一种免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种菌类检测试剂盒，具体的说，涉及一种免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]当前我国在结核病控制方面首先面临的问题是结核病的诊断。肺结核的实验室诊断方法主要有细菌学检查、免疫学检查和分子生物学检查。细菌学检查是目前传染性肺结核诊断的金标准，主要有痰涂片抗酸染色直接找结核分支杆菌和结核分支杆菌培养方法。传统的涂片抗酸染色较为简单、但痰涂片阳性率较低，镜检需要经验，难以区分环境分支杆菌造成的假阳性等不足。
[0003]目前开展的免疫学诊断方法，如T-SPOT，其原理为检测结核杆菌特异性细胞免疫反应功能，通过体外定量检测全血细胞被结核分枝杆菌特异性抗原刺激后释放的γ-干扰素，判断其是否具有针对结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应，可用于结核病的辅助诊断，但受机体免疫状态，以及费用高等因素影响，不易在基层医院开展。近几年兴起的分子生物学检查方法，如PCR法、基因芯片等，基本实现了快速、灵敏、准确地诊断结核的目的，但存在特异性差，易污染以及标准化等问题。
【发明内容】
[0004]针对上述现有技术的不足，本实用新型提供一种免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，克服了难以区分分支杆菌造成的假阳性的不足，并且具有特异、灵敏、无污染的特点，无需昂贵的特殊设备，能够在基层医院推广使用。
[0005]为了实现上述目的，本实用新型提供一种免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，包括盒体和盒盖，所述盒盖连接在盒体上方，盒盖与盒体盖合处设有密封垫，密封垫可以采用海绵垫，所述盒体内设有瓶托，所述瓶托设有凹槽，包括放置载玻片的凹槽、放置盖玻片的凹槽、放置磁铁的凹槽、放置玻璃管的凹槽以及放置试剂瓶的凹槽，并且每一个凹槽下面有一个对应的标明放置物名称的标签。
[0006]所述放置试剂瓶的凹槽为6个，并且每一个试剂瓶中对应盛放有PBS缓冲液、PE标记抗抗酸杆菌抗体、抗IgG Dynabeads免疫磁珠、5 %石碳酸复红溶液、3 %盐酸酒精溶液、亚甲基蓝溶液所述的试剂瓶中装有PBS缓冲液、PE标记抗抗酸杆菌抗体、抗IgG Dynabeads免疫磁珠、5 %石碳酸复红溶液、3 %盐酸酒精溶液、亚甲基蓝溶液。
[0007]为了能够顺利的进行试验，并且考虑到试剂盒控制在较合适的大小方便使用，其中放置载玻片的凹槽、放置盖玻片的凹槽、放置玻璃试管的凹槽容量均为50个，其中5%石碳酸复红溶液、3 %盐酸酒精溶液、亚甲基蓝溶液各100ml，PBS缓冲液500ml，PE标记抗抗酸杆菌抗体为50 μ 1，抗IgG Dynabeads免疫磁珠为250 μ I。
[0008]作为进一步改进，所述凹槽内设置有缓冲装置，使放置物能够较好的固定在凹槽内，在运输过程中不易晃动，使试剂盒在移动过程中不会造成凹槽内放置物易破损情况的发生，所述的缓冲装置可以是海绵垫或者其他柔软材料，并且还具有一定的保温效果。
[0009]作为进一步改进，所述盒体内还设有一个控温装置，能够使试剂盒在运输过程，或者取出试剂做实验过程中保持试剂盒中的试剂基本维持在实验所需要的温度。
[0010]优选的，瓶托上的槽数至少为10个。
[0011 ] 为了确保试剂盒中的试剂能够较好的保存与使用，试剂盒保存温度最好为4°C，保存时间不超过6个月。
[0012]有益效果:本实用新型的试剂盒为免疫磁珠分离抗酸杆菌提供所需的试剂以及实验器材，能够直接进行实验而不必再为准备实验条件耗时耗力，还能够对试剂盒内物品在运输过程中起到较好的保护作用以及对试剂提供一个实验过程所需温度条件。并且能够准确的检测抗酸染色显示阳性或者阴性，进而能够显著提高痰菌阴性肺结核的诊断效率。本实用新型利用免疫反应的高度特异性和磁性分离的快速、简单等优点，使得采用实用新型的试剂盒进行分离抗酸杆菌具有简单、快速、准确、无污染的特点，无需昂贵的特殊设备，就能够在基层医院推广使用。
【附图说明】
[0013]图1为本实用新型【具体实施方式】的结构示意图。
[0014]图中I盒体，2盒盖，3瓶托，4放置载玻片的凹槽，5放置盖玻片的凹槽，6放置磁铁的凹槽，7放置玻璃管的凹槽，8、9、10、11、12、13均为放置试剂瓶的凹槽，14控温装置。
【具体实施方式】
[0015]下面结合具体实施例来对本实用新型做进一步说明。
[0016]实施例1
[0017]免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，包括盒体I和盒盖2，所述盒盖2连接在盒体I上方，盒盖2与盒体I盖合处设有密封垫，密封垫可以采用海绵垫，所述盒体内设有瓶托3，所述瓶托设有凹槽，包括放置载玻片的凹槽4、放置盖玻片的凹槽5、放置磁铁的凹槽6、放置玻璃管的凹槽7以及放置试剂瓶的凹槽8、9、10、11、12、13，并且每一个凹槽下面有一个对应的标明放置物名称的标签。
[0018]其中凹槽8的试剂瓶中装有PBS缓冲液500ml、凹槽9的试剂瓶中装有PE标记抗抗酸杆菌抗体50 μ 1、凹槽10的试剂瓶中装有抗IgG Dynabeads免疫磁珠250 μ 1、凹槽11的试剂瓶中装有5%石碳酸复红溶液100ml、凹槽12的试剂瓶中装有3%盐酸酒精溶液100ml、凹槽13的试剂瓶中装有亚甲基蓝溶液100ml。
[0019]试剂盒的凹槽内设置有海绵垫，使放置物能够较好的固定在凹槽内，在运输过程中不易晃动，使试剂盒在移动过程中不会造成凹槽内放置物易破损情况的发生，并且还具有一定的保温效果。
[0020]此外，瓶托与盒盖之间也可以加上一层海绵垫，也能够对瓶托中放置物起到缓冲和保温的效果。
[0021]盒体内还设有一个控温装置14，能够使试剂盒在运输过程，或者取出试剂做实验过程中保持试剂盒中的试剂基本维持在实验所需要的温度。
[0022]试剂盒保存温度最好为4°C，保存时间不超过6个月。
[0023]当然，此试剂盒中的槽数也可以多于10个，以备在实验中可以放置实验所需的试剂与器材。
[0024]下面用19名浸润性肺结核患者作为志愿者，取他们的深咳痰作为标本。以试剂盒中的试剂和器材，采用如下步骤来进行分离抗酸杆菌:
[0025]步骤一:取深咳痰标本，加入PE标记抗抗酸杆菌抗体I μ 1，4°C孵育30分钟，用PBS缓冲液洗孵育后的细胞一次后，加入50 μ I抗IgG Dynabeads免疫磁珠，混匀后置于4°C孵育20分钟，然后置于分离柱中，并将分离柱安装入磁场中2分钟，取出后弃去上清液，用2ml PBS/1 X 17个Dynabeads洗4次，放入离心机中在转速为3000转/分下离心10分钟；
[0026]步骤二:取离心沉淀物0.1ml，放入载玻片中央处，均匀涂抹成2cmX2.5cm的卵圆形痰膜，自然干燥，涂片火焰固定，平放染色架上，加5%石碳酸复红盖满痰膜，微火加温至染液呈现蒸汽，去火焰，染色7分钟，水洗，加3%盐酸酒精盖满痰膜，脱色3分钟，至无红色，水洗，加亚甲基蓝盖满痰膜，直接涂片复染30秒，集菌涂片复染2分钟，水洗，然后自然干燥；
[0027]步骤三:将步骤二中干燥后的涂片置于显微镜(目镜10 X，油镜100 X)下观察，通过观察涂片抗酸染色显示阳性或阴性。
[0028]结果显示，19例浸润型肺结核患者中，7例痰涂片抗酸染色检查阳性，免疫磁珠分选后抗酸染色仍阳性；在12例痰涂片阴性肺结核患者中，经免疫磁珠分选后6例抗酸染色阳性，6例普通细菌性肺炎患者经免疫磁珠分选后抗酸染色均为阴性。从结果可以看出，采用本实用新型的试剂盒能够准确的检测出抗酸染色显示阳性还是阴性，并且具有操作简单、快速的特点，在基层医院也可以使用。
[0029]本实用新型并不局限于上述实施例，在不脱离本实用新型精神及其实质情况下，本领域的普通技术人员可根据本实用新型做出各种相应改变和变形，这些相应对本实用新型进行的修改或者等同替换，其均应涵盖在本实用新型的权利要求保护的范围当中。
【主权项】
1.一种免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，包括盒体和盒盖，所述盒盖连接在盒体上方，其特征在于:盒盖与盒体盖合处设有密封垫，所述盒体内设有瓶托，所述瓶托设有凹槽，包括放置载玻片的凹槽、放置盖玻片的凹槽、放置磁铁的凹槽、放置玻璃管的凹槽以及放置试剂瓶的凹槽，并且每一个凹槽下面有一个对应的标明放置物名称的标签。2.根据权利要求1所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述放置试剂瓶的凹槽为6个，并且每一个试剂瓶中对应盛放有PBS缓冲液、PE标记抗抗酸杆菌抗体、抗IgG Dynabeads免疫磁珠、石碳酸复红溶液、盐酸酒精溶液、亚甲基蓝溶液。3.根据权利要求1所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述密封垫为海绵垫。4.根据权利要求1所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述凹槽内设有缓冲装置。5.根据权利要求1所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述放置载玻片的凹槽、放置盖玻片的凹槽、放置玻璃试管的凹槽容量均为50个。6.根据权利要求1所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述盒体内设有一个控温装置。7.根据权利要求1至6任一项所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述凹槽至少为10个。8.根据权利要求1至6任一项所述的免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，其特征在于:所述的试剂盒保存温度为4°C，保存时间不超过6个月。
【专利摘要】本实用新型涉及一种免疫磁珠分离抗酸杆菌检测试剂盒，包括盒体和盒盖，所述盒盖连接在盒体上方，盒盖与盒体盖合处设有密封垫，所述盒体内设有瓶托，所述瓶托设有凹槽，包括放置载玻片的凹槽、放置盖玻片的凹槽、放置磁铁的凹槽、放置玻璃管的凹槽以及放置试剂瓶的凹槽，并且每一个凹槽下面有一个对应的标明放置物名称的标签。采用本实用新型的试剂盒进行分离抗酸杆菌具有简单、快速、准确的特点，无需昂贵的特殊设备，就能够在基层医院推广使用。
【IPC分类】C12R1/32, C12M1/34, C12Q1/04
【公开号】CN204625631
【申请号】CN201520050027
【发明人】杨江华
【申请人】皖南医学院弋矶山医院
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年1月23日