18 %、灰分5 %，可直接作为本发明的感觉改善剂使 用。实施例3(鞘磷脂的制造1)使蛋白酶作用于乳清蛋白浓缩物(WPC)的10%水溶液，将所得的反应液用氯 仿-甲醇(2 1)溶液萃取后，浓缩，进一步用丙酮萃取，获得磷脂级分。将所得的磷脂级 分供于硅胶色谱，用氯仿_甲醇溶液进行分步提取，将所得的提取液进行冷冻干燥，制成纯 化鞘磷脂。通过薄层色谱对纯化的制备品进行分级，用Dittmer试剂显色后，使用光密度计 进行定量。其结果为鞘磷脂含有率为95. 2%。这样得到的鞘磷脂可直接作为感觉改善剂来 利用。实施例4(鞘磷脂的制造2)将鞘磷脂含量为25%的鞘磷脂原料(Fonterra公司、'J >脂質700)用丙酮提取 而获得磷脂级分。将所得的磷脂级分供于硅胶色谱，用己烷-乙醇溶液进行分步提取，将所 得的提取液进行冷冻干燥，制成纯化鞘磷脂。通过薄层色谱对纯化的制备品进行分级，用 Dittmer试剂显色后，使用光密度计进行定量。其结果为鞘磷脂含有率为78. 2%。这样得 到的鞘磷脂可直接作为感觉改善剂来利用。[试验例1]
(细胞分化促进活性的确认_含乳来源磷脂的组合物)在以200 μ g/L的浓度添加了实施例1和实施例2的含有乳来源脂质的组合物的 状态下，将已知存在于皮肤中的成纤维细胞的细胞株即3T3细胞培养2天(实施例1 :A组， 实施例2 :B组)。此外，作为对照，将3T3细胞在不添加实施例1和实施例2的含乳来源磷 脂的组合物的状态下培养2天(C组)。使用它们的培养上清培养神经的模型细胞即PC-12 细胞，观察PC-12细胞的形态分化。其结果为A组和B组的培养上清均促使PC-12细胞强 烈分化。此外，将该实验重复数次，在光学显微镜下观察分化的比例，其结果为A组、B组均 可见95%以上的细胞出现分化。另一方面，C组的培养上清并未使PC-12细胞分化，在重复 数次实验时光学显微镜下的观察中，完全未确认到分化。由此可知，实施例1和实施例2中 所得的含乳来源磷脂的组合物促进神经的模型细胞即PC-12细胞的分化。[试验例2](细胞分化促进活性的确认_鞘磷脂)在以200 μ g/L的浓度添加了实施例3的鞘磷脂的状态下，将已知存在于皮肤中的 成纤维细胞的细胞株即3T3细胞培养2天(A组)。此外，作为对照，将3T3细胞在不添加鞘 磷脂的状态下培养2天(B组)。使用它们的培养上清培养神经的模型细胞即PC-12细胞， 观察PC-12细胞的形态分化。其结果为A组的培养上清促使PC-12细胞强烈分化。此外， 将该实验重复数次，在光学显微镜下观察分化的比例，其结果为A组中94%以上的细胞出 现分化。另一方面，B组的培养上清并未使PC-12细胞分化，在重复数次实验时光学显微镜 下的观察中，完全未确认到分化。由此可知，实施例3中所得的鞘磷脂促进神经的模型细胞 即PC-12细胞的分化。[试验例3](通过动物实验来确认感觉改善效果)通过Woolfe、MacDonald等开发出的针对热刺激的行为学研究法即热板试验来评 价对热刺激的感觉改善效果。使用3组24周龄的无毛小鼠(HR-I)，每组10只。用探子以 小鼠体重每Ikg分别1天1次经口投与0mg、100mg、250mg的实施例1中所得的含乳来源磷 脂的组合物，饲育4周。饲料投与结束时将小鼠放置于54°C的热板上，测定直至小鼠从热 板上抬足、站起、跳跃等逃避行为的时间。将热刺激的最大强度设定为30秒，此时的值作为 30秒。其结果如表1所示。[表 1]_实施例1的含有乳来源磷脂的组合物逃避行为阳性反应时间_Omg28. 2 士 0.14 秒、IOOmg23. 8 士0.19 秒、250mg20.1 士 0.32 秒、_如表1所示，通过摄取IOOmg实施例1中所得的含乳来源磷脂的组合物，逃避行为 阳性反应时间出现缩短的倾向，250mg时逃避行为阳性反应时间缩短。由此可知，通过摄取 含乳来源磷脂的组合物，可预防和改善感觉、尤其是末梢处感觉的钝化。
7
[试验例4](经口摄取时的感觉改善效果的确认_含乳来源磷脂的组合物)将感到手的感觉钝化的健康老年人(平均年龄75士3岁)分成7组，每组10人。分 别为不摄取含磷脂的组合物的组(A组)、摄取IOOmg实施例1的含乳来源磷脂的组合物的 组(B组)、摄取250mg的组(C组)、摄取40mg市售的乳来源磷脂浓缩物(PL-75，Lacprodan) 的组(D组)、摄取IOOmg的组(E组)、摄取40mg市售的大豆来源磷脂(LP-20P，日清才J1J 才株式会社制)的组(F组)、摄取IOOmg的组(G组)，让他们摄取6周。在摄取前和6周 的摄取结束后使用浅感觉计7 AY夕才 > 一夕一、P夕一” 口 ^公司制)，将上臂内侧 的痛觉作为基准，根据使用方法以正常、低下I III共计4个等级对手掌和足底脚心的痛 觉进行了测定。此外，6周的摄取结束后，对各个老年人就手的感觉的改善实施了问卷调查。 其结果如表2、3所示。(测定方法)用5种粗细不同的针和5个支点位置对痛觉进行了评价。首先，将最细的1号针 在上臂内侧转动，确认受试者正常的痛觉程度。接着，依次改变带有夹持器的支点的位置并用1号针在手掌和足底转动，找出感 到与最初感知的痛觉同程度的痛感的支点的位置。(评价方法)7 > y 7才^ 一夕一是按如下方式设计的当在上臂内侧转动1号针(支点50g) 时，在手掌用2号针(50g)能产生相同的痛感。并根据使用方法，如下所述进行了评价。此 外，对痛感的评价进行计分，算出平均值。若用2号针(50g)产生相同的痛感，则为正常(0分)若用1号针(50g)产生相同的痛感，则为低下1(1分)若用1号针(60g)产生相同的痛感，则为低下II (2分)若用1号针(70g)产生相同的痛感，则为低下III (3分)[表 2-1]
丰的感觉测定(摄取前)
正常低下I低下II低下III平均值A组0人2人3人5人2.3B组0人1人5人4人2.3C组0人1人5人4人2.3D组0人1人4人5人2.4E组0人1人5人4人2.3F组0人2人3人5人2.3G组0人1人4人5人2.4
8
权利要求
一种感觉改善剂，其以磷脂为有效成分。
2. —种感觉改善剂，其以乳来源磷脂为有效成分。
3.根据权利要求2所述的感觉改善剂，其为由乳或乳原料获得的组合物，其使用全部 固体成分中含有10重量％以上的磷脂的组合物(含乳来源磷脂的组合物)作为乳来源磷 脂。
4.根据权利要求2所述的感觉改善剂，其中，含乳来源磷脂的组合物为通过如下处理 获得的组合物，即，对乳或乳原料进行孔径0. 1 2. 0 μ m的微滤(MF)膜处理或截留分子量 5 500kDa的超滤(UF)膜处理。
5.根据权利要求2所述的感觉改善剂，其中，含乳来源磷脂的组合物为通过如下处理 获得的组合物，即，向乳或乳原料中加酸调节PH值至4. 0 5. 0，使酪蛋白形成沉淀并将其 除去后，进行孔径0. 1 2. 0 μ m的MF膜处理或截留分子量5 500kDa的UF膜处理。
6.根据权利要求3 5中任一项所述的感觉改善剂，其中，乳或乳原料为奶油乳清或酪乳。
7.—种感觉改善剂，其以具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物为有效成分。
8.根据权利要求7所述的感觉改善剂，其中，具有鞘氨醇的磷脂为鞘磷脂。
9.配合有权利要求1 8中任一项所述的感觉改善剂的感觉改善用饮食品、饲料或化妆品。
10.一种以含乳来源磷脂的组合物为有效成分的感觉改善剂的制造方法，其中，通过对 乳或乳原料进行孔径0. 1 2. 0 μ m的微滤(MF)膜处理或截留分子量5 500kDa的超滤 (UF)膜处理而获得。
11.根据权利要求10所述的以含乳来源磷脂的组合物为有效成分的感觉改善剂的制 造方法，其中，在所述MF膜处理或UF膜处理之前，具有如下工序向乳或乳原料中加酸调节 PH值至4. 0 5. 0，使酪蛋白形成沉淀并将其除去。
全文摘要
本发明提供通过经口摄取或对皮肤直接涂布而显示出改善末梢处感觉钝化的效果的感觉改善剂、以及配合有该感觉改善剂的感觉改善用饮食品、饲料或化妆品，所述感觉改善剂以磷脂、或具有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、尤其是鞘磷脂为有效成分。作为磷脂，不仅可以使用化学合成的磷脂，还可以使用天然来源的磷脂，优选使用大豆、蛋黄等食品来源的磷脂，特别优选使用乳来源的磷脂。
文档编号A61Q19/00GK101939010SQ20088011669
公开日2011年1月5日 申请日期2008年11月19日 优先权日2007年11月19日
发明者加藤健, 吉冈俊满, 春田裕子, 渡边达也 申请人:雪印乳业株式会社