本发明属于微生物技术领域，具体是一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法。
背景技术：
小球藻是一种具有重要经济价值的生物资源，有着巨大的应用和开发潜力。小球藻富含蛋白质、不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、叶黄素、虾青素和多种维生素，具有极高的营养价值和提高免疫力的功能。
苹果渣是新鲜苹果经破碎压榨提汁后的剩余物，含有可溶性糖、维生素、矿物质及纤维素等丰富的营养物质，是良好的饲料资源。经测定在苹果渣皮中，果皮果肉占96.2％，果籽占3.1％，果梗占0.7％，苹果渣的无氮浸出物为61.5％其中总糖15.1％，粗脂肪6.8％，粗蛋白含量6.2％。粗纤维中除了少量的果壳，果梗为木质素外，果肉、果皮多为半纤维素和纤维素。
现有技术主要将鲜苹果渣加工成苹果渣干粉用作配制全价料或颗粒料，如中国专利CN1363228A公开了一种苹果渣饲料及其制备方法，另外也有利用新鲜苹果渣发酵做酒精的方法，如中国专利CN103160545A公开了一种利用苹果皮渣生产酒精的方法，虽然现有方法能够有效的利用苹果渣，但是依然有大量苹果渣被浪费，没有充分利用。
目前异养培养小球藻一般都采用人工配制培养液，也有利用生产加工废弃物进行培养的，如中国专利CN102746992B公开了一种利用泥污水解液异养培养小球藻的方法，与本发明无关。查阅现有家属未见关于利用苹果渣异养培养小球藻的方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术存在的上述空缺，提供一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，该方法通过水解苹果渣然后添加其他营养物质，制作成小球藻异养培养液，即能够消耗大量苹果渣使其充分被利用，也克服了传统异养培养小球藻成本高的问题。
为实现上述目的，本发明提供的具体技术方案是：一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，是按照以下步骤进行的：
1)苹果渣水解：将新鲜的苹果渣干燥粉碎后加入水和纤维素酶进行水解，得到的水解溶液经过高温灭酶后，得到苹果渣水解液；
2)制做培养液：向步骤1)得到的苹果渣水解液中添加微量元素和其它营养元素，再加入碱液调节溶液pH至7.5～8.5，然后进行高压蒸汽消毒灭菌，得到小球藻异养培养液；
3)小球藻异养培养：将步骤2)得到的消毒灭菌后的培养液密封冷却至室温，然后再超净工作台中将小球藻按体积百分比15～20％接种到培养液中，振荡培养100～150小时。
所述的一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，其中步骤1)苹果渣水解的pH值为4.5～5.5，温度为55～65摄氏度，水解时间10～12小时，纤维素酶的浓度为20～30EGU/g。
所述的一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，其中步骤1)高温灭酶的方法是将水解溶液加热至85～95摄氏度，保持温度10～15分钟使纤维素酶失活。
所述的一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，其中步骤2)添加的微量元素是微量元素A5溶液，添加量为1mL/L，其他元素添加量为1mL/L。
所述的一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，其中步骤2)添加的碱液可以是NaOH和Na2CO3/NaHCO3一种或几种混合。
所述的一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，其中步骤2)得到的培养液中苹果渣水解液浓度为4～6g/L，其余为蒸馏水，培养液N/P是20。
所述的一种用苹果渣为原料异养培养小球藻的方法，其中步骤3)小球藻异养培养的条件是光照0lux，温度25～30摄氏度，振荡频率100～150rpm。
本发明的有益效果是：
本发明以苹果渣为原料，通过水解得到苹果渣水解液，再向苹果渣水解液中加入一定量的微量元素及其它元素，通过简单处理得到小球藻异养培养液急性小球藻培养，苹果渣水解得到大量的三碳糖和五碳糖，为小球藻异养生长提供充足的碳源，能够节省小球藻的培养成本，为培养小球藻提供了廉价的原料，同时充分利用苹果渣中的营养成分，变废为宝，减轻环境污染，实现苹果渣的资源回收和利用。
具体实施方式
实施例1
1)苹果渣水解：将新鲜的苹果渣干燥粉碎后加入一定量水和浓度为20EGU/g的纤维素酶，在pH值为5温度60摄氏度条件下水解时间10小时，得到的水解溶液经过90摄氏度恒温10分钟高温灭酶后，得到苹果渣水解液；
2)制做培养液：向步骤1)得到的苹果渣水解液中添加1mL/L微量元素A5溶液，和1mL/L其它营养元素，再加入NaOH调节溶液pH至8，然后进行高压蒸汽消毒灭菌，得到小球藻异养培养液，其中苹果渣水解液浓度为5g/L，培养液N/P是20；
3)小球藻异养培养：将步骤2)得到的消毒灭菌后的培养液密封冷却至室 温，然后再超净工作台中将小球藻按体积百分比20％接种到培养液中，在0lux，25摄氏度150rpm振荡培养150小时。
实施例2：本实施例与实施例1不同的是，步骤1)添加的纤维素酶浓度为30EGU/g，其它与实施例1相同。
实施例3：本实施例与实施例1不同的是，步骤2)调节pH的碱液为Na2CO3溶液，其它与实施例1相同。
实施例4：本实施例与实施例1不同的是，步骤2)调节pH的碱液为NaHCO3溶液，其它与实施例1相同。
实施例5：本实施例与实施例1不同的是，步骤2)调节pH的碱液为Na2CO3/NaHCO3的混合溶液，其它与实施例1相同。