一种利用微生物制备氧化槐定碱的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物技术与新医药技术领域，具体为一种利用微生物催化制备抗癌 药物氧化槐定碱（0巧so地oridine，CAS No. 54809-74-4)的方法。
【背景技术】
[000引槐定碱So地oridine (SR)是含苦参型的生物碱，为豆科植物苦豆子 (5b如caroi沁5 L.)中存在的含量较高生物碱之一。根据学者对其研究发现， 槐定碱可存在于中枢神经系统、也血管、免疫系统，且具有抗肿瘤抗微生物和抗内毒素等 作用。槐定碱（及其制剂盐酸槐定碱注射液（Sophoridine Hy化oehloride Injection) 已于2005年8月22日获国家食品药品监督管理局（SFDA)颁发的新药证书（国药证字 肥0051131，30)及药品批准文号（国药准字肥0051682, 81)，是我国研制、拥有自主知识产 权国家一类抗癌新药。初步计算机辅助设计及构效关系研究显示SR经氧化后生物活性发 生变化，同时其毒性明显减弱。刘平等研究氧化槐定碱（Oxyso地oridine)对、肺癌、肠癌的 作用时，氧化槐定碱的冻干粉针、软胶丸、滴丸、薄膜包片及控释胶囊等多种剂型的抗癌活 性强于槐定碱，而毒副反应少于槐定碱。
[0003] 氧化槐定碱传统的制备工艺是从苦豆子提取分离，但其收率很低，仅为0. 015%左 右，过度采挖可能导致该物种瀬临灭绝，该样会造成植被和人类生存环境，W及生物多样性 不可弥补的损失。此外，该提取工艺繁杂、成本高，难W实现大规模工业化生产。国外化学 合成方法使用了间氯过氧苯甲酸和二氯甲焼，工艺成本较高，反应立体选择性差，不利于工 业生产。而且二氯甲焼属于二类溶剂，应该限制使用。另有报道，SR与双氧水反应的路线 来制备氧化槐定碱，但是合成的氧化产物有两种构型。所W函待需求一种高效、经济制备氧 化槐定碱的新方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种高效、经济的微生物催化制备氧化槐定碱的方法。该微 生物菌株名称为斬知W，保藏单位；中国典型培养物保藏中也，地址：武汉大学，保 藏日；2014年12月24日，保藏编号；CCTCC M 2014660。
[0005] 基于W上目的，本发明涉及的微生物菌种是从重庆的药用植物蛇足石杉中分离纯 化得到。使用的PDA培养基制备；去皮马铃墓切块200 g，煮沸约20 min, 8层纱布过滤得 滤液，加入葡萄糖20 g，用自来水补足1以如果配固体培养基1L加入20 g琼脂，放入高压 灭菌锅中12rC灭菌20 min。采用自然界中廉价易得、结构类似的生物碱-槐定碱为底物， 利用上述微生物催化的方法制备氧化槐定碱。
[0006] 其底物槐定碱的浓度可W为0.0 l-lOmg/mL。
[0007] 其底物槐定碱的溶剂为：无水己醇、丙丽、甲醇、DMS0或它们的混合溶剂。
[0008] 其制备反应时间为3-9天。
[0009] 其制备反应温度为22-3(TC。
[0010] 与现有技术相比，本发明采用微生物催化的方法制备氧化槐，通过氧化前体底物 槐定碱得到其氮氧化物的形式，只需一步即可制备目标化合物氧化槐定碱，优点在于；（1) 成本低：选用自然界廉价易得的天然产物槐定碱为原料，一步反应即可催化合成氧化槐定 碱，此外，克服了从植物中提取、分离、纯化过程中使用大量的有机溶剂（2)选择性高；选择 微生物酶为催化剂，具有强的区域选择性和立体选择性；（3)环境友好：因为反应过程温 和，无高温高压等苛刻条件，也需要金属试剂的催化，所W符合当今绿色化学的生产需求； (4)步骤简单；从槐定碱到氧化槐定碱用化学方法需要几步反应，而微生物催化只需一步。 综述所述，该方法采用的原料及催化剂便宜、易得，反应条件温和、易控，环境友好，能很好 地满足绿色化学和可持续发展化学的发展，及其对现代环境保护和低碳经济的需求。
[0011]
【附图说明】 图1为本发明中微生物菌株的电子显微镜照片； 图2为本发明中微生物菌株催化生成氧化槐定碱的情况； 图3为本发明中微生物菌株的系统发育分析； 图4为氧化槐定碱的分离流程； 图5为本发明中目标化合物的"C-NMR ; 图6为本发明中目标化合物的iH-NMR。
【具体实施方式】
[0012] W下实施方案便于更好地理解本发明。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊 说明，均为自常规生化试剂公司购买得到。
[0013] 本发明的菌种从重庆药用植物蛇足石杉中分离纯化得到，菌种名称： 斬7aria7es. 5/7,保藏单位；中国典型培养物保藏中也，地址：武汉大学，保藏日；2014年12 月24日，保藏登记号；CCTCC M 2014660。反应底物槐定碱为南京元宝峰医药科技有限公司 生产。
【主权项】
1. 一种利用微生物制备氧化槐定碱的方法，其特征是：所述微生物菌种名称： 5/7,保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉大学内，保藏日：2014年 12月24日，保藏编号：CCTCC M 2014660 ;利用所述微生物菌种由槐定碱制备氧化槐定碱的 方法。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述底物槐定碱的浓度为0.0 l-lOmg/mL。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述底物槐定碱的溶剂为：无水乙醇、丙酮、 甲醇、DMSO或它们的混合溶剂。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述制备反应时间为3-9天。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述制备反应温度为22-30°C。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述制备反应温度为28°C。
【专利摘要】一种利用微生物菌种由槐定碱制备氧化槐定碱的方法，该微生物菌种名称：Xylariales.sp，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉大学内，保藏日：2014年12月24日，保藏编号：CCTCC M2014660。该微生物菌株催化化合物槐定碱只需一步得到其氮氧化物氧化槐定碱，具有成本低、选择性高、环境友好、步骤简单的优点。CCTCC M201466020141224
【IPC分类】C12R1-645, C12P17-18
【公开号】CN104630304
【申请号】CN201510057554
【发明人】付少彬, 孟庆峰, 冉旭, 闫松, 张芸
【申请人】遵义医学院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月4日