一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，该方法，将饲用枯草芽孢杆菌活化、扩大培养，得种子液；取葛根、黄精和饭麦石，超微粉碎，灭菌，得灭菌后中药粉A；将种子液接种到培养液中，培养8h，得到菌液；在菌液中加入灭菌后中药粉A，继续培养，得到二级种子液；取陈皮、鱼腥草和山楂，超微粉碎，灭菌，得到灭菌后中药粉B；将二级种子液接种到液体发酵培养基中，培养，得发酵液；在发酵液中添加灭菌后中药粉B，继续发酵10?15h，得最终发酵液；将最终发酵液真空浓缩、雾化、热空气进行并流干燥，干燥物料经旋风分离器引出、回收，制备出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。所添加剂含水量小，活菌数7000?18000亿/g，菌种活性高，具有广阔的市场前景。
【专利说明】
一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种菌粉的制备方法，具体的说是一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂 的制备方法。
【背景技术】
[0002] 枯草芽孢作为一种微生物制剂中的常用菌，枯草芽孢杆菌以芽孢形态进入动物肠 道后，可迅速从休眠状态重新萌发，作为一种需氧菌，枯草芽孢杆菌在萌发、生长过程中可 迅速、大量地消耗消化道中的游离氧，造成缺氧环境;而有害菌一般多为好氧菌，故其生长 受到抑制，厌氧有益菌群成为优势菌群。同时，枯草芽孢杆菌还具有较强的蛋白酶、淀粉酶 和脂肪酶活性，可将体内酶原激活为有活性的酶，还可分泌一系列胞外酶系，如果胶酶、葡 聚糖酶、纤维素酶等，可帮助分解植物饲料中非淀粉多糖等物质，改善饲料利用率;且酸性 肠道环境可刺激动物的肠道蠕动，促进消化吸收。此外，枯草芽孢杆菌本身作为非特异性免 疫因子，可通过菌体或细胞壁成分刺激宿主细胞，从而激活巨噬细胞，或可作为非特异性免 疫反应的免疫佐剂;也可使IgA等免疫球蛋白分泌增强，提高免疫识别力；刺激抗原呈递细 胞(APC)，诱导T细胞、B细胞产生细胞因子，通过淋巴活化全身免疫系统。同时，枯草芽孢杆 菌在生长繁殖过程中能合成B族维生素，以及维生素 E、K，可参与动物机体的新陈代谢，有促 进钙、磷吸收、抗氧化、促凝血等作用。目前市场上的枯草芽孢生产企业很多，但多数是小 规模企业，作坊式生产，设备工艺落后，草芽孢杆菌质量参差不齐，产品中的成分构成不科 学，有些虽然含菌数多，但杂菌率高，效果不好。因此开发一种高密度培养和高活力回收的 芽孢杆菌生产工艺，制备具有稳定活性的芽孢杆菌菌粉或者制剂，对推动生态绿色养殖，减 少抗生素使用，提高动物性食品源头安全尤为重要。
【发明内容】
[0003] 本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加 剂的制备方法，所制备的枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂含水量小于6%，活菌数在7000-18000亿/g，添加剂保存两年，其中的枯草芽孢杆菌仍然能保存95%菌种活性。
[0004] -种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤： 步骤一、将饲用枯草芽孢杆菌接种在斜面种子培养基上，35-37 °C培养48h;所述斜面种 子培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖〇 . 5-1.5%，蛋白胨0.2-2%，牛肉膏0.5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化钠0.5%，琼脂1.5-2%，余量为水； 步骤二、从培养的新鲜斜面上挑取2-4环菌苔接种于装有50ml液体扩大培养基的250ml 三角瓶中，35-37°C，180-240rpm摇床振荡培养16-24h，得到种子液，备用； 所述液体扩大培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖〇. 5-1.5%，蛋白胨0.2-2%， 牛肉膏0.5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化钠0.5%，余量为水； 步骤三、按照质量比为2:1:0.2的比例取葛根、黄精和饭麦石，置于超微粉碎机中进行 超微粉碎，过60-80目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉 A，备用； 步骤四、将上述培养的种子液接种到装有3L培养液的5L发酵罐中，接种量为培养液体 积的5-15%;接种结束后，于150-250rpm，1:1通风量，pH6.5-7.0，35-37°C条件下培养8h后， 得到菌液；在菌液中加入其重量6%-7%的灭菌后中药粉A，搅拌均匀后，继续在于150_ 250rpm，1:1通风量，pH6.5-7.0，35-37 °C条件下培养8-12h，得到二级种子液，备用； 所述培养液中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖0.5-1.5%，豆饼粉0.5-2.0%，蛋白胨 0 · 5-2 · 5%，硫酸铵0 · 25-1 · 5%，磷酸氢二钠 0 · 05-0 · 20%，磷酸二氢钠0 · 05-0 · 20%，硫酸镁 0 · 05-0 · 5%，氯化钙0 · 01 -0 · 10%，余量为水； 步骤五、按质量比为5:2:1的比例取陈皮、鱼腥草和山楂，置于超微粉碎机中进行超微 粉碎，过60-80目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉B，备 用； 步骤六、将培养的二级种子液接种于装有30-35L液体发酵培养基的50L发酵罐中，接种 量为发酵培养基体积的5-15%;接种结束后按1:0.6-0.75通风量，150-220rpm，pH6.5-7.0， 35-37 °C培养20-25h，得到发酵液;在发酵液中添加其质量2%的灭菌后中药粉B，在1:0.6-0.75通风量，150-220rpm，pH6.5-7.0，35-37°C继续发酵10_15h得到最终发酵液，备用； 所述液体发酵培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.0-3.0%，淀粉0.5-2.0%， 豆饼粉0.5-2.0%，蛋白胨0.2-2%，硫酸铵0.25-1.5%;碳酸钙0.01-0.05%，磷酸氢二钾0.0ΙΟ. 05% ， 磷酸锰0.01 -0.05% ， 氯化钙0.01 -0.05% ， 余量为水； 步骤七、将所得最终发酵液用栗输送至两效真空浓缩设备中，一效温度75-80°C，真空 度0.05-0.0551〇^，二效50-55°(：，真空度0.058-0.0651〇^，浓缩比为3-4:1，浓缩结束后按 10-20%比例加入淀粉混合均匀，用栗将物料输送至喷雾干燥塔顶部，由离心式雾化器在 15000-18000rpm下进行雾化，用进口温度为140-155 °C的热空气进行并流干燥，干燥物料经 旋风分离器引出后从接料桶中回收，即制备出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。
[0005] 有益效果是： 本发明枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂，针对饲用枯草芽孢杆菌的特点，对其进行分级 培养，结合各步骤中中药成分的添加，可增加菌种活性，延长其保持活性的周期，使所制备 的菌粉活菌数在7000-18000亿/g，保存两年仍然能保存95%菌种活性。本发明工艺中各步骤 的有机结合，保证采用的原料中药与饲用枯草芽孢杆菌相互作用，最终使所制备的饲料添 加剂适用于各种动物，包括家禽，家畜等，可促进动物肠胃对营养物质的吸收，可促进动物 健康快速生长。实验验证，本发明饲料添加剂在饲料中添加后，可明显提高动物机体的抗病 性，加快动物生长速度。且本发明饲料添加剂不含防腐剂，对畜体无损害，具有广阔的市场 应用前景。
【具体实施方式】
[0006] 实施例1 一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤： 步骤一、将饲用枯草芽孢杆菌接种在斜面种子培养基上，35°C培养48h;所述斜面种子 培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖〇. 5%，蛋白胨0.2%，牛肉膏0.5%，酵母膏0.5%， 氯化钠0.5%，琼脂1.5%，余量为水； 步骤二、从培养的新鲜斜面上挑取2-4环菌苔接种于装有50ml液体扩大培养基的250ml 三角瓶中，35°C，240rpm摇床振荡培养16h，得到种子液，备用； 所述液体扩大培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖0.5%，蛋白胨0.2%，牛肉膏 0.5%，酵母膏0.5%，氯化钠0.5%，余量为水； 步骤三、按照质量比为2:1:0.2的比例取葛根、黄精和饭麦石，置于超微粉碎机中进行 超微粉碎，过60目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉A， 备用； 步骤四、将上述培养的种子液接种到装有3L培养液的5L发酵罐中，接种量为培养液体 积的5%;接种结束后，于150rpm，1:1通风量，pH6.5，35°C条件下培养8h后，得到菌液;在菌液 中加入其重量6%的灭菌后中药粉A，搅拌均匀后，继续在于150rpm，l:l通风量，pH6.5,35°C 条件下培养8h，得到二级种子液，备用； 所述培养液中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖0.5%，豆饼粉0.5%，蛋白胨0.5%，硫 酸铵0.25%，磷酸氢二钠0.05%，磷酸二氢钠0.05%，硫酸镁0.05%，氯化钙0.01%，余量为水； 步骤五、按质量比为5:2:1的比例取陈皮、鱼腥草和山楂，置于超微粉碎机中进行超微 粉碎，过60目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉B，备用； 步骤六、将培养的二级种子液接种于装有30L液体发酵培养基的50L发酵罐中，接种量 为发酵培养基体积的5%;接种结束后按1:0.6通风量，150rpm，pH6.5，35°C培养20h，得到发 酵液;在发酵液中添加其质量2%的灭菌后中药粉B，在1:0.6通风量，150rpm，pH6.5，35 °C继 续发酵IOh得到最终发酵液，备用； 所述液体发酵培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖1.0%，淀粉0.5%，豆饼粉 0.5%，蛋白胨0.2%，硫酸铵0.25%;碳酸钙0.01%，磷酸氢二钾0.01%，磷酸锰0.01%，氯化钙 0.01%，余量为水； 步骤七、将所得最终发酵液用栗输送至两效真空浓缩设备中，一效温度75°C，真空度 0.05MPa，二效50°C，真空度0.058MPa，浓缩比为3:1，浓缩结束后按10%比例加入淀粉混合均 匀，用栗将物料输送至喷雾干燥塔顶部，由离心式雾化器在15000rpm下进行雾化，用进口温 度为140°C的热空气进行并流干燥，干燥物料经旋风分离器引出后从接料桶中回收，即制备 出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。所制备的枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂含水量小于6%， 活菌数在7000亿/g，添加剂保存两年，其中的枯草芽孢杆菌仍然能保存95%菌种活性。
[0007] 本实施例中所述饲用枯草芽孢杆菌购买自北京北纳创联生物技术研究院，菌种编 号为 BNCC189983。
[0008] 实施例2 一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤： 步骤一、将饲用枯草芽孢杆菌接种在斜面种子培养基上，37 °C培养48h;所述斜面种子 培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.5%，蛋白胨2%，牛肉霄1.5%，酵母霄1.5%，氯 化钠0.5%，琼脂2%，余量为水； 步骤二、从培养的新鲜斜面上挑取2-4环菌苔接种于装有50ml液体扩大培养基的250ml 三角瓶中，37°C，240rpm摇床振荡培养24h，得到种子液，备用； 所述液体扩大培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖1.5%，蛋白胨2%，牛肉膏 1.5%，酵母膏1.5%，氯化钠0.5%，余量为水； 步骤三、按照质量比为2:1:0.2的比例取葛根、黄精和饭麦石，置于超微粉碎机中进行 超微粉碎，过80目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉A， 备用； 步骤四、将上述培养的种子液接种到装有3L培养液的5L发酵罐中，接种量为培养液体 积的15%;接种结束后，于250rpm，1:1通风量，pH7.0，37°C条件下培养8h后，得到菌液;在菌 液中加入其重量7%的灭菌后中药粉A，搅拌均匀后，继续在于250rpm，l:l通风量，pH7.0, 37 °C条件下培养12h，得到二级种子液，备用； 所述培养液中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.5%，豆饼粉2.0%，蛋白胨2.5%，硫 酸铵1.5%，磷酸氢二钠0.20%，磷酸二氢钠0.20%，硫酸镁0.5%，氯化钙0.10%，余量为水； 步骤五、按质量比为5:2:1的比例取陈皮、鱼腥草和山楂，置于超微粉碎机中进行超微 粉碎，过80目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉B，备用； 步骤六、将培养的二级种子液接种于装有35L液体发酵培养基的50L发酵罐中，接种量 为发酵培养基体积的15%;接种结束后按1: 0.75通风量，220rpm，pH7.0，37°C培养25h，得到 发酵液;在发酵液中添加其质量2%的灭菌后中药粉B，在1: 0.75通风量，220rpm，pH7.0，37 °C继续发酵15h得到最终发酵液，备用； 所述液体发酵培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖3.0%，淀粉2.0%，豆饼粉 2.0%，蛋白胨2%，硫酸铵1.5%;碳酸钙0.05%，磷酸氢二钾0.05%，磷酸锰0.05%，氯化钙0.05%， 余量为水； 步骤七、将所得最终发酵液用栗输送至两效真空浓缩设备中，一效温度80°C，真空度 0.055MPa，二效55°C，真空度0.065MPa，浓缩比为4:1，浓缩结束后按20%比例加入淀粉混合 均匀，用栗将物料输送至喷雾干燥塔顶部，由离心式雾化器在ISOOOrpm下进行雾化，用进口 温度为155°C的热空气进行并流干燥，干燥物料经旋风分离器引出后从接料桶中回收，即制 备出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。所制备的枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂含水量小于 6%，活菌数在12000亿/g，添加剂保存两年，其中的枯草芽孢杆菌仍然能保存95%菌种活性。 [0009] 实施例3 一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤： 步骤一、将饲用枯草芽孢杆菌接种在斜面种子培养基上，36°C培养48h;所述斜面种子 培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1 .〇%，蛋白胨1.5%，牛肉霄1.0%，酵母霄1.2%， 氯化钠0.5%，琼脂1.8%，余量为水； 步骤二、从培养的新鲜斜面上挑取3环菌苔接种于装有50ml液体扩大培养基的250ml三 角瓶中，36°C，200rpm摇床振荡培养20h，得到种子液，备用； 所述液体扩大培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.2%，蛋白胨1.6%，牛肉膏 1.2%，酵母膏1.2%，氯化钠0.5%，余量为水； 步骤三、按照质量比为2:1:0.2的比例取葛根、黄精和饭麦石，置于超微粉碎机中进行 超微粉碎，过70目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉A， 备用； 步骤四、将上述培养的种子液接种到装有3L培养液的5L发酵罐中，接种量为培养液体 积的10%;接种结束后，于200rpm，1:1通风量，pH6.5-7.0，35-37°C条件下培养8h后，得到菌 液;在菌液中加入其重量6.5%的灭菌后中药粉A，搅拌均匀后，继续在于200rpm，1:1通风量， pH6.8,36°C条件下培养10h，得到二级种子液，备用； 所述培养液中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖1.0%，豆饼粉1.5%，蛋白胨1.3%，硫 酸铵1.3%，磷酸氢二钠0.15%，磷酸二氢钠0.15%，硫酸镁0.35%，氯化钙0.05%，余量为水； 步骤五、按质量比为5:2:1的比例取陈皮、鱼腥草和山楂，置于超微粉碎机中进行超微 粉碎，过70目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉B，备用； 步骤六、将培养的二级种子液接种于装有32L液体发酵培养基的50L发酵罐中，接种量 为发酵培养基体积的12%;接种结束后按1:0.70通风量，200rpm，pH6.8，36°C培养22h，得到 发酵液;在发酵液中添加其质量2%的灭菌后中药粉B，在1:0.65通风量，200rpm，pH6.8，36°C 继续发酵12h得到最终发酵液，备用； 所述液体发酵培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖2.0%，淀粉1.8%，豆饼粉 1.5%，蛋白胨1.5%，硫酸铵1.3%;碳酸钙0.03%，磷酸氢二钾0.03%，磷酸锰0.04%，氯化钙 0.04%，余量为水； 步骤七、将所得最终发酵液用栗输送至两效真空浓缩设备中，一效温度78°C，真空度 0.052MPa，二效52°C，真空度0.062MPa，浓缩比为3.5:1，浓缩结束后按15%比例加入淀粉混 合均匀，用栗将物料输送至喷雾干燥塔顶部，由离心式雾化器在17000rpm下进行雾化，用进 口温度为150°C的热空气进行并流干燥，干燥物料经旋风分离器引出后从接料桶中回收，即 制备出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。
[0010]所制备的枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂含水量小于6%，活菌数在18000亿/g，添加 剂保存两年，其中的枯草芽孢杆菌仍然能保存95%菌种活性。
[0011] 实施例4 一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤： 步骤一、将饲用枯草芽孢杆菌接种在斜面种子培养基上，37°C培养48h;所述斜面种子 培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.3%，蛋白胨1.8%，牛肉霄1.3%，酵母霄1.9%， 氯化钠0.5%，琼脂1.8%，余量为水； 步骤二、从培养的新鲜斜面上挑取4环菌苔接种于装有50ml液体扩大培养基的250ml三 角瓶中，36°C，190rpm摇床振荡培养22h，得到种子液，备用； 所述液体扩大培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.4%，蛋白胨1.7%，牛肉膏 1.2%，酵母膏1.3%，氯化钠0.5%，余量为水； 步骤三、按照质量比为2:1:0.2的比例取葛根、黄精和饭麦石，置于超微粉碎机中进行 超微粉碎，过77目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉A， 备用； 步骤四、将上述培养的种子液接种到装有3L培养液的5L发酵罐中，接种量为培养液体 积的13%;接种结束后，于190rpm，1:1通风量，pH 6.9，35-37°C条件下培养8h后，得到菌液； 在菌液中加入其重量6.7的灭菌后中药粉A，搅拌均匀后，继续在于230rpm，1:1通风量， pH6.8,36°C条件下培养llh，得到二级种子液，备用； 所述培养液中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖1.3%，豆饼粉1.7%，蛋白胨2.3%，硫 酸铵1.08%，磷酸氢二钠0.13%，磷酸二氢钠0.13%，硫酸镁0.58%，氯化钙0.07%，余量为水； 步骤五、按质量比为5:2:1的比例取陈皮、鱼腥草和山楂，置于超微粉碎机中进行超微 粉碎，过77目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉B，备用； 步骤六、将培养的二级种子液接种于装有33L液体发酵培养基的50L发酵罐中，接种量 为发酵培养基体积的12%;接种结束后按1: 0.68通风量，21Orpm，pH6.7，35-37°C培养23h，得 到发酵液;在发酵液中添加其质量2%的灭菌后中药粉B，在1:0.69通风量，210rpm，pH6.8， 35-37Γ继续发酵12h得到最终发酵液，备用； 所述液体发酵培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖2.4%，淀粉1.8%，豆饼粉 1.7%，蛋白胨1.7%，硫酸铵1.8%;碳酸钙0.03%，磷酸氢二钾0.04%，磷酸锰0.04%，氯化钙 0.04%，余量为水； 步骤七、将所得最终发酵液用栗输送至两效真空浓缩设备中，一效温度77°C，真空度 0.053MPa，二效53 °C，真空度0.062MPa，浓缩比为3.7:1，浓缩结束后按18%比例加入淀粉混 合均匀，用栗将物料输送至喷雾干燥塔顶部，由离心式雾化器在17000rpm下进行雾化，用进 口温度为145°C的热空气进行并流干燥，干燥物料经旋风分离器引出后从接料桶中回收，即 制备出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。
[0012]所制备的枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂含水量小于6%，活菌数在14000亿/g，添加 剂保存两年，其中的枯草芽孢杆菌仍然能保存95%菌种活性。
[0013] 相关动物实验 采用由本发明中的嗜酸乳杆菌饲料添加剂，对其效果进行相关实验验证。选300只刚断 奶的仔羊，平均分成三组，每组100只，分别为试验组、对照组和空白组，三组饲喂不同的嗜 酸乳杆菌饲料添加剂，试验组在断奶后饲喂的添加本发明所制备的嗜酸乳杆菌饲料添加剂 的饲料，对照组饲喂的饲料中添加普通饲料添加剂，空白组饲喂的羊饲料中不添加饲料添 加剂。空白组、试验组和对照组饲喂断奶仔羊在其他条件完全相同的环境中让仔羊尽可能 高性能生长，统计断奶后6周的生长过程中断奶仔羊的平均日采食量、平均日增重和平均生 病率，其中平均生病率为一组仔羊6周所有生病次数与仔羊数量的比值。经统计，结果如表1 所示：
由以上数据可知，试验组的仔羊的平均日采食量和平均日增重均较对照组和空白组 高，平均生病率明显较低，本发明制备的嗜酸乳杆菌饲料添加剂可明显增加动物体重，提高 免疫力，有效减轻食欲不振、消化不良、饲料利用率低、抗病力下降、生长缓慢、甚至死亡等 问题，从而提高仔羊的生长性能。对动物的生长，具有明显的促进作用。
[0014] 本发明中所述饲用枯草芽孢杆菌为普通菌株，可通过市场购买得到。
【主权项】
1. 一种枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂的制备方法，其特征在于:包括以下步骤： 步骤一、将饲用枯草芽孢杆菌接种在斜面种子培养基上，35-37 tC培养48h;所述斜面种 子培养基中各成分的质量百分比含量为：葡萄糖〇 . 5-1.5%，蛋白胨O . 2-2%，牛肉膏O . 5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化钠0.5%，琼脂1.5-2%，余量为水； 步骤二、从培养的新鲜斜面上挑取2-4环菌苔接种于装有50ml液体扩大培养基的250ml 三角瓶中，35-37°C，180-240rpm摇床振荡培养16-24h，得到种子液，备用； 所述液体扩大培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖〇. 5-1.5%，蛋白胨0.2-2%， 牛肉膏0.5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化钠0.5%，余量为水； 步骤三、按照质量比为2:1:0.2的比例取葛根、黄精和饭麦石，置于超微粉碎机中进行 超微粉碎，过60-80目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉 A，备用； 步骤四、将上述培养的种子液接种到装有3L培养液的5L发酵罐中，接种量为培养液体 积的5-15%;接种结束后，于150-250rpm，1:1通风量，pH6.5-7.0，35-37°C条件下培养8h后， 得到菌液;在菌液中加入其重量6%-7%的灭菌后中药粉，搅拌均匀后，继续在于150-250rpm， 1:1通风量，pH6.5-7.0，35-37 °C条件下培养8-12h，得到二级种子液，备用； 所述培养液中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖0.5-1.5%，豆饼粉0.5-2.0%，蛋白胨 0 · 5-2 · 5%，硫酸铵0 · 25-1 · 5%，磷酸氢二钠 0 · 05-0 · 20%，磷酸二氢钠0 · 05-0 · 20%，硫酸镁 0 · 05-0 · 5%，氯化钙0 · 01 -0 · 10%，余量为水； 步骤五、按质量比为5:2:1的比例取陈皮、鱼腥草和山楂，置于超微粉碎机中进行超微 粉碎，过60-80目筛，将所得中药粉进行高温湿热灭菌，冷却至室温，得到灭菌后中药粉B，备 用； 步骤六、将培养的二级种子液接种于装有30-35L液体发酵培养基的50L发酵罐中，接种 量为发酵培养基体积的5-15%;接种结束后按1:0.6-0.75通风量，150-220rpm，pH6.5-7.0， 35-37 °C培养20-25h，得到发酵液;在发酵液中添加其质量2%的灭菌后中药粉B，在1:0.6- 0.75通风量，150-220rpm，pH6.5-7.0，35-37°C继续发酵10_15h得到最终发酵液，备用； 所述液体发酵培养基中各成分的质量百分比含量为:葡萄糖1.0-3.0%，淀粉0.5-2.0%， 豆饼粉0.5-2.0%，蛋白胨0.2-2%，硫酸铵0.25-1.5%;碳酸钙0.01-0.05%，磷酸氢二钾0.0ΙΟ. 05% ， 磷酸锰0.01 -0.05% ， 氯化钙0.01 -0.05% ， 余量为水； 步骤七、将所得最终发酵液用栗输送至两效真空浓缩设备中，一效温度75-80°C，真空 度0.05-0.0551〇^，二效50-55°(：，真空度0.058-0.0651〇^，浓缩比为3-4:1，浓缩结束后按 10-20%比例加入淀粉混合均匀，用栗将物料输送至喷雾干燥塔顶部，由离心式雾化器在 15000-18000rpm下进行雾化，用进口温度为140-155 °C的热空气进行并流干燥，干燥物料经 旋风分离器引出后从接料桶中回收，即制备出枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂。2. 如权利要求1所述枯草芽孢杆菌中药饲料添加剂所的制备方法所制备的枯草芽孢杆 菌中药饲料添加剂，其特征在于:含水量小于6%，活菌数为10000-18000亿/g。
【文档编号】A23K10/18GK105941835SQ201610500906
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】岳占州, 王新昌, 安建军, 杨雪莲, 岳朝鹏, 张亚飞
【申请人】河南省岳氏精忠科技有限公司