肺癌相关microRNA检测试剂盒的制作方法

文档序号:11145684阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,包括有:针对每种待检测的肺癌相关microRNA有至少一条一级信号放大探针、至少一条二级信号放大探针、和至少一条三级信号放大探针,以及捕获探针,所述肺癌相关microRNA选自hsa-miR-486-5p、hsa-miR-29a-5p、hsa-miR-542-5p、hsa-miR-502-3p、hsa-miR-376a-3p、hsa-miR-500a-5p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-10b-5p、hsa-mir-34a、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-106a-5p、hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-205-5p、hsa-miR-212-3p以及hsa-miR-214-3p中的至少一种,其中:

所述捕获探针用于连接目标核酸与一级信号放大探针,每条捕获探针从5’端到3’端依次为特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列,针对不同目标基因的P2序列互不相同;

所述一级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P4序列、间隔臂序列、P3序列,P3序列与P2序列互补配对;

所述二级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P5序列、间隔臂序列、P6序列;

所述P4序列含有至少一个与P5序列互补配对的碱基片段,且每个与P5序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列;

所述三级信号放大探针从5’端到3’端依次为:P8序列、间隔臂序列、P7序列,所述P8序列5’端还修饰有荧光基团,针对不同目标核酸的荧光基团的颜色互不相同或发射波长互不相同;

所述P6序列含有至少一个与P7序列互补配对的碱基片段,且每个与P7序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列;

所述P2序列、P3序列、P4序列、P5序列、P6序列、P7序列、P8序列均为不存在发夹结构,各探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配,与整个检测体系的其它核酸之间均不存在特异性结合的序列。

2.根据权利要求1所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述待检测的肺癌相关miRNA的捕获探针的P1序列选自以下中的至少一种:针对hsa-miR-486-5p的SEQ ID NO.1,针对hsa-miR-29a-5p的SEQ ID NO.2,针对hsa-miR-542-5p的SEQ ID NO.3,针对hsa-miR-502-3p的SEQ ID NO.4,针对hsa-miR-376a-3p的SEQ ID NO.5,针对hsa-miR-500a-5p的SEQ ID NO.6,针对hsa-miR-424-5p的SEQ ID NO.7,针对hsa-miR-10b-5p的SEQ ID NO.8,针对hsa-mir-34a的SEQ ID NO.9,针对hsa-miR-141-3p的SEQ ID NO.10,针对hsa-miR-155-5p的SEQ ID NO.11,针对hsa-miR-17-3p的SEQ ID NO.12,针对hsa-miR-21-5p的SEQ ID NO.13,针对hsa-miR-106a-5p的SEQ ID NO.14,针对hsa-miR-146a-5p的SEQ ID NO.15,针对hsa-miR-191-5p的SEQ ID NO.16,针对hsa-miR-192-5p的SEQ ID NO.17,针对hsa-miR-203a-3p的SEQ ID NO.18,针对hsa-miR-205-5p的SEQ ID NO.19,针对hsa-miR-212-3p的SEQ ID NO.20,以及针对hsa-miR-214-3p的SEQ ID NO.21。

3.根据权利要求2所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述P2序列选自:SEQ ID NO.22~SEQ ID NO.43;所述P5序列选自:SEQ ID NO.66~SEQ ID NO.87,所述P7序列选自SEQ ID NO.110~SEQ ID NO.131;所述P4序列中的所述间隔臂序列为3—10个T;所述P6序列的所述间隔臂序列为2—10个T,P8序列为polyT。

4.根据权利要求3所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述polyT为3-10个T。

5.根据权利要求3所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述P4序列选自:SEQ ID NO.44~SEQ ID NO.65,所述P6序列选自:SEQ ID NO.88~SEQ ID NO.109。

6.根据权利要求1-5任一项所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述一级信号放大探针中所述P4序列与P3序列之间的间隔臂序列选自5-20个T;二级信号放大探针中所述P5序列与P6序列之间的间隔臂序列选自5-10个T;三级信号放大探针中P7序列与P8序列之间的间隔臂序列选自3-10个T。

7.根据权利要求1-5任一项所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述荧光基团选自:FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red、LC RED640、Cy5、LC RED705和Alexa Fluor 488。

8.根据权利要求1-5任一项所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述P2序列为:针对hsa-miR-486-5p的SEQ ID NO.22,针对hsa-miR-29a-5p的SEQ ID NO.23,针对hsa-miR-542-5p的SEQ ID NO.24,针对hsa-miR-502-3p的SEQ ID NO.25,针对hsa-miR-376a-3p的SEQ ID NO.26,针对hsa-miR-500a-5p的SEQ ID NO.27,针对hsa-miR-424-5p的SEQ ID NO.28,针对hsa-miR-10b-5p的SEQ ID NO.29,针对hsa-mir-34a的SEQ ID NO.30,针对hsa-miR-141-3p的SEQ ID NO.31,针对hsa-miR-155-5p的SEQ ID NO.32,针对hsa-miR-17-3p的SEQ ID NO.33,针对hsa-miR-21-5p的SEQ ID NO.34,针对hsa-miR-106a-5p的SEQ ID NO.35,针对hsa-miR-146a-5p的SEQ ID NO.36,针对hsa-miR-191-5p的SEQ ID NO.37,针对hsa-miR-192-5p的SEQ ID NO.38,针对hsa-miR-203a-3p的SEQ ID NO.39,针对hsa-miR-205-5p的SEQ ID NO.40,针对hsa-miR-212-3p的SEQ ID NO.41,以及针对hsa-miR-214-3p的SEQ ID NO.42。

9.根据权利要求1-5任一项所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述P5序列为:针对hsa-miR-486-5p的SEQ ID NO.66,针对hsa-miR-29a-5p的SEQ ID NO.67,针对hsa-miR-542-5p的SEQ ID NO.68,针对hsa-miR-502-3p的SEQ ID NO.69,针对 hsa-miR-376a-3p的SEQ ID NO.70,针对hsa-miR-500a-5p的SEQ ID NO.71,针对hsa-miR-424-5p的SEQ ID NO.72,针对hsa-miR-10b-5p的SEQ ID NO.73,针对hsa-mir-34a的SEQ ID NO.74,针对hsa-miR-141-3p的SEQ ID NO.75,针对hsa-miR-155-5p的SEQ ID NO.76,针对hsa-miR-17-3p的SEQ ID NO.77,针对hsa-miR-21-5p的SEQ ID NO.78,针对hsa-miR-106a-5p的SEQ ID NO.79,针对hsa-miR-146a-5p的SEQ ID NO.80,针对hsa-miR-191-5p的SEQ ID NO.81,针对hsa-miR-192-5p的SEQ ID NO.82,针对hsa-miR-203a-3p的SEQ ID NO.83,针对hsa-miR-205-5p的SEQ ID NO.84,针对hsa-miR-212-3p的SEQ ID NO.85,以及针对hsa-miR-214-3p的SEQ ID NO.86。

10.根据权利要求1-5任一项所述的肺癌相关microRNA检测试剂盒,其特征在于,所述P7序列为:针对hsa-miR-486-5p的SEQ ID NO.110,针对hsa-miR-29a-5p的SEQ ID NO.111,针对hsa-miR-542-5p的SEQ ID NO.112,针对hsa-miR-502-3p的SEQ ID NO.113,针对hsa-miR-376a-3p的SEQ ID NO.114,针对hsa-miR-500a-5p的SEQ ID NO.115,针对hsa-miR-424-5p的SEQ ID NO.116,针对hsa-miR-10b-5p的SEQ ID NO.117,针对hsa-mir-34a的SEQ ID NO.118,针对hsa-miR-141-3p的SEQ ID NO.119,针对hsa-miR-155-5p的SEQ ID NO.120,针对hsa-miR-17-3p的SEQ ID NO.121,针对hsa-miR-21-5p的SEQ ID NO.122,针对hsa-miR-106a-5p的SEQ ID NO.123,针对hsa-miR-146a-5p的SEQ ID NO.124,针对hsa-miR-191-5p的SEQ ID NO.125,针对hsa-miR-192-5p的SEQ ID NO.126,针对hsa-miR-203a-3p的SEQ ID NO.127,针对hsa-miR-205-5p的SEQ ID NO.128,针对hsa-miR-212-3p的SEQ ID NO.129,以及针对hsa-miR-214-3p的SEQ ID NO.130。

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