专利名称：一种刺叶素的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种刺叶素的提取方法，尤其是一种采用膜分离和柱层析等方法提取分离刺叶素的方法。
背景技术：
刺叶素(Stizophyllin)为留体类物质，又名2 α，3 β，12 β -三羟基孕甾烷-4，7，16-三烯-20-酮，CAS号109237-00-5，分子式C21H2804，分子量344. 45，分子结构如下刺叶素来源于紫葳科(Bignoniaceae)溪岸刺叶Stizophyllum riparium (H.B. K.) Sandw.全植物，具有细胞毒活性，对培养的P388有细胞毒性，其ED5tl为O. 07 μ g/ml。
目前，国内尚未见刺叶素的提取方法相关文献和专利的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种刺叶素的提取方法。该方法生产产品成本低，收率高，便于工业化操作。为了解决上述技术问题，本发明提取技术方案如下
1)提取将溪岸刺叶全植物粉碎20-40目，加75-90%甲醇溶液回流提取2_3次，每次l_2h，合并提取液加活性炭脱色，得脱色液；
2)膜分离上述脱色液通过微滤膜滤过，再通过超滤膜超滤，收集透过液；
3)柱层析透过液浓缩至无醇味，上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩至原体积的1/5-1/10，静置结晶；
4)重结晶上述粗结晶，用石油醚-氯仿重结晶，分离结晶，干燥即得产品。所述步骤I)中活性炭加入量为提取液量的O. 5-0. 8%，脱色时间30_80min。所述步骤2)中超滤膜为截留分子量6000-10000的中空复合膜，压力O. 4-0. 8Mpa。所述步骤3)中石油醚-氯仿-甲醇体积比为(20-25) : (55-60): (9-12)。所述步骤4)中石油醚-氯仿体积比为1:3。综上所述，本发明存在以下优点
1)利用膜分离可以除去大分子物质，提高产品含量；
2)采用高压柱层析，周期短，分离度好。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I :
取溪岸刺叶全植物，粉碎至30目，取10kg，加80L80%甲醇回流提取2h，提取2次，合并得150L提取液，加入1200g活性炭60°C温度下保温脱色80min，将脱色液通过微滤膜滤过，滤液再通过截留分子量为6000的中空超滤膜，在压力O. SMpa超滤，将透过液浓缩至无醇味，上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，体积比为22:57:10，洗脱液减压浓缩至原体积的1/7，静置结晶，得刺叶素粗结晶物4. 3g，含量73% ;粗结晶物用石油醚-氯仿1:3重结晶，滤出结晶物，干燥得刺叶素2. 8g，含量99. 0%。实施例2
取溪岸刺叶全植物，粉碎至40目，取10kg，加60L75%甲醇回流提取lh，提取3次，合并得160L提取液，加入900g活性炭70°C温度下保温脱色40min，将脱色液通过微滤膜滤过，滤液再通过截留分子量为8000的中空超滤膜，在压力O. 5Mpa超滤，将透过液浓缩至无醇 味，上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，体积比为23:58:11，洗脱液减压浓缩至原体积的1/8，静置结晶，得刺叶素粗结晶物4. 3g，含量71% ;粗结晶物用石油醚-氯仿1:3重结晶，滤出结晶物，干燥得刺叶素2. 2g，含量98. 6%。实施例3:
取溪岸刺叶全植物，粉碎至20目，取10kg，加70L90%甲醇回流提取lh，提取3次，合并得190L提取液，加入IlOOg活性炭65°C温度下保温脱色30min，将脱色液通过微滤膜滤过，滤液再通过截留分子量为10000的中空超滤膜，在压力O. 6Mpa超滤，将透过液浓缩至无醇味，上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，体积比为20:55: 9，洗脱液减压浓缩至原体积的1/10，静置结晶，得刺叶素粗结晶物4. 8g，含量75% ;粗结晶物用石油醚-氯仿1:3重结晶，滤出结晶物，干燥得刺叶素2. Og,含量98. 9%。实施例4:
取溪岸刺叶全植物，粉碎至20目，取20kg，加160L80%甲醇回流提取2h，提取2次，合并得280L提取液，加入1400g活性炭60°C温度下保温脱色50min，将脱色液通过微滤膜滤过，滤液再通过截留分子量为6000的中空超滤膜，在压力O. 4Mpa超滤，将透过液浓缩至无醇味，上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，体积比为25:60:12，洗脱液减压浓缩至原体积的1/5，静置结晶，滤过，得刺叶素粗结晶物9. 0g，含量73%;粗结晶物用石油醚-氯仿1:3重结晶，滤出结晶物，干燥得刺叶素4. 9g，含量98. 5%。
权利要求
1.一种刺叶素的提取方法，其特征在于包含以下步骤 1)提取将溪岸刺叶全植物粉碎20-40目，加75-90%甲醇溶液回流提取2_3次，每次l_2h，合并提取液加活性炭脱色，得脱色液； 2)膜分离上述脱色液通过微滤膜滤过，再通过超滤膜超滤，收集透过液； 3)柱层析透过液浓缩至无醇味，上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩至原体积的1/5-1/10，静置结晶； 4)重结晶上述粗结晶，用石油醚-氯仿重结晶，分离结晶，干燥即得产品。
2.如权利要求I所述的提取方法，其特征在于所述步骤I)中活性炭加入量为提取液量的 O. 5-0. 8%，脱色时间 30-80min。
3.如权利要求I所述的提取方法，其特征在于所述步骤2)中超滤膜为截留分子量6000-10000的中空复合膜，压力O. 4-0. 8Mpa。
4.如权利要求I所述的提取方法，其特征在于所述步骤3)中石油醚-氯仿-甲醇体积比为(20-25): (55-60) : (9-12)。
5.如权利要求I所述的提取方法，其特征在于所述步骤4)中石油醚-氯仿体积比为1:3。
全文摘要
本发明涉及一种刺叶素的提取方法，方法是以溪岸刺叶全植物为原料，粉碎，甲醇回流提取2-3次，活性炭脱色，微滤、超滤后浓缩，浓缩液上高压硅胶柱，石油醚-氯仿-甲醇洗脱，洗脱液回收溶剂，静置结晶，石油醚-氯仿重结晶即得刺叶素。该工艺操作简单，周期短。
文档编号C07J13/00GK102827235SQ20121035024
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司