专利名称：一种抗癌药及其制取方法
技术领域：
本发明涉及一种抗癌药，特别是从中草药中提取活性成份的抗癌药及其制取方法。
肿瘤是目前世界医药界急待攻克的难题。现在使用的抗癌化疗药毒性和副作用大，如何发现疗效更高和毒性更低的抗癌新药是人们近切的需要。从无然产物，从中草药中获取抗癌活性成份，是当今国际上寻找抗癌新药的重要方向和途径。
中药苦豆子中含有多种生物碱，迄今已分离出了槐定碱、苦参碱、槐果碱等27种。1972年，日本的小岛良平等发现其中的苦参碱对动物移植瘤有抗癌活性(《医学生物学》日文1972年84、65期)。1984年，李雪梅等人报道了槐果碱对动物肿瘤有抑制作用。但这几种生物碱的抗癌活性较低，且在苦豆子中的含量也低，提取成本高。
本发明的目的是要克服上述已有技术的不足而提供一种从中药中提取活性成份的新型抗癌药物，要求它抗癌活性高而制取成本较低。
本发明的目的是这样实现的一种对绒癌、恶性葡萄胎、肺癌、消化道癌等疗效高、毒性低的抗癌药物，其特征是将从中药苦豆子中提取的槐定碱作为活性成份与药用载体及添加剂混合，制成针剂，片剂、胶囊。
所述的抗癌药的制取方法包括如下步骤(1)取苦豆子地上部分，粉碎为粗粉，用1%硫酸溶液湿润、浸泡12小时，按常规渗滤，收集渗漉液11倍的投料量。
(2)离子交换、碱化、洗脱、一次转盐。
将渗漉液过滤，滤液通过苯乙烯磺酸氢型树脂柱进行吸附，得饱和树脂，树脂用蒸馏水洗至无色，放掉水，继用8%氢氧化钠浸泡4小时，放净碱液，碱液用甲苯提取，树脂用甲苯70℃洗脱，萃取液与洗脱液合并，再经10%硫酸提取，即一次转盐10%硫酸提取，即一次转盐;
(3)游离、萃取、二次转盐取一次转盐的总碱盐溶液，加浓氢氧化钠调至PH111～12，用甲苯萃取，甲苯萃取液(流动相)经5%盐酸(固定相)用反流分布法进行提取分离，经薄层层析鉴定、合并得到生物碱中和液;
(4)游离、萃取、三次转盐。
取生物碱中和液，加浓氢氧化钠游离，用60～90℃石油醚提取苦豆碱(另行处理)，然后碱液用甲苯提取，甲苯提取液经反流分布法进行分离，即三次转盐(以5%盐酸为固定相，甲苯为流动相)又得生物碱中和液;
(5)游离、萃取、粗结晶取生物碱中和液，加浓氢氧化钠游离，碱液弃去，游离物用油状60～90℃石油醚萃取，加无水硫酸钠脱水，加中性氧化铝脱色，回收小体积，冷却使之结晶，母液分，得出粗结晶的槐定碱。
(6)溶解、脱水、脱色、抽滤、精制取槐定碱粗结晶、用30-60℃石油醚溶解，加和无水硫酸钠脱水，中性氧化铝脱色，布氏漏斗抽滤，回收滤液至小体积，冷却使其结晶，母液分出，得槐定碱纯结晶。得率0.45%。
(7)取槐定碱12.5克加注射用水约600毫升，搅拌溶解，逐渐加入计算量的盐酸溶液(1莫尔/升)，加注射用水稀释至1000毫升，搅匀，滤过至溶液澄清，灌装，熔封，灭菌30分钟，制提注射液。
本发明还可以制成口服片和胶囊，其方法如下制成口服片剂的方法取槐定碱25克，加赋形剂混合，压制成片剂，每片含槐定碱25毫克。
制成胶囊的方法取槐定碱25克，加赋形剂混合，装入胶囊，每胶囊含槐定碱25毫克。
本发明制得的抗癌药理药化及临床实验如下(一)对动物的抗癌实验1、对动物移植瘤的疗效(体内试验)实验动物杂种及纯系小鼠C57BL/6、DBA，615，及动物瘤株小鼠LLC、U14，S180，EAC，白血病L1210，L615，由中国科学院上海药物研究所或中国医学科学院研究所提供。
抗癌实验按照“全国抗癌药物筛选规程”(1978)，及1989南宁会议方法进行，设10.15.20mg/kg(30，45，60mg/m2高中低三个剂量(ip，ig)。
对小鼠实体瘤lewis肺瘤(LLC)，U14，S180等的抑癌率是30-60%(P∠0.05-0.01)，显示剂量关系。对艾氏腹水癌EC口服给药的生命延长率是25-50%(P＜0.05)，对S-180(A)的生命延长率是26-38%(P＜0.05)。但是对L1210无效。在所用的瘤谱中，对实体瘤的效果较好，其中以LLC车U14效果更佳。
与已知抗癌药环磷酰胺相比较，槐定碱给药过程中体重不下降，动物不死亡，毒性低(见表1、表2)与苦豆子中的苦参碱、氧化苦参碱相比较，用量少且抑癌率高。(表3)2、对EC癌细胞浓度、总数、倍增时间的影响小鼠ip EC1×107/0.2ml后24h随机分对照组及给药组，ip×8d。
结果接种癌细胞后0-3d癌细胞数量呈指数样增长，3d后生长曲线渐偏离对数值;4-7d倍增时间为槐定碱53h，槐果碱59h，环磷酰胺70h，而对照组是36h;抽取d3癌细胞液计数癌细胞浓度，总数明显降低，癌细胞核有丝分裂下降。以上结果说明槐定碱对EC有抑制作用。
3、体外对癌细胞杀伤实验(台盼蓝染色法)槐定碱稀释后加入3×106/0.1mlEAC腹水细胞，置37℃水浴内孵育，计数癌细胞蓝染率。结果证明槐定碱组的蓝染率随药物浓度增加和作用时间延长而增加，癌细胞肿大变形、细胞核固缩、溶解，甚至消失，但是随药物浓度降低而变化减轻。
4、对动物移植瘤及正常组织中核酸含量的影响(1)槐定碱对小鼠U14及S180肿瘤组织及正常小鼠脾组织核酸含量影响小鼠40只接种瘤细胞24h后给药，按文献方法提取核酸，按二苯胺法测RNA，苔黑酚法测DNA。结果证明，正常小鼠ig槐定碱后脾组织核酸含量RNA下降36%，DNA下降19%;S180及U14经槐定碱治疗后肿瘤组织核酸抑制率U14，DNA28.4%，RNA14.1%;S180DNA50.8%，RNA55.6%，(P＞0.05)，仅从含量看，槐定碱对核酸代谢影响不明显。
(2)显微分光度法测定槐定碱对瘤细胞DNA的影响治疗的EAC、S-180、与U14瘤细胞DNA的含量下降26.6-40%(P＞0.05)，瘤细胞核荧光较治疗前暗淡，胞核较疏松，核形态稍不规则。
(二)临床实验经江西省妇女保健院用本抗癌药治疗恶性滋养细胞疾病(绒癌恶性葡萄胎)20例有一定疗效。在20例中，临床治愈15例，有效3例，无效2例，总的有效率达90%(见表4)。20例病人中未因副作用而停药及不良并发症，用药后大多数病人食欲增加。
对肺癌和消化道肿癌也有疗效而无副作用。
6、一般药理实验经动物实验与临床试验表明，本抗癌药对动物的神经系统、血压、心率、心电图、呼吸以及机体的免疫功能均无明显的影响。
7、毒理实验经致突变试验和致畸试验表明本抗癌药无致突变和致畸作用。
经急性毒性试验和长期毒性试验和临床试用结果表明在体内毒性低且无积蓄现象。
以上实验表明，本发明制得的抗癌药对多种动物移植瘤有抗癌活性，临床对绒癌恶性葡萄胎、肺癌、消化道癌抗癌作用明显而稳定。其毒副反应低，不降低机体细胞免疫功能，无致突变及无致畸作用，在体内无蓄积现象，与目前临床常用的抗癌化疗药物比较有明显的优点。苦豆子资源极为丰富。槐定碱是其中含量最高的生物碱(0.45%)，比苦参碱、槐果碱高，而抗癌有效剂量则低于苦参碱、槐果碱、提取成本较低，是一种很有价值的抗癌新药。
权利要求
1.一种对绒癌、恶性葡萄胎、肺癌、消化道癌等疗效高、毒性低的抗癌药物，其特征是将从中药苦豆子中提取的槐定碱作为活性成份与药用载体及添加剂混合，制成注射剂、口服片剂和胶囊。
2.根据权利要求1所述的抗癌药的制取方法，其特征在于它包括以下步骤(1)取苦豆子地上部分，粉碎为粗粉，用1%硫酸溶液湿润、浸泡、渗滤;(2)将渗滤液通过苯乙烯磺酸氢型树脂柱进行吸附，得饱和树脂，树脂用蒸馏水水洗，继用8%氢氧化钠浸泡碱化，放净碱液，碱液用甲苯提取，树脂用70℃甲苯洗脱，萃取液与洗脱液合并，再经10%硫酸提取，即一次转盐;(3)取一次转盐的总碱盐溶液，加浓氢氧化钠调至PH11～12，用甲苯萃取，甲苯萃取液(流动相)经5%盐酸(固定相)用反流分布法进行提取分离，经薄层层析鉴定、合并生物碱中和液;(4)取生物碱中和液，加浓氢氧化钠游离，用60～90℃石油醚提取苦豆碱，然后碱液用甲苯提取，甲苯提取液经反流分布法进行分离，即三次转盐(以5%盐酸为固定相，甲苯为流动相)又得生物碱中和液;(5)取生物碱中和液，加浓氢氧化钠游离，游离物用60～90℃石油醚萃取，加入无水硫酸钠脱水，加中性氧化铝脱色，回收小体积，冷却使之结晶，母液分出，得粗结晶的槐定碱;(6)取槐定碱粗结晶，用30～60℃石油醚溶解，加入无水硫酸钠脱水，中性氧化铝脱色，布氏漏斗抽滤，另收滤液至小体积，冷却使其结晶，母液分出，提槐定碱纯结晶;(7)取槐定碱12.5克加注射用水约600毫升，搅拌溶解，逐渐加入计算量的盐酸溶液(1莫尔/升)，加注射用水稀释至1000毫升，搅匀，滤过至溶液澄清，灌装，熔封，灭菌30分钟，制得注射液。
3.根据权利要求2所述的抗癌药的制取方法，其特征是取槐定碱25克，加赋形剂混合，压制成片剂，每片含槐定碱25毫克。
4.根据权利要求2所述的抗癌药的制取方法，其特征是取槐定碱25克，加赋形剂混合，装入胶囊，每胶囊槐定碱25毫克。
全文摘要
本发明公开了一种抗癌新药及其制取方法，其特征是将从中药苦豆子中提取的槐定碱作为活性成分与药用载体及添加剂混合制成针剂、片剂、胶囊和其他制剂。其制取方法是取苦豆子地上部分经浸泡、渗滤、离子交换、碱化、洗脱、一次转盐、游离、萃取、二次转盐、游离、萃取、三次转盐、游离、萃取、粗结晶、精制得到槐定碱，然后加盐酸制成注射液。加赋形剂制成片剂、胶囊等，本发明制得的抗癌药对绒癌、恶葡、肺癌、消化道癌抗癌作用明显而稳定，毒副反应低。且苦豆子资源丰富，槐定碱含量高，提取的成本低，是一种很有价值的抗癌新药。
文档编号C07G5/00GK1089846SQ9310088
公开日1994年7月27日 申请日期1993年1月18日 优先权日1993年1月18日
发明者李雪梅, 傅兴生, 吴运珖, 潘大鑫, 余月华, 吴联奎, 陈绍励 申请人:江西中医学院