专利名称：一种冬青苷Ⅱ的分离制备方法
技术领域：
本发明涉及一种冬青苷II的分离制备方法，特别是一种采用微波辅助提取、膜分离和柱层析技术分离制备冬青苷II的方法。
背景技术：
枸骨叶为冬青科冬青属植物枸骨的干燥叶，主产于河南、湖北、湖南、福建等地。枸骨叶具有清热养阴、补肝益肾、祛风湿等功效，用于肺痨咳嗽、劳伤失血等症，其有效成分以三萜及其苷类物质为主，此外还含有黄酮类、腺苷及糖脂等成分，具有抗生育、免疫抑制、心血管系统保护等活性。冬青苷II为枸骨叶的主要皂苷成分，对脑垂体后叶素诱发的大鼠心肌缺血有一定的保护作用，可明显降低心肌收缩力。目前，冬青苷II的提取工艺尚未见相关专利报道。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种冬青苷II的分离制备方法，该方法易于放大生产。本发明的目的是这样来实现的
一种冬青苷II的分离制备方法，其特征在于包括以下几个步骤
1)将干燥枸骨叶粉碎，加8-15倍量醇水溶液，微波提取0.5-池，提取2-3次，过滤得到提取液；
2)提取液回收乙醇，加入超滤膜超滤，再加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液；
3)浓缩液通过大孔树脂吸附，乙醇溶液梯度洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品；
4)粗品采用高效工业色谱柱分离得到高纯度的冬青苷II产品。所述醇水溶液为乙醇浓度为50-80%，微波提取功率为300-1000W。所述大孔树脂可选LAS-7、AB-8、S-8中的一种，水一醇梯度洗脱为4-8BV水 —3-5BV10-20%乙醇溶液一5-8BV65%乙醇溶液。所述超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200 的中空复合膜，过滤压力0. 08-0. 4MPa。所述工业色谱柱填料为C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液 (ρΗ3· 8)，体积比为 42:58。综上所述，本发明存在以下优点 1、微波辅助提取速度快。2、大孔树脂和膜分离联用，除杂效果好、能耗低。3、采用高效工业色谱柱分离制备，可以获得纯度在95%以上的冬青苷II，且单针分离时间短，非常适合大批量的制备，同时制备溶剂可回收利用，可实现批量制备。4、工艺简单易于操作，所得产品含量高。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例1
将干燥枸骨叶(冬青苷II含量为1%左右)粉碎，取3kg，加8倍量60%乙醇水溶液，微波提取0. 5h,微波提取功率为300W，提取2次，过滤得到提取液，提取液回收乙醇，加入膜分离仪，其中超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200的中空复合膜，收集浓缩液，浓缩液通过AB-8型大孔树脂吸附，流速控制在3L/h，吸附结束后依次用5BV水一3BV10%乙醇溶液一8BV65%乙醇溶液洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品；
粗品采用高效工业色谱柱分离，工业色谱柱填料为10-20微米的C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液(PH3. 8)，体积比为42:58，紫外检测波长为213nm，流速为 120ml/min,进样，收集洗脱组分，合并高含量冬青苷II的组分，旋转蒸发浓缩，真空干燥得冬青苷II产品16. 9g，含量95. 8%。实施例2:
将干燥枸骨叶(冬青苷II含量为1%左右)粉碎，取3kg，加15倍量50%乙醇水溶液，微波提取lh，微波提取功率为500W，提取1次，过滤得到提取液，提取液回收乙醇，加入膜分离仪，其中超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200的中空复合膜，收集浓缩液，浓缩液通过LAS-7型大孔树脂吸附，流速控制在2L/h，吸附结束后依次用5BV水一5BV15%乙醇溶液一5BV65%乙醇溶液洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品；
粗品采用高效工业色谱柱分离，工业色谱柱填料为10-20微米的C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液(PH3.8)，体积比为42:58，紫外检测波长为213nm，流速为 300ml/min,进样，收集洗脱组分，合并高含量冬青苷II的组分，旋转蒸发浓缩，真空干燥得冬青苷II产品18. 8g，含量98%。实施例3:
将干燥枸骨叶(冬青苷II含量为1%左右)粉碎，取3kg，加10倍量70%乙醇水溶液，微波提取lh，微波提取功率为700W，提取2次，过滤得到提取液，提取液回收乙醇，加入膜分离仪，其中超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200的中空复合膜，收集浓缩液，浓缩液通过S-8型大孔树脂吸附，流速控制在2L/h，吸附结束后依次用8BV水一3BV20%乙醇溶液一8BV65%乙醇溶液洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品；
粗品采用高效工业色谱柱分离，工业色谱柱填料为10-20微米的C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液(PH3. 8)，体积比为42:58，紫外检测波长为213nm，流速为 300ml/min,进样，收集洗脱组分，合并高含量冬青苷II的组分，旋转蒸发浓缩，真空干燥得冬青苷II产品14. 2g，含量98. 5%。实施例4:
将干燥枸骨叶(冬青苷II含量为1%左右)粉碎，取^g，加10倍量70%乙醇水溶液，微波提取0. 5h,微波提取功率为800W，提取2次，过滤得到提取液，提取液回收乙醇，加入膜分离仪，其中超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200的中空复合膜，收集浓缩液，浓缩液通过LAS-7型大孔树脂吸附，流速控制在2L/h，吸附结束后依次用5BV水一3BV15%乙醇溶液一6BV65%乙醇溶液洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品； 粗品采用高效工业色谱柱分离，工业色谱柱填料为10-20微米的C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液(PH3. 8)，体积比为42:58，紫外检测波长为213nm，流速为 500ml/min,进样，收集洗脱组分，合并高含量冬青苷II的组分，旋转蒸发浓缩，真空干燥得冬青苷II产品28. 5g，含量98%。
实施例5:
将干燥枸骨叶(冬青苷II含量为1%左右)粉碎，取^g，加15倍量80%乙醇水溶液，微波提取池，微波提取功率为1000W，提取1次，过滤得到提取液，提取液回收乙醇，加入膜分离仪，其中超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200的中空复合膜，收集浓缩液，浓缩液通过LAS-7型大孔树脂吸附，流速控制在2L/h，吸附结束后依次用4BV水一5BV20%乙醇溶液一8BV65%乙醇溶液洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品；
粗品采用高效工业色谱柱分离，工业色谱柱填料为10-20微米的C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液(PH3. 8)，体积比为42:58，紫外检测波长为213nm，流速为 400ml/min,进样，收集洗脱组分，合并高含量冬青苷II的组分，旋转蒸发浓缩，真空干燥得冬青苷II产品40. 8g，含量96. 9%。
权利要求
1.一种冬青苷II的分离制备方法，其特征在于包括以下几个步骤1)将干燥枸骨叶粉碎，加8-15倍量醇水溶液，微波提取0.5-池，提取2-3次，过滤得到提取液；2)提取液回收乙醇，加入超滤膜超滤，再加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液；3)浓缩液通过大孔树脂吸附，乙醇溶液梯度洗脱，收集冬青苷II流分，得到粗品；4)粗品采用高效工业色谱柱分离得到高纯度的冬青苷II产品。
2.根据权利要求1所述分离制备方法，其特征在于步骤1)中所述醇水溶液为乙醇浓度为50-80%，微波提取功率为300-1000W。
3.根据权利要求1所述分离制备方法，其特征在于步骤2)中所述大孔树脂可选LAS-7、 AB-8、S-8中的一种，水一醇梯度洗脱为4-8BV水一3-5BV10-20%乙醇溶液一5_8BV65%乙醇溶液。
4.根据权利要求1所述分离制备方法，其特征在于步骤3)中所述超滤膜为截留分子量3000-6000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量为200的中空复合膜，过滤压力 0. 08-0. 4MPa。
5.根据权利要求1所述分离制备方法，其特征在于步骤4)中所述工业色谱柱填料为 C18硅胶键合相，流动相为乙腈一三氟乙酸水溶液(pH3. 8)，体积比为42:58。
全文摘要
本发明涉及天然药物的分离，具体地说是一种冬青苷Ⅱ的分离制备方法，将枸骨叶粉碎后，加醇水溶液微波提取，提取液回收乙醇，膜分离，再通过大孔树脂吸附，梯度洗脱，得到粗品，采用高效工业色谱柱分离得到高纯度的冬青苷Ⅱ。本发明工艺简单、污染少、产品纯度高、可适合工业化大生产。
文档编号C07J63/00GK102329365SQ20111018751
公开日2012年1月25日 申请日期2011年7月6日 优先权日2011年7月6日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司