含有枯草芽孢杆菌bab-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种复配杀菌剂及其应用，尤其涉及一种含有枯草芽孢杆菌BAB-I和 啶酰菌胺的复配杀菌剂及其在防治番茄灰霉病和叶霉病中的应用。
【背景技术】
[0002] 灰霉病是由灰葡萄孢（Botrytiscinerea)引起的一种真菌性病害，灰葡萄孢可 以侵染番茄、草莓、黄瓜、瓠瓜、菊花、苹果、西萌芦和葡萄等200多种植物，引起灰霉病的发 生。灰霉病是一种世界性的重要病害，在设施果蔬上危害尤为严重。
[0003]叶霉病是番茄生产上另一种真菌性病害，主要危害叶片，严重时也可以为害茎、 花、果实等。病斑多从下部叶片开始逐渐向上蔓延，严重时可引起全叶干枯卷曲，造成植株 早衰，影响番茄的产量和质量。
[0004] 由于种质资源中尚无抗灰霉病的材料和品种，生产上主要以化学防治为主，辅以 生物及生态防治。目前，化学防治是防治灰霉病的重要手段，但灰葡萄孢具有繁殖快，遗传 变异大和适合度高的特点，连续使用同一药剂易产生抗药性。生产上，防治灰霉病常用的化 学杀菌剂如苯并咪唑类的多菌灵、二甲酰亚胺类的腐霉利、苯胺基嘧啶类的嘧霉胺等均因 灰葡萄孢抗药性的产生而防治效果大大降低。若为提高防效随意加大用药量，其结果是不 但没有有效控制灰霉病的发生，反而提高了果蔬中农残的风险，加大了农药对环境的污染。
[0005]随着人们对食品安全关注度的提高，生物防治因对人畜安全、环境兼容性好、病菌 不易产生抗药性等特点，已日益引起人们的重视。特别是枯草芽孢杆菌，由于其能够产生多 种抗菌物质，防效明显，目前国内外已有很多优良的枯草芽孢杆菌菌株应用于生产实践。生 物农药对于减少农田化学农药污染、保障农产品质量安全具有重要意义。但是，生物防治也 存在一些不足，如田间防治效果不稳定、田间药效作用缓慢等，严重影响了其推广使用。
[0006] 为了弥补生物防治与化学防治的不足，开展生防微生物与低毒化学药剂协同控制 番茄灰霉病的技术研究，既能发挥化学药剂高效、快速的抑菌作用，又能发挥生防微生物在 诱导植物抗病性、持久的控番茄灰霉病的流行的目的。
[0007] 啶酰菌胺（Boscalid)是由德国巴斯夫公司开发的新型烟酰胺类杀菌剂，主要用 于防治灰霉病、白粉病、各种腐烂病、褐腐病和根腐病等。啶酰菌胺属于线粒体呼吸链中琥 珀酸辅酶Q还原酶抑制剂，对孢子的萌发有很强的抑制能力，且与其它杀菌剂无交互抗性。 另外啶酰菌胺的毒性也很低，对雄雌大鼠、小鼠急性经口LD5。均大于5000mg/kg。对雄雌大 鼠急性经皮LD5。均>2000mg/kg。对雄雌小鼠急性吸入LD5。>6. 7mg/kg。对兔眼睛和皮肤试 验无刺激。豚鼠试验无致敏性。对蜜蜂、鸟、蚯蚓、蚕等均无影响。对蜜蜂和鸟类在喷洒液 干燥后即可放饲。同时，对各种天敌亦无影响。
[0008] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于：针对目前生产上大量使用化学农药防治番茄灰霉病和叶霉病 引发病原菌的抗性、严重污染环境、导致农药残留超标、影响番茄品质等问题，提供一种对 番茄灰霉病和叶霉病具有良好防治效果的含有枯草芽孢杆菌BAB-I和啶酰菌胺的复配杀 菌剂及其应用。本发明所述复配杀菌剂将枯草芽孢杆菌BAB-I与啶酰菌胺复配后，形成优 势互补的作用，既能发挥啶酰菌胺的高效、快速的抑菌作用及对灰霉病和叶霉病的治疗作 用，又能发挥枯草芽孢杆菌BAB-I在诱导番茄抗性及对灰霉病和叶霉病的保护等作用。通 过使用该复配杀菌剂，在番茄种植环境中引进大量有益微生物，恶化病原菌的生存环境，结 合栽培管理等农业措施，形成一个稳定的、平衡的、生物多样性的生态系统，达到提高药效、 减少化学农药使用量、持久的控制番茄灰霉病和叶霉病流行的目的。
[0010] 本发明所述枯草芽孢杆菌BAB-I由河北省农林科学院植物保护研究所筛选获得。 所述枯草芽孢杆菌BAB-I于2007年7月6日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心，保藏编号为CGMCCNo. 2099;拉丁学名为：BacillussubtilisBAB-U以下简 称BAB-1)。该菌株具有高效、抑菌谱广、使用简单、成本低、无环境污染等特点，可用于番茄 灰霉病和叶霉病的防治。枯草芽孢杆菌BAB-I对化学药剂啶酰菌胺具有天然抗性的，该菌 株可以在啶酰菌胺含量为1000yg/mL的LB培养基上生长。因而可以将枯草芽孢杆菌BAB-I 与啶酰菌胺复配成杀菌剂，实现二者长期共存。
[0011] 实现本发明的技术方案如下：一种含有枯草芽孢杆菌BAB-I和啶酰菌胺的复配杀 菌剂，其活性成分由枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis)BAB-l和啶酰菌胺组成。
[0012] 优选地，所述枯草芽孢杆菌BAB-I为其菌体和/或其代谢产物。
[0013] 优选地，所述枯草芽孢杆菌BAB-I为其发酵液或其冻干菌粉；进一步优选所述 发酵液的活菌总数为7XIO9~IX10wCFlVmL;进一步优选所述冻干菌粉的活菌总数为 I. 8X101°~2. 4X10wCFlVg13优选地，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-I的重 量比为1~99 : 99~1;进一步优选重量比为1~9 : 9~1;较佳重量比为1~4 : 4~ 1〇
[0014] 具体地，一种含有枯草芽孢杆菌BAB-I和啶酰菌胺的复配杀菌剂，以重量份计，其 原料含有以下组分：上述活性成分10~80份，分散剂1~8份，润湿剂1~8份，填料10~ 80份；优选其原料含有以下组分：活性成分40~70份，分散剂3~7份，润湿剂3~7份， 填料20~50份；更优选其原料含有以下组分：活性成分50~60份，分散剂4~6份，润湿 剂4~6份，填料30~40份。
[0015] 优选地，所述啶酰菌胺为质量浓度98%啶酰菌胺原药。
[0016]优选地，所述分散剂为木质素磺酸钠盐、羧甲基纤维素钠盐、脱糖木质素磺酸钠、 亚硫酸纸浆废液、烷基酚聚氧乙烯醚、乙二醇单丁基醚、聚氧乙基烷基醚、壬基酚聚氧乙烯 醚、十二烷基苯磺酸钠中的一种或多种的混合物。
[0017] 优选地，所述的润湿剂为二丁基萘磺酸钠（拉开粉BX)、润湿剂wgwinD30、脂肪醇 聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠盐、烷基酚聚氧乙烯基甲醛缩合物磺酸盐 中的一种或多种的混合物。
[0018] 优选地，所述填料为白炭黑、高岭土、轻钙、硅藻土、轻质碳酸钙、膨润土中的一种 或多种的混合物。
[0019] 具体地，一种含有枯草芽孢杆菌BAB-I和啶酰菌胺的复配杀菌剂，以重量份计，含 有以下组分：质量浓度98%的啶酰菌胺原药：20. 41份；枯草芽孢杆菌BAB-I冻干菌粉（活 菌总数为2.OXIOwCFlVg) :40份；分散剂羧甲基纤维素钠盐：3份；润湿剂：十二烷基磺酸 钠：4. 5份；填料轻质碳酸钙：32. 09份。以此配方可按下述方法制得20%啶酰菌胺? 80亿 枯草芽孢杆菌BAB-I可湿性粉剂。
[0020] 本发明所述重量份可以是yg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可以是其倍 数，如 1/10、1/100、10 倍、100 倍等。
[0021] 本发明所述含有枯草芽孢杆菌BAB-I和啶酰菌胺的复配杀菌剂可按现有技术方 法制备成液体制剂或可湿性粉剂。
[0022] 本发明还提供上述含有枯草芽孢杆菌BAB-I和啶酰菌胺的复配杀菌剂的制备方 法包括：按照上述配比将各种组分混合搅拌后，进行一级气流粉碎（颗粒细度达到80目）； 混合搅拌后，再进行二级气流粉碎（颗粒细度达到325目），即得。
[0023] 本发明所述枯草芽孢杆菌BAB-I冻干菌粉可由枯草芽孢杆菌BAB-I发酵液按 现有技术常规方法制得。所述枯草芽孢杆菌BAB-I发酵液可由现有技术如中国专利 CN200710121275. 0记载的方法制得；或者按以下方法制得。
[0024] -种枯草芽孢杆菌BAB-I发酵液的制备方法，包括以下步骤：首先将BAB-I菌种在 LB平板中活化，挑取单菌落划线到苛氏瓶中，3天后用无菌水将菌苔洗出接种至种子罐