份，辛夷13份，熟地6份，金银 花9份，墨旱莲35份，鹿衔草18份，元胡7份，银杏叶15份，钩藤13份;混合均匀，粉碎至50目即 可。
[0036] 实施例5
[0037]按以下重量份称取原料:桂枝40份，紫苏20份，莪术10份，辛夷10份，熟地5份，金银 花10份，墨旱莲30份，鹿衔草20份，元胡5份，银杏叶10份，钩藤16份;混合均匀，粉碎至60目 即可。
[0038] 试验例1:
[0039]在常规的袖珍菇培养基中添加本发明的袖珍菇培养基专用添加剂和不添加的培 养基培养出来的袖珍菇比较结果见表1:
[0040]表1含添加剂与常规培养基培养的袖珍菇比较结果
[0041]
[0042] 试验例2:本发明的添加剂对培养的袖珍菇的抗氧化作用
[0043] 1、材料:A组（向常规袖珍菇培养基添加本发明实施例2,加入量为培养基总量的 5% )、B组（向常规袖珍菇培养基添加本发明实施例4,加入量为培养基总量的5%)和对比例 (常规培养基)分别培养的袖珍菇。
[0044] 2、试验方法：
[0045] (1)袖珍菇粗体物制备提取方法:取A组、B组和对比例分别培养的袖珍菇10g，分别 粉碎，按料液比1:25加水提取，提取三次，合并提取液，浓缩至一定体积，加3倍95 %的乙醇 沉淀，取上清液浓缩、干燥，得袖珍菇粗提物备用。
[0046] (2)还原力的测定:样品将铁氰化钾(K3Fe(CN)6)还原成亚铁氰化钾(K 4Fe(CN)6)， 亚铁氰化钾再与Fe3+作用，生成亚铁氰化铁(普鲁士蓝），以在700nm波长处检测普鲁士蓝的 吸光度表示还原力的大小，吸光度越高，样品的还原力就越强，抗氧化性越强。在700nm波长 处，分别测定浓度为5mg/ml的A组、B组和对比例分别培养的袖珍菇粗提取物的吸光值。 [0047] (3)清除超氧阴离子实验:在产生超氧阴离子自由基(0 2_ ·)的反应体系中，分别加 入浓度为5mg/ml的A组、B组和对比例分别培养的袖珍菇粗提取物，测定它们清除率。
[0048] (4)清除羟基自由基的实验:FeS04与H20 2反应产生· 0H，在体系内加入水杨酸，可 捕捉羟基自由基并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收，当反应体系中存在· 0H自 由基清除剂时，此氧化过程受到抑制，吸光度值则降低。在FeS04与H202反应体系中，分别加 入浓度为30mg/ml的A组、B组和对比例分别培养的袖珍菇粗提取物，测定清除率。
[0049] (5)模拟胃液pH条件下的N02舊除反应作用:清除亚硝酸盐是有效防止N-亚硝基化 合物致癌的途径之一。在模拟体系中加入分别加入浓度为14mg/ml的A组、B组和对比例分别 培养的袖珍菇粗提取物，测定清除率。
[0050] (6)DPPH法测定袖珍菇抗氧化活性:DPPH ·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，广 泛用于抗氧化评价体系中。在体系中，分别加入浓度为30mg/ml的A组、B组和对比例分别培 养的袖珍菇粗提取物，测定清除率。
[0051 ] 3、试验结果：
[0052] 表2不同培养基培养的袖珍菇粗提取物的还原能力
[0053]
[0054]表2结果表明，A组、B组和对比例培养的袖珍菇粗提取物具有抗氧化性，A组和B组 抗氧化性优于对比例。
[0055] 表3不同培养基培养的袖珍菇粗提取物清除超氧阴离子的能力
[0056]
[0057]表3表明，A组、B组和对比例培养的袖珍菇粗提取物都具有清除超氧阴离子的能 力，A组和B组清除能力优于对比例。
[0058] 表4不同培养基培养的袖珍菇粗提取物清除羟基自由基的能力
[0059]
[0060]表4表明，A组、B组和对比例培养的袖珍菇粗提取物都具有清除羟基自由基的能 力，A组和B组清除能力优于对比例。
[0061 ]表5不同培养基培养的袖珍菇粗提取物对从^清除作用
[0062]
[0063] 表5表明，A组、B组和对比例培养的袖珍菇粗提取物对ΝΟ2^都有清除作用，A组和B组 清除能力优于对比例。
[0064]表6不同培养基培养的袖珍菇粗提取物对DPPH清除效果 [0065]
[0066] 表6表明，A组、B组和对比例培养的袖珍菇粗提取物对DPPH都有清除效果，A组和B 组清除效果优于对比例。
[0067] 综合上述氧化反应体系试验结果，可知A组、B组和对比例培养的袖珍菇具有抗氧 化性，而A组和B组优于对比例，说明添加本发明添加剂的袖珍菇培养基能够增强袖珍菇的 抗氧化功效。
[0068] 试验例3:本发明培养的袖珍菇抗癌作用
[0069] 1、实验动物:健康昆明种小鼠，体重（22 ± 3)g，雌雄各半，由广西医科大学实验动 物中心提供。
[0070] 2、肿瘤细胞株:小鼠肉瘤S18Q腹水型瘤株，由广西肿瘤防治研究所提供。
[0071] 3、袖珍菇药剂制备：
[0072] 分别取A组（向常规袖珍菇培养基添加本发明实施例2,加入量为培养基总量的 5 % )、对比例（常规培养基)培养出的袖珍菇10g，置于1000mL的玻璃烧杯中，加水500mL，浸 泡lh后，置于火上煎熬，先武火煮沸后改为文火，再煎熬60min后熄火，将药液3500r/min离 心5min，取出上清药液。然后再向沉渣中加入300mL水，用同样方法再煎熬两次。将3次上清 药液混合后置于文火上，浓缩定容成200mL，制成含生药5 %的原药液，将该药液密封，置于 冰箱冷藏保存备用。
[0073] 3、实验方法：
[0074] 取(22±3)g小鼠60只，前肢皮下分别接种经昆明系小鼠传代第7天的小鼠肉瘤S180 瘤株细胞(经台盼兰染色活细胞数大于95%)的腹腔稀释液0.2mL，其浓度5X105/mL。将注 射瘤细胞后的小鼠随机分为3组，每组10只，雌雄各半:A组，同侧同位注射袖珍菇汤剂稀释 液0.25mL，终剂量为每只小鼠注射袖珍菇成分0.5mg，连续注10次;对比例组，同侧同位注射 袖珍菇汤剂稀释液〇. 25mL，终剂量为每只小鼠注射袖珍菇成分0.5mg，连续注10次;对照组， 同侧同位注射生理盐水〇.5mL。观察小鼠的生活状态、肿瘤生长状况及小鼠的生存情况。 [0075] 4、试验结果：
[0076] 自实验之日起，随时观察每只小鼠的生活状况。对照组小鼠1周开始出现肉眼可见 肿块（约〇. 〇 5 cm X 0.0 5 cm )，而A组、对比例组则未见肉眼可见的肿块。A组、对比例组小鼠全 部存活。继续观察至实验第16天起，对照组小鼠开始逐渐死亡，至36天对照组全部死亡。而A 组、对比例组小鼠则全部存活，且均未出现肉眼可见肿块。继续观察至第96天，对比例组小 鼠出现肉眼可见肿块，继续观察至实验第106天起，对比例组小鼠开始逐渐死亡，至126天对 比例组小鼠全部死亡，A组小鼠全部存活，未出现肉眼可见肿块，继续观察至160天仍全部存 活。本实验共重复4次，结果基本相同。小鼠的生存情况见表7。
[0077] 表7不同培养基培养的袖珍菇抗小鼠 S18Q腹水型肉瘤的实验观察结果
[0078]
[0079] 袖珍菇抗癌试验结果表明，A组、对比例培养的袖珍菇对S18Q腹水型肉瘤细胞有抑 制作用，而A组优于对比例，说明添加本发明添加剂的袖珍菇培养基能够增强袖珍菇的抗癌 作用。
【主权项】
1. 一种袖珍菇培养基专用添加剂，其特征在于，由以下重量份的原料制成：桂枝20~40 份，紫苏10~20份，莪术5~10份，辛夷10~20份，熟地5~10份，金银花5~10份，墨旱莲30~ 50份，鹿衔草10~20份，元胡5~11份，银杏叶10~30份，钩藤6~16份。2. 根据权利要求1所述的袖珍菇培养基专用添加剂，其特征在于，由以下重量份的原料 制成:桂枝30份，紫苏15份，莪术8份，辛夷15份，熟地7份，金银花8份，墨旱莲40份，鹿衔草15 份，元胡8份，银杏叶20份，钩藤11份。
【专利摘要】本发明涉及食用菌培养基添加技术领域，特别涉及一种袖珍菇培养基专用添加剂,由以下重量份的原料制成：桂枝20～40份，紫苏10～20份，莪术5～10份，辛夷10～20份，熟地5～10份，金银花5～10份，墨旱莲30～50份，鹿衔草10～20份，元胡5～11份，银杏叶10～30份，钩藤6～16份。本发明的袖珍菇培养基专用添加剂应用在袖珍菇培养基中时，在促进袖珍菇生长的同时还能够提高袖珍菇的营养和风味，提高产量，显著减少袖珍菇重金属含量，同时能够提高袖珍菇的抗氧化性和抗癌性。
【IPC分类】C05G3/00
【公开号】CN105565990
【申请号】CN201511025130
【发明人】李荣轩
【申请人】广西扬桂生物科技有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月31日