Par4激动剂肽的制作方法
【专利摘要】本发明提供PAR4激动剂肽。这些肽可用于开发稳健的PAR4受体测定法。
【专利说明】PAR4激动剂肽 发明领域
[0001] 本发明提供与PAR4受体结合并且具有激动剂或部分激动剂活性的新的肽。肽可 用于开发稳健的PAR4受体测定法。
[0002] 发明背景 血栓栓塞性疾病在发达国家仍然为死亡的主导起因，尽管可利用抗凝血剂例如华法林 (COUMADIN?)、肝素、低分子量肝素（LMWH)、合成的五糖和抗血小板药物例如阿司匹林和氯 吡格雷（PLAVIX?)。
[0003] 当前的抗血小板疗法具有限制，包括提高的出血风险以及部分效力（相对心血管 风险降低20-30%范围）。因此，发现和开发安全和有效的口服或肠胃外抗血栓药用于预防 和治疗宽范围的血栓栓塞性疾病仍然为重要的目标。
[0004] α -凝血酶为血小板聚集和脱粒的最有效的已知活化剂。血小板的活化在起因上 涉及动脉粥样血栓形成脉管闭塞。通过裂解称为蛋白酶激活的受体（PARs)的G-蛋白偶 联受体，凝血酶激活血小板。PARs提供它们自己的存在于N-末端细胞外域的隐蔽配体，该 细胞外域通过蛋白水解裂解暴露，随后与受体分子内结合以诱导发信号（束缚配体机理； Coughlin，S. R.，yVaitfre，407:258-264 (2000))。当蛋白水解激活后，模拟新形成的N-末 端的序列的合成肽可独立于受体裂解诱导发信号。血小板在动脉粥样血栓形成事件中为关 键的参与者。人血小板表达至少两种凝血酶受体，通常称为PARl和PAR4。已充分研究PARl 的抑制剂，并且若干化合物（包括vorapaxar和atopaxar)已进入至晚期临床试验。近来， 在ACS患者的TRACER III期试验中，vorapaxar不显著降低心血管事件，但是显著提高大 出血的风险（Tricoci，P.等人，Λ(份從.J ，366(1):20-33 (2012)。因此，仍需要发 现具有提高的效力和降低的出血副作用的新的抗血小板药物。
[0005] 存在一些PAR4抑制剂的临床前研究的早期报道。Lee，F-Y.等人，〃Synthesis of I-Benzyl-3- (5 ' -hydroxymethyl-2 ' -furyl)indazole Analogues as Novel AntiplateletAgents (I-苄基-3-(5'-羟基甲基-2'-呋喃基）吲唑类似物作为新的 抗血小板药物的合成）〃，7； 泛￡麗，44(22) :3746-3749 (2001)在摘要中公开了化合 物
【权利要求】
1. 一种PAR4激动剂肽，所述肽包含式I的氨基酸序列， Ala-Xaal-Pr〇-Gly-Xaa2-Leu_Val (式 I) 其中， 所述肽的氨基末端为游离的； Xaal 选自 Tyr 和 Phe (4-F); Xaa2 选自 Trp(5-0H)、（D，L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、 His (Bzl)、Phe、Tyr、Phe (五 _F)、2-Pya、3_Pya、4_Pya、Dpa、3_Pya (4-甲苯基）、Bip (2_ 甲 基）、1-萘基-413、2-萘基413、了71'(821)和苯乙烯基-413;和 C_末端被酰胺化。
2. 权利要求1的PAR4激动剂肽，其中Xaal为Phe (4-F)。
3. 权利要求2的PAR4激动剂肽，其中Xaa2为Trp。
4. 一种PAR4激动剂肽，所述肽包含SEQ ID NO :3的氨基酸序列。
5. 权利要求1的PAR4激动剂肽，所述肽在Val之后还包含Lys。
6. 权利要求1的PAR4激动剂肽，所述肽在Val之后还包含Lys-Asn。
7. 权利要求1的PAR4激动剂肽，所述肽在Val之后还包含Lys-Asn-Gly。
8. -种肽，所述肽包含式I的氨基酸序列， Ala-Xaa1-Pr〇-Gly-Xaa2-Leu-Val (式 I) 其中， 所述肽的氨基末端不与氨基酸稠合； Xaal 选自 Tyr 和 Phe (4-F); Xaa2 选自 Trp(5-0H)、（D，L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、 His (Bzl)、Phe、Tyr、Phe (五 _F)、2-Pya、3_Pya、4_Pya、Dpa、3_Pya (4_ 甲苯基）、Bip (2_ 甲 基）、1-萘基-413、2-萘基413、了71'(821)和苯乙烯基-413;和 所述肽具有PAR4激动剂活性。
9. 权利要求8的肽，其中Xaal为Phe (4-F)。
10. 权利要求8的肽，其中Xaa2为Trp。
11. 一种肽，所述肽包含SEQ ID NO :3的氨基酸序列。
12. 权利要求8-10中任一项的肽，其中所述氨基酸序列在Val之后还包含Lys。
13. 权利要求8-10中任一项的肽，其中所述氨基酸序列在Val之后还包含Lys-Asn。
14. 权利要求8-10中任一项的肽，其中所述氨基酸序列在Val之后还包含 Lys-Asn-Gly。
15. 权利要求8-14中任一项的肽，其基本上由或由氨基酸序列组成。
16. 权利要求8-15中任一项的肽，其中C-末端被酰胺化。
17. 权利要求1-7中任一项的PAR4激动剂肽或权利要求8-16中任一项的肽，其激活 PAR4受体。
18. 权利要求17的PAR4激动剂肽或肽，其中所述PAR4受体激活通过血小板聚集测定 法、FLIPR测定法或二者测量。
19. 权利要求17或18的PAR4激动剂肽或肽，其中所述PAR4受体激活高于通过由SEQ ID NO :1组成的肽的PAR4受体激活。
20.权利要求19的PAR4激动剂肽或肽，其中所述PAR4受体激活比通过由SEQ ID NO: 1组成的肽的PAR4受体激活高至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少 约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、至少约100倍、或者至少 约110倍。
【文档编号】C07K7/06GK104411713SQ201380034451
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2013年4月24日 优先权日:2012年4月26日
【发明者】M.G.科纳克, C.马佩利, D.J.里克兴格尔 申请人:百时美施贵宝公司