枯草芽孢杆菌by7及其降解残饵和氨氮的应用

枯草芽孢杆菌by7及其降解残饵和氨氮的应用
【专利摘要】本发明涉及一株枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用；一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7，已于2015年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015585；其16s rDNA如SEQ.ID.NO 1所示。枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液可降解污染水体或水产养殖水体中氨氮和降解饲料中的残饵。本发明提供的枯草芽孢杆菌可应用于如下方面：(1)由于其具有很强的氨氮降解能力，可用于改善水体的氨氮污染问题；可用于降低水产养殖池塘中的氨氮含量；(2)由于其可分解饲料残饵中的蛋白质，可用于降解水产养殖池塘中的残饵和池底的有机质。本发明在夏季高温季节的养殖池塘中应用前景广阔。CCTCC NO: M201558520150928
【专利说明】
枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用 一、
技术领域
[0001] 本发明涉及枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用，属于微生物技术领域。 二、
【背景技术】
[0002] 在水产养殖池塘中，大量投饵所致池底残饵、粪便等含氮有机物难以完全被天然 的微生物氧化分解，剩余的有机物日积月累在池底堆积，污染了池塘的底质和水质。因此， 人为地施加能大量降解残饵等的微生物菌种来加速池底有机质的分解是非常重要的。此 外，由于残饵、粪便等含氮有机物被分解后多以氨氮(NH4+-N)的形式被释放到水体中，导致 水体氨氮含量过高，影响养殖水产动物的生长，甚至危及养殖动物的生命，因此，筛选能降 低水体氨氮的微生物菌种应用于水产养殖生产意义重大。
[0003] 枯草芽孢杆菌是我国农业部允许使用的益生菌之一，由于其作用效果较为明显， 现已被广泛应用于水产养殖过程中的底质和水质改良。目前使用的枯草芽孢杆菌菌种多是 从自然养殖水体分离的。在温泉养殖水体中，由于养殖用水直接取自地下温泉，其微生物菌 种与自然养殖水体中的差异较大。 三、

【发明内容】

[0004] 本发明涉及一株枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用。是从温泉养殖水 体中分离筛选出一株高温下高产蛋白酶、高效降解饲料和氨氮的枯草芽孢杆菌，该菌株在 夏季高温季节的养殖池塘中应用前景广阔。
[0005] 枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)BY7，已于2015年9月29日保藏于中国典型培 养物保藏中心(简称CCTCC，地址为:湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学），保藏号为 CCTCC Μ 2015585;其 16s rDNA如SEQ.ID.N0 1所示。
[0006] 本发明还涉及适宜枯草芽孢杆菌BY7生长的发酵培养基配方。
[0007] 本发明还涉及枯草芽孢杆菌BY7的菌悬液。所述菌悬液可用无菌生理盐水或PBS重 悬菌体得到。所述菌悬液0D6QQ值可达到2.0。
[0008] 本发明还涉及枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液在降解污染水体或水产养殖水体中 氨氮的应用，包括如下步骤:根据水体氨氮污染程度将适量的枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬 液施加于水产养殖水体或氨氮污染水体中，利用枯草芽孢杆菌BY7具有的降解氨氮的能力 来降低水体中的氨氮。水产养殖水体或污染水体的pH值最好在5.0-8.0之间；水产养殖水体 或污染水体中要有一定的碳源和氮源，C/N在3-7之间均可，最好为6。
[0009] 本发明还保护枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液在降解饲料残饵中的应用，包括如下 步骤:将适量的枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液施加于水产养殖水体中，利用枯草芽孢杆菌 BY7具有的降解蛋白的能力来降解饲料残饵。水产养殖水体的pH值最好在5.0-8.0之间均 可;水产养殖水体中要有一定的碳源和氮源，C/N在3-7之间均可，最好为6。
[0010] 本发明提供的枯草芽孢杆菌，培养方法简单、生长速度快、能耐受高浓度的氨氮、 环境适应性强、安全性高。本发明提供的枯草芽孢杆菌可应用于如下方面：（1)由于其具有 很强的氨氮降解能力，可用于改善水体的氨氮污染问题;可用于降低水产养殖池塘中的氨 氮含量；（2)由于其可分解饲料残饵中的蛋白质，可用于降解水产养殖池塘中的残饵和池底 的有机质。本发明具有较好的应用前景。 四、
【附图说明】
[0011]图1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7与同批分离所得菌株分解酪素透明 圈直径比较。
[0012] 图1说明：将BY7及其他菌株涂布于酪素培养基上，37°C培养24h后用游标卡尺分别 测量透明圈直径及菌落直径，计算透明圈直径与菌落直径的比值，根据比值大小可判断各 菌种分解蛋白的能力。
[0013] 图2A为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7菌落照片，B为显微镜下菌体形态 照片。
[0014] 图2中A图和B图从形态学上对BY7进行了分类鉴定。
[0015] 图3A为枯草芽孢杆菌BY7 16S rDNA电泳图，B为基于分离菌株和Genbank中收录的 其他相关菌株的16S rDNA序列构建的系统进化树。
[0016]图3说明：基于各菌株16S rDNA序列构建的系统进化树可初步鉴定其分类学地位。 [0017] 图4为培养基C/N(A)、pH值(B)和温度（C)对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) BY7生长的影响。
[0018] 图4的目的是确定枯草芽孢杆菌BY7的适宜培养条件。
[0019] 图5为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7与本实验室保藏菌株BS2的产蛋白 酶活性比较。
[0020] 图5的目的是精确比较枯草芽孢杆菌BY7与本实验室保藏的枯草芽孢杆菌BS2的产 蛋白酶活性差异。
[0021] 图6为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7对饲料蛋白的降解效果。
[0022]图6的目的是检测枯草芽孢杆菌BY7降解饲料蛋白的能力。
[0023] 图7为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7对水体中氨氮的降解效果。
[0024]图7的目的是检测枯草芽孢杆菌BY7对水体中氨氮的降解能力。 五、
【具体实施方式】
[0025] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规化试剂商店购买得到的。下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均 值。以下实施例中，用于制备各个培养基的水均为去离子水。以下实例中，培养基配制完成 后均在121°C温度下湿热灭菌20min。以下实施例中用OD600值表征菌体生长量。C/N即碳氮质 量比，又称碳氮比。
[0026] 基础培养基:蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，固体另加15g的琼脂，水1000mL，调 pH 6.0〇
[0027]发酵培养基:葡萄糖15g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸二氢钾4.5g，碳酸钠2g，氯化 钠5g，硫酸镁0.2g，微量元素溶液(硫酸锌0.22g/L，硫酸铜0.08g/L，硫酸锰2.03g/L，硫酸亚 铁Ο · 2g/L，硼酸 2 · 86g/L，钼酸铵Ο · 02g/L) Ο · 5mL，水lOOOmL，调节pH至6 · 0。
[0028]酪素培养基：分别配制Α液和Β液。Α液：称取磷酸氢二钠1.07g，干酪素5g，加约 100mL水，加热溶解。B液:称取磷酸二氢钾0.36g，加约100mL水溶解。A、B液混合后，加琼脂 20g，最后用水定容至lOOOmL，调节pH至6.0。
[0029]无色培养基:柠檬酸钠作为唯一碳源，氯化铵作为唯一氮源，氯化钠5g，磷酸二氢 钾0.7g，硫酸镁lg，微量元素溶液(硫酸锌0.22g/L，硫酸铜0.08g/L，硫酸锰2.03g/L，硫酸亚 铁0 · 2g/L，硼酸 2 · 86g/L，钼酸铵0 · 02g/L) 0 · 5mL，水1000mL，调节pH至6 · 0。
[0030] 微量元素溶液：硫酸锌0.22g，硫酸铜0.08g，硫酸锰2.03g，硫酸亚铁0.2g，硼酸 2.86g，钼酸铵0.02g，水1000mL，调节 pH至6.0。
[0031] 100yg/mL酪氨酸溶液:精确称取在105°C烘至恒重的酪氨酸100yg，逐步加入6mL的 lmol/L的盐酸使溶解，用0.2mol/L盐酸定容至100mL，其浓度为1000yg/mL，再吸取此液 1 OmL，以0.2mo 1/L盐酸定容至100mL，即配成100yg/mL酪氨酸溶液，冰箱内保存。
[0032] 2 %酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g，加入0 . lmol/L NaOH溶液10mL，水浴加热溶 解，然后用pH 7.2的磷酸盐缓冲液定容至100mL即可，冰箱内保存。
[0033]氨氮(NH4+-N)含量通过ET99732多参数水质快速测定仪测定。
[0034]实例1枯草芽孢杆菌BY7的分离纯化及鉴定
[0035] 一、菌种的分离纯化
[0036] 1、降蛋白和氨氮菌株的富集
[0037]在岱岳区温泉水产养殖试验场的罗非鱼养殖池、淡水白鲳养殖池、乌鳢养殖池、鲤 鱼养殖池、金鲫养殖池中各取水样100mL，将各养殖池的水样混合后取5mL接种于装有100mL 富集培养基(在基础培养基中加 NH4CI，将氨氮浓度调至50mg/L得到富集培养基）的锥形瓶 中，37°C、200r/min振荡培养1天;取培养1天后的培养液lmL再次接种于100mL富集培养基 中，如此反复富集培养6代。
[0038] 2、降蛋白和氨氮菌株的筛选、分离
[0039]取富集培养至第6代的培养液（OD600值为1.5)lmL于1.5mL的离心管中，80°C煮 15min，处理后的培养液用无菌水分别稀释至10-5、10-6、1〇Λ?0-8倍，分别取上述四种稀释后 的培养液50yL涂布于LB平板，37°C培养14h后观察菌落形态特征，挑取形态上类似枯草芽孢 杆菌且生长快、菌落大、数量多的菌落，采用三线法进行纯化，纯化3代后，分别进行4°C斜面 保存。
[0040]将上述单菌落分别接种于基础培养基中，37°C振荡培养12h，然后取适量涂布于酵 素培养基中，37°C培养24h，用游标卡尺分别测量透明圈直径及菌落直径，计算其比值，根据 比值评价其分泌蛋白酶的能力，最后获得生长迅速且高产蛋白酶的8株菌，分别命名为 BY 1 - BY8 (即 BY 1、BY2、BY3、BY4、BY5、BY7、BY7、BY8)。BY 1 - BY8的透明圈直径/菌落直径结果 见图1，其中BY7的透明圈直径与菌落直径比值最高，达到了 5.4。
[00411将分离纯化的BY1 - BY8分别接种于基础培养基中，37°C振荡培养12-16h，分别取 培养物4000rpm离心10min，弃去上清液，用PBS重悬沉淀制成菌悬液，再分别接种于100mL的 筛选培养基(在所述无色培养基的基础上调整NH 4C1的浓度，调节氨氮浓度至300mg//L得到 筛选培养基）中，200r/min振荡培养1天后测定氨氮含量，结果显示降解氨氮效果最好的菌 株为BY7。
[0042]二、菌种的鉴定 [0043] 1、形态观察
[0044]将BY7菌株接种在LB固体培养基平板上，观察菌落形态特征。BY7菌株的菌落照片 见图2A，100倍显微镜放大照片见图2BAY7菌落呈点状，乳白色，半透明，边缘光滑，凸起，培 养后期出现褶皱。
[0045] 2、生化鉴定
[0046] 采用Biolog微平板对BY7菌株进行生理生化鉴定，鉴定结果为Bacillus subtilis。
[0047] 菌株BY7的生理生化反应结果汇总如表1所示：
[0050] 注："+"表示生长或阳性反应；表示不生长或阴性反应。
[0051 ] 3、分子生物学鉴定
[0052]以BY7菌液为模板进行16S rDNA部分序列的PCR扩增：
[0053] 正向引物：5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'（如SEQ.ID.N0 2所示），
[0054] 反向引物：5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'（如SEQ.ID.N0 3所示）。
[0055] ?0財广增程序:94°(：预变性41^11，94°(：变性3〇8,56°(：复性458,72°(：延伸9〇8,35个循 环后于72°C延伸7min，4°C保存。将PCR扩增产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳检测，电泳结果 见图3A。将纯化的PCR产物连接到PMD-18T载体上，然后转化进大肠杆菌感受态细胞内，PCR 鉴定为阳性的克隆送公司测序，得到BY7 16s rDNA序列，序列结果见SEQ.N0.1。将测序结果 进行13]^81:比对，利用16831丨811软件构建进化树（图313)，发现1^7与1^1〇;[11118 811131:;[1丨8聚为 1支。
[0056] 综合形态鉴定、生化鉴定和分子生物学鉴定的结果，BY7菌株被鉴定为枯草芽孢杆 菌(Bacillus subtilis)，命名为枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)BY7〇
[0057] 枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)BY7，已于2015年9月29日保藏于中国典型培 养物保藏中心（简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉 大学保藏中心），保藏号为CCTCC Μ 2015585。
[0058] 三、菌种的安全性评价
[0059] 将生长状况良好，体重为80g左右的90尾尼罗罗非鱼分为9个组(每组10尾鱼），分 别设为:枯草芽孢杆菌BY7组4个，灌服的枯草芽孢杆菌BY7浓度分别为106、107、10 8、109cfu/ mL;无乳链球菌组4个，灌服的无乳链球菌浓度分别为106、107、108、10 9〇如/1^;生理盐水组1 个，灌服无菌生理盐水。每尾鱼灌服lmL菌液或无菌生理盐水。结果如表2所示，饲养10天后 发现，灌服枯草芽孢杆菌和生理盐水的死亡率均为〇，而灌服无乳链球菌的尼罗罗非鱼死亡 率在10-30%之间，这说明我们分离的枯草芽孢杆菌BY7是安全的。
[0060]表2菌种安全性评价结果
[0062]实例2枯草芽孢杆菌BY7生长条件的研究 [0063] 一、C/N对菌株生长的影响
[0064] 1、挑取枯草芽孢杆菌BY7单克隆，接种于10mL基础培养基中，37°C、200r/min振荡 培养12h(使培养体系中的菌液OD600值达到1.0)，4000rpm离心10min，收集菌体，用无菌生理 盐水洗涤3次。
[0065] 2、将上述菌体用无菌生理盐水重悬，各取2mL菌悬液分别接种于9个盛有100mL无 色培养基的锥形瓶中（pH为6.0)，分别调整各锥形瓶培养基中柠檬酸钠和氯化铵的浓度，使 9个锥形瓶培养基中的C/N分别为1、3、4、5、6、7、9和11，接着37°C、200r/min振荡培养，每隔 2h采样1次测定菌液OD600值，培养12h后发现，当C/N为6时，枯草芽孢杆菌BY7生长最好，C/N 较高或较低时，枯草芽孢杆菌BY7的生长都受到一定程度的抑制（图4A)。因此，适宜枯草芽 孢杆菌BY7生长的C/N为6。
[0066] 二、pH对菌株生长的影响
[0067] 1、挑取枯草芽孢杆菌BY7单克隆，接种于10mL基础培养基中，37°C、200r/min振荡 培养12h(使培养体系中的菌液0D6(X)值达到1.0)，4000rpm离心10min，收集菌体，用无菌生理 盐水洗涤3次。
[0068] 2、将上述菌体用无菌生理盐水重悬，各取2mL菌悬液分别接种于7个盛有lOOmL无 色培养基的锥形瓶中（C/N为6)，分别将各锥形瓶中培养基的pH调整为3.0、4.0、5.0、6.0、 7.0、9.0和11.0，接着37 °C、200r/min振荡培养，每隔3h采样1次，测定菌液OD6QQ值，培养15h 后发现，pH在5.0-7.0范围内，枯草芽孢杆菌BY7都能保持较好的生长状态（图4B)，pH为6.0 时生长最好。
[0069]结果表明，枯草芽孢杆菌BY7具有较强的环境耐受性，其适宜的C/N和pH与养殖水 体中的环境基本一致，利于其生长，具有在水产养殖水体中应用的潜力。
[0070] 三、温度对菌株生长的影响
[0071] 1、挑取枯草芽孢杆菌BY7单克隆，接种于10mL活化培养基中，37°C、200r/min振荡 培养12h(使培养体系中的菌液0D 6QQ值达到1.0)，4000rpm离心10min，用无菌生理盐水洗涤 沉淀3次，接着将沉淀用无菌生理盐水重悬制成菌悬液。
[0072] 2、各取2mL菌悬液分别接种于5个盛有lOOmL无色培养基(pH 6.0)的锥形瓶中，分 别于20 °C、25 °C、30 °C、35 °C和40 °C下200r/min振荡培养24h后测定菌液0D6QQ值，结果显示在 25-30 °C下枯草芽孢杆菌BY7生长最好(图4C)。
[0073]实例3枯草芽孢杆菌BY7产蛋白酶活性分析 [0074] 一、标准曲线的绘制
[0075] 1、按表3配制各种不同浓度的酪氨酸溶液
[0076] 表3配制各种不同浓度的酪氨酸溶液
[0078] 2、取6支试管，标为1-6号，分别加入O-lOmL浓度为lOOyg/mL酪氨酸，配制成表3所 述酪氨酸最终浓度的溶液，再各加入浓度为〇.4mol/L的碳酸钠溶液5mL和福林试剂lmL。用 混匀器充分混匀后，置37°C恒温水浴中反应20min。
[0079] 3、以1号管做对照，分别比色测定各管A68Q，测三次，取平均值。
[0080] 4、以酪氨酸浓度为横坐标，净A68Q值为纵坐标，绘制标准曲线，建立回归方程计算 出当吸光度为1时的酪氨酸量(yg)，即为吸光常数K值。
[0081]二、蛋白酶活性测定
[0082] 1、分别挑取枯草芽孢杆菌BY7与本实验室保藏的枯草芽孢杆菌BS2单克隆，接种于 10mL基础培养基中，37°C、200r/min振荡培养12h(使菌液0D6QQ值达到1.0)，4000rpm离心 lOmin，用无菌生理盐水洗涤沉淀3次，接着用无菌生理盐水重悬沉淀制成菌悬液。
[0083] 2、将BY7和BS2的菌悬液以体积比5 %的接种量分别接种于1 OOmL的发酵培养基中， 接着37°C、200r/min振荡培养48h后取发酵液各5mL，12000rpm离心5~lOmin，取上清液用pH 7.5的缓冲液稀释至适当浓度，供测试用。
[0084] 3、取15 X 100mm试管6支并编号，分为BY7和BS2两组，每组三个重复。每管内加入稀 释后的上清液lmL，置于37°C恒温水浴中预热5min。再各加入同样预热的酪蛋白溶液lmL，摇 匀，精确保温1 Omin。到时间后，立即再各加入0.4mo 1/L的三氯乙酸2mL，以终止反应，继续置 于水浴中保温lOmin，使残余蛋白质沉淀后离心或过滤。
[0085] 4、另取15 X 150mm试管6支并编号，分为BY7和BS2两组，每组三个重复。每管内加入 滤液lmL，再加浓度为0.4mol/L的碳酸钠5mL和福林试剂lmL，摇匀，37°C水浴保温发色20min 后进彳ΤΑ680测定。
[0086] 5、空白试验也取三支试管，编号1、2、3，测定方法同上，唯在加酪蛋白溶液之前先 加浓度为〇. 4mol/L的三氯乙酸2mL，使酶失活，再加入酪蛋白。
[0087] 6、酶活力的计算
[0088] 蛋白酶活力(U/mL) = (样品A68q -对照A68q) XKXV/TXN
[0089] K:标准曲线中光吸收度为"Γ时的酪氨酸微克数；
[0090] V:酶促反应总体积；
[0091] T:酶解反应时间(min);
[0092] N:酶液的稀释倍数。
[0093]结果显示，BS2菌株的产蛋白酶活力为16.61U/mL，而BY7菌株的产蛋白酶活力为 43.28U/mL(图5)』Y7的产蛋白酶活力显著高于BS2，BY7能在水解蛋白质方面发挥作用，可 应用于降解水产养殖池塘中的残饵和池底的有机质。
[0094]实例4枯草芽孢杆菌BY7降解饲料能力分析
[0095] 1、制备2 %虾饲料培养基:虾饲料2g，磷酸二氢钾4.5g，氯化钠5g，硫酸镁0.2g，加 水定容至lOOmL后调节pH至6.0。
[0096] 2、挑取枯草芽孢杆菌BY7单克隆接种于10mL基础培养基中，37°C、200r/min振荡培 养12h(使菌液0D6QQ值达到1.0)，4000rpm离心10min，用无菌生理盐水洗涤沉淀3次，接着用 无菌生理盐水重悬沉淀制成菌悬液。
[0097] 3、以体积比2%的接种量将菌悬液接种到含有300mL 2%虾饲料培养基的三角瓶 中，37°C，200r/min连续振荡培养5天，接着5000rpm离心10min分别得到上清和沉淀，沉淀冷 冻干燥后，上清和冷冻干燥的沉淀分别用凯氏定氮法测定蛋白含量。空白组仅不接种菌悬 液，其他与加入菌悬液的BY7组操作完全相同。根据公式:N= (Vi-V〗）X CX 0.0140 X 6.25/m 计算出各样品的蛋白质含量，其中乂:是加入菌悬液的BY7组滴定时消耗盐酸的量(mL)，乂2是 空白组所消耗的盐酸量(mL)，C是盐酸标准液浓度(mol/L)，m是样品质量(g)，6.25为氮换算 为蛋白质的平均系数。
[0098] 结果显示，与空白组相比，加入菌悬液的BY7组固体状态的蛋白质含量明显降低， 而液体状态的蛋白质含量则明显升高（图6)，即BY7能有效地将固体饲料中的蛋白质降解为 液态形式，降解率高达66%。由于枯草芽孢杆菌BY7可分解饲料中的蛋白质，可用于降解水 产养殖池塘中的残饵和池底的有机质。
[0099]实例5枯草芽孢杆菌BY7降解氨氮特性研究
[0100] 1、制备培养基甲：在无色培养基的基础上调整碳源和氮源的浓度，使氨氮浓度为 300mg/L，C/N为6，pH为6·0。
[0101] 2、挑取枯草芽孢杆菌BY7单克隆，接种于10mL基础培养基中，37°C、200r/min振荡 培养12-16h(使菌液OD600值达到1.0)，4000rpm离心10min，用无菌生理盐水洗涤沉淀3次，接 着用无菌生理盐水重悬沉淀制成菌悬液。
[0102] 4、将lmL菌悬液接种于100mL培养基甲中，37°C、200r/min振荡培养，每隔24h采样 一次，检测离心后培养基中氨氮浓度并计算氨氮降解率。氨氮浓度由ET99732多参数水质测 定仪测定得到。空白组仅不接种菌悬液，其他与加入菌悬液的BY7组操作完全相同。
[0103] 氨氮降解率=(初始时刻培养体系中的氨氮浓度-培养24h后体系中的氨氮浓度)/ 初始时刻培养体系中氨氮浓度X 100%。
[0104] 结果显示，与空白组相比，加入菌悬液的BY7组24h内氨氮含量明显降低，即BY7菌 株可有效分解培养基中的氨氮，120h后的降解率高达60% (图7)。由于枯草芽孢杆菌BY7具 有很强的氨氮降解能力，可用于降低水产养殖池塘中的氨氮含量。
【主权项】
1. 一株保藏号为CCTCC M 2015585的枯草芽孢杆菌BY7;其16s rDNA如SEQ.ID.NO 1所 不。2. 如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌BY7在降解污染水体或水产养殖水体氨氮中的应 用。3. 如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌BY7在降解水产养殖饲料残饵中的应用。
【文档编号】C02F3/34GK105886422SQ201510854901
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年11月30日
【发明人】季相山, 王慧, 王晓云, 赵燕, 陈红菊, 刘洪军
【申请人】山东农业大学