结核分支杆菌蛋白在制备诊断潜伏性肺结核感染的产品中的用途
【专利摘要】本发明提供了结核分枝杆菌蛋白Rv2693c和/或Rv1984c在开发和/或设计具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中的应用。本发明还提供了使用这2种结核分枝杆菌蛋白制备的蛋白质芯片。通过本发明制备的蛋白质芯片，检测潜伏性肺结核感染患者及正常人血清中2个蛋白各自相应的IgM抗体的水平，联合分析这2个蛋白质的相应抗体的检测结果，判断被检人是否为潜伏性肺结核感染，检测结果表明，本发明提供的蛋白质芯片辅助诊断潜伏性肺结核感染的最佳工作点的特异性为80.3%，敏感性为75.6%，均高于现有技术中潜伏性肺结核感染诊断的指标。
【专利说明】结核分支杆菌蛋白在制备诊断潜伏性肺结核感染的产品中的用途
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，具体涉及结核分支杆菌蛋白在制备诊断和/或辅助诊断疾病的产品中的用途。
【背景技术】
[0002]多个世纪以来，结核病持续在全球成为一个不容忽视的公共卫生问题。目前全球已有三分之一的人口携带结核分枝杆菌，仅2010年一年就新增结核病病例880万，死亡145万，平均不到22秒即有一人死于肺结核病，结核病高居传染病死亡人数之首。而我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病患者人数高居全球第二位，受感染人数超过5亿，仅2010年一年就有新发病例90?120万，占据了全球总新增病例的约12%，如不及时采取有效措施，在未来十年内可能有3000万人发病，将会导致严重的公共卫生问题和社会问题，所以从国家战略层面必需尽快实现对肺结核的有效控制。
[0003]科学证据表明，结核感染人体后，在大多数情况下，会受到人体内免疫系统的控制，从而处于一个潜伏感染状态，在任何时候都有可能转化为活动性结核病。考虑到全球结核感染人口，甚至在我国都是一个十分庞大的数字，结合结核病的易传播性和社会危害性，在健康人群中筛查结核潜伏患者就显得尤为重要。已有研究证实潜伏性肺结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的预防性治疗可降低HIV/TB双重感染人群进展为活动性 TB 的风险(Bucher HC,Griffith LE,Guyatt GH, et al:Isoniazid prophylaxisfor tubercu losis in HIV infection:a meta-analysis of randomized controlledtrails [J].AIDS，1999，13:501_508)。但是，目前国内诊断潜伏感染主要依据结核菌素皮试(PPD皮试)的结果，一般认为PH)强阳性或在短期内从阴性转为阳性者是结核病潜伏感染者。然而因为pro皮试无法区分在中国广泛推广的BCG接种产生的免疫应答反应与潜伏感染产生的应答反应。而基于抗原抗体反应的血清学诊断，由于其简便性、快速性，是重要的潜伏性肺结核感染临床辅助性诊断手段。因此，从长远角度看，应致力于发现敏感性和特异性均较好的结核标志物。
[0004]理想的结核诊断标志物应符合以下条件:(1)敏感性高；(2)特异性高；(3)存在于体液，特别是血液中，易于检测。但是目前肺结核分支杆菌血清学诊断所针对的抗原如抗原5、38KD抗原、30/31KD抗原以及抗原60等，均存在阳性检出率低，与其它分支杆菌的交叉免疫性等问题，虽然在疗效监测、提示复发、判断预后和高危人群的普查中具有一定的价值，但目前仍不能用于潜伏性肺结核感染的确诊。为了实现对潜伏性肺结核感染的高灵敏性，高特异性的诊断，急需在分子水平上寻找到更敏感、更特异的潜伏性肺结核感染生物标志物。
【发明内容】
[0005]本发明的一个目的是提供检测血清中抗Rv2693c抗体和/或抗Rvl984c抗体水平的产品在制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中的应用。
[0006]所述的应用中，所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0007]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0008]b)将序列表中的SEQ ID Na.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质；
[0009]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0010]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0011]d)将序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质；
[0012]和/或，所述有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中，包括记载如下内容的说明书:与正常未患有任何疾病的人相比，潜伏性肺结核感染人中，抗Rv2693c抗体水平和抗Rvl984c抗体水平中至少一种显著升高。
[0013]所述抗体为IgM。
[0014]本发明的另一个目的是提供一种用于鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染的标志物组合物，由抗Rv2693c的抗体和抗Rvl984c的抗体组成；
[0015]所述标志物组合物中，各个所述抗体为人离体血清中的抗体；
[0016]所述抗体为IgM。
[0017]所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0018]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0019]b)将序列表中的SEQ ID N0.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质；
[0020]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0021]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0022]d)将序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质。
[0023]本发明的再一个目的是提供血清中的抗Rv2693c的抗体和/或抗Rvl984c的抗体作为标志物在开发、设计和/或制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中的应用；所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0024]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0025]b)将序列表中的SEQ ID Na.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质；
[0026]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0027]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；[0028]d)将序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质；
[0029]所述有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中，包括记载如下内容的说明书:与正常未患有任何疾病的人相比，潜伏性肺结核感染人中，抗Rv2693c抗体水平和抗Rvl984c抗体水平中至少一种显著升高。
[0030]所述抗体为IgM。
[0031]所述任一应用中，所述鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染具体指鉴别、诊断和/或辅助诊断待测人是否患有潜伏性肺结核感染；或筛查和/或辅助筛查待测人群中患有潜伏性肺结核感染的情况。 [0032]本发明的还一个目的是提供一种用于鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染的试剂盒，包括检测芯片，所述检测芯片上连有Rv2693c和Rvl984c蛋白中的至少I种蛋白，每种蛋白单独成立一个检测点；优选的，所述检测芯片上连有Rv2693c和Rvl984c蛋白；
[0033]所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0034]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0035]b)将序列表中的SEQ ID Na.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质；
[0036]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0037]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0038]d)将序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质。
[0039]所述试剂盒中，所述检测芯片是将分别含有Rv2693c和/或Rvl984c蛋白的溶液点样于载体玻片上制成的。
[0040]所述试剂盒中，所述分别含有Rv2693c和/或Rvl984c蛋白的溶液，由溶质和溶剂
组成，所述溶质及其在所述溶液中的浓度为:
[0041]
【权利要求】
1.检测血清中抗Rv2693c抗体和/或抗Rvl984c抗体水平的产品在制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于: 所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)将序列表中的SEQID N0.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中的SEQID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； d)将序列表中的SEQID N0.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID N0.2所不蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质； 和/或，所述有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中，包括记载如下内容的说明书:与正常未患有任何疾病的人相比，潜伏性肺结核感染人中，抗Rv2693c抗体水平和抗Rvl984c抗体水平中至少一种显著升高。
3.一种用于鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染的标志物组合物，由抗Rv2693c的抗体和 抗Rvl984c的抗体组成； 所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)将序列表中的SEQID N0.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中的SEQID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； d)将序列表中的SEQID N0.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质。
4.血清中的抗Rv2693c的抗体和/或抗Rvl984c的抗体作为标志物在开发、设计和/或制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中的应用；所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)将序列表中的SEQID N0.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中的SEQID Na.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； d)将序列表中的SEQID N2.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID N0.2所不蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质； 所述有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中，包括记载如下内容的说明书:与正常未患有任何疾病的人相比，潜伏性肺结核感染人中，抗Rv2693c抗体水平和抗Rvl984c抗体水平中至少一种显著升高。
5.一种用于鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染的试剂盒，包括检测芯片，所述检测芯片上连有Rv2693c和Rvl984c蛋白中的至少I种蛋白，每种蛋白单独成立一个检测点；优选的，所述检测芯片上连有Rv2693c和Rvl984c蛋白； 所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)将序列表中的SEQID N0.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中 的SEQID Ns.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； d)将序列表中的SEQID N0.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白质。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于:所述检测芯片是将分别含有Rv2693c和/或Rvl984c蛋白的溶液点样于载体玻片上制成的。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒还包括说明书，所述说明书记载如下内容: 与正常未患有任何疾病的人相比，潜伏性肺结核感染人中，抗Rv2693c抗体水平和抗Rvl984c抗体水平中至少一种抗体显著升高。
8.根据权利要求5-7任一所述的试剂盒，其特征在于: 所述抗Rv2693c抗体水平和抗Rvl984c抗体水平中至少一种抗体显著升高按照如下方法进行判断:待测样品的检测结果中,抗Rv2693c抗体和/或抗Rvl984c抗体中，至少有I种抗体呈阳性，则判定该待测样品是潜伏性肺结核感染阳性，否则为潜伏性肺结核感染阴性； 所述抗体呈阳性的判断标准为若各个抗体的信噪比值处于如下值之间，则认为是该抗体呈阳性:Rv2693c的抗体的信噪比值处于2.30和2.35之间，包括2.30和2.35 ；Rvl984c的抗体的信噪比值处于2.24和2.38之间，包括2.24和2.38。
9.根据权利要求5-8任一所述的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒还包括配合检测芯片一起使用的试剂，所述试剂包括下述I) -4): 1)pH7.4PBS溶液，其组成为:
10.权利要求5-9任一所述试剂盒在制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查潜伏性肺结核感染用途的产品中的应用。
【文档编号】C07K14/35GK103698511SQ201310607359
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年11月25日 优先权日:2013年11月25日
【发明者】陶生策, 张先恩, 毕利军, 邓教宇, 张治平, 江何伟, 周盈, 谷晶, 郭书娟, 张鸿泰, 王绪德, 王靖方, 侯剑, 周杰, 杨姗姗, 赵斐 申请人:广东体必康生物科技有限公司