专利名称：胰岛素的纯化方法
技术领域：
本发明是关于胰岛素的纯化方法，更具体地说是胰岛素的结晶方法，用于制备高纯度胰岛素。
本发明的技术方案是其纯化方法为胰岛素盐析物→钠盐结晶→重结晶→收集干燥得胰岛素结晶粉；钠盐结晶的方法为胰岛素盐析物用0.1N稀盐酸溶解成20-30％的溶解液(W/V)；用10N氢氧化钠溶液将该溶解液调PH7左右，加入0.5-2/10量的30％浓度的氯化钠溶液，搅拌均匀；再用5N氢氧化钠溶液补调至PH7.5-8.5，室温搅拌结晶8-10小时。再静置，使结晶完全沉下后，吸去上清液，用离心或过滤的方法收集结晶；用浓度2-10％的冷氯化钠溶液洗结晶1-2次，得胰岛素钠盐湿结晶。重结晶的方法为将胰岛素钠盐湿结晶按26-30％析干，按0.5-2％浓度计算出总体积；按每克干品加入固体柠檬酸1-1.5克，再加水溶解成总体积的约1/3量；冷室静置10-15小时后过滤得澄清滤液；向滤液中按1-1.5克干品加入浓度为20％醋酸锌溶液1-2ml，冷丙酮16-20ml，再用冷水稀释至总体积后，用4N氨水调PH6.0-6.5，慢速搅拌5小时以上，转入冷室静置使结晶完全沉下。收集干燥方法为吸去上清液用离心方法收集结晶，再用冷蒸馏水水洗1-2次，然后丙酮、乙醚脱水、用五氧化二磷做干燥剂真空干燥，即得胰岛素结晶粉。
术语“胰岛素盐析物”是本技术领域专业人员所熟知的。
所述冷室是指摄氏温度5-10℃。
本发明的优点是克服了单纯锌盐结晶或单纯钠盐结晶的缺点，使胰岛素结晶收率和纯度提高，效价收率提高10-15％。
实施例1将1Kg胰岛素盐析物用0.1N稀盐酸溶解，使成体积5立升，用10当量氢氧化钠调PH8.2，加入浓度30％的氯化钠溶液0.5立升，搅拌均匀，再用5N氢氧化钠补调至PH8.2，室温搅拌8小时后静置，待结晶完全沉下后离心收集结晶，用3％氯化钠溶液洗涤结晶1次，得钠盐湿结晶。
重结晶按26％析干，按干重0.5/10计算出总体积，按每克干品加入固体柠檬酸1克，加水溶解至总体积的1/3量，冷室静置约10小时后，过滤，向滤液中按1.0克干品加入20％的醋酸锌1毫升，冷丙酮20毫升，用5-10℃冷水稀释至总体积，用4N氨水调PH6.1-6.3，慢速搅拌5小时，冷室静置10小时至结晶完全沉下。收集干燥，得胰岛素结晶粉。效价收率提高10-15％。
实施例2将1Kg胰岛素盐析物用0.1N稀盐酸溶解，使成体积3立升，用10当量氢氧化钠调PH7.8，加入浓度30％的氯化钠溶液0.15立升，搅拌均匀，再用5N氢氧化钠补调至PH7.8，室温搅拌8小时后静置，待结晶完全沉下后离心收集结晶，用3％氯化钠溶液洗涤结晶1次，得胰岛素钠盐湿结晶。
重结晶按30％析干，按干重2/10计算出总体积，按每克干品加入固体柠檬酸1.2克，加水溶解至总体积的1/3量，静置约15小时后，过滤，向滤液中按1克干品加入20％的醋酸锌1.5毫升，冷丙酮20毫升，用5-10℃冷水稀释至总体积，用4N氨水调PH6.1-6.3，慢速搅拌5小时，冷室静置10小时至结晶完全。收集干燥，得胰岛素结晶粉，效价收率提高10-15％。
权利要求
1.一种胰岛素的纯化方法，其特征是该方法是胰岛素盐析物→钠盐结晶→重结晶→收集干燥得胰岛素结晶粉；所述钠盐结晶的方法是(a)将胰岛素盐析物，用0.1N稀盐酸溶解成20-30％的溶解液(W/V)；(b)用氢氧化钠溶液对溶解液调PH7.5-8.5，室温搅拌结晶8-10小时；(c)静置，使结晶完全沉下后用离心或过滤收集结晶；(d)用2-10％的冷氯化钠溶液洗结晶1-2次，得胰岛素钠盐湿结晶。所述重结晶的方法是(a)将胰岛素钠盐湿结晶按26-30％析干，按0.5-2/10浓度计算出总体积，按每克干品加入固体柠檬酸1-1.5克，再加水溶解成总体积的1/3量；(b)冷室静置10-15小时后过滤，滤液需澄清；(c)向滤液中按1克干品加入浓度为20％醋酸锌溶液1-2ml，冷丙酮16-20ml，再用冷水稀释至总体积后，用4N氨水调PH6.0-6.5，慢速搅拌5小时以上使结晶完全，再冷室静置至结晶完全沉下。所述收集干燥方法是吸去上清液，用离心方法收集结晶，再用冷蒸馏水水洗1-2次，然后丙酮、乙醚脱水、以五氧化二磷做干燥剂真空干燥即得胰岛素结晶粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是钠盐结晶的(b)步骤是用10N氢氧化钠溶液，将溶解液调PH7左右，再按体积加入0.5-2/10量的30％的氯化钠溶液搅拌均匀，再用5N氢氧化钠溶液补调PH7.5-8.5。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是冷室温度为摄氏5-10℃。
全文摘要
本发明公开了一种胰岛素的纯化方法，本方法是胰岛素盐析物→钠盐结晶→锌盐重结晶→收集干燥得胰岛素结晶粉。本发明和单纯钠盐结晶、单纯锌盐结晶相比，具有生产周期短、效价收率高的优点。
文档编号C07K1/14GK1390854SQ0211318
公开日2003年1月15日 申请日期2002年6月15日 优先权日2002年6月15日
发明者罗桂荣, 彭淑华, 陈慧 申请人:江苏万邦生化医药股份有限公司