Nicardipine在制备抗肺癌产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种Nicardipine在制备抗肺癌产品中的应 用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是威胁人类健康的最常见也是最严重的一种疾病，研发高效抗肿瘤药物对延 长患者的生存周期至关重要。近年来，随着肿瘤基因组学学和分子药理学的飞速发展，新型 抗肿瘤药物的研发取得了不错的成果，但由于新药研发投入大，周期长等瓶颈无法克服，以 及肿瘤个体遗传变异大等特征，导致许多传统抗肿瘤药物效果不加，新药价格昂贵，副作用 未明。
[0003] Barabasi AL等研宄者在2011年发表于《Nature Reviews Genetics》的论文中指 出，基于GWAS研宄结果和互作组学（interactome)策略开展的分子网络分析有望揭示复杂 疾病新的药物靶点和分子标志物，并最终形成对疾病发病机制和治疗方案全新的认识。更 值得注意的是，药物重定位（drug repositioning)研宄发现，GWAS研宄锁定的易感基因及 与其有蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction, PPI)的基因更容易成为药物 间接的靶点，这一发现有助于解释现有药物的作用机制并指导新药的研发。2014年，Okada Y等研宄者在《Nature》上发表的论文中显示GWAS研宄结果整合分析得到的类风湿性关节 炎的101个易感基因中有98个目前正用于治疗类风湿性关节炎药物的直接或间接靶标，而 且还通过药物重定位研宄，他们还发现了数十个已获批准用于其他适应症的药物也可用于 治疗类风湿性关节炎。
【发明内容】
[0004] 本研宄正是通过整合癌症组学Cosmic version72数据库的癌症基因谱Cancer Gene Census 以及蛋白质相互作用 STRING version 10 数据库和 DrugBankversion4. 2 中 FDA批准的药物数据库，获得的候选重定位药物，对肿瘤细胞系进行筛查实验，筛选出新的 抗肿瘤药物。做肿瘤细胞系筛选的候选肿瘤抑制药物见如下：
[0005] Nicardipine, Promethazine, Estrone, Nicardipine, Sunlidac, Nicardipine, Et on ogestrel, Levonorgestrel, Mesalazine, Indomethacin, Sulfasalazine, Balsalazide, Irbesartan, Ibuprofen, Isoprenaline, Pentosan Polysulfate。
[0006] 本发明的一个目的是提供Nicardipine的新用途。
[0007] 本发明提供的Nicardipine在制备治疗肺癌产品中的应用。
[0008] 本发明的第二个目的是提供Nicardipine的新用途。
[0009] 本发明提供了 Nicardipine在制备抑制肺癌细胞增殖产品中的应用。
[0010] 本发明的第三个目的是提供Nicardipine的新用途。
[0011] 本发明提供了 Nicardipine在制备降低肺癌细胞IC50值产品中的应用。
[0012] 上述应用中，所述肺癌细胞为小细胞肺癌或非小细胞肺癌；所述肺癌细胞为小细 胞肺癌细胞或非小细胞肺癌细胞；所述非小细胞肺癌细胞具体为NCI-H524 ;所述小细胞肺 癌细胞具体为NCI-H446。
[0013] 上述应用中，所述产品为药物或试剂盒。
[0014] 本发明的第四个目的是提供一种产品。
[0015] 本发明提供的产品，其活性成分为Nicardipine ;所述产品具有如下至少一种功 能：
[0016] 1)治疗肺癌；
[0017] 2)抑制肺癌细胞增殖；
[0018] 3)降低肺癌细胞IC50值。
[0019] 上述产品中，所述肺癌细胞为小细胞肺癌或非小细胞肺癌；所述肺癌细胞为小细 胞肺癌细胞或非小细胞肺癌细胞；所述非小细胞肺癌细胞具体为NCI-H524 ;所述小细胞肺 癌细胞具体为NCI-H446。
[0020] 上述产品中，所述产品为药物或试剂盒。
[0021] 本发明的实验证明，本发明对FDA, CFDA已获批准的药物Nicardipine进行肿瘤药 物重定位，根据肿瘤不同的细胞系（组织类型）以及突变位点对适应症不是抗肿瘤的药物 进行筛选，发现Nicardipine抗小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌这种新用途，实现旧药新 用。
【附图说明】
[0022] 图1为96孔培养板药筛药物板型分布。
[0023] 图 2 为 Nicardipine 对非小细胞肺癌敏感；EC50 = 20. 2548 ;IC50 = 18. 5548 ;R2 =0. 9866。
[0024] 图 3 为 Nicardipine 对小细胞肺癌敏感；EC50 = 18. 0489 ;IC50 = 18. 4046 ;R2 = 0.9998〇
【具体实施方式】
[0025] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0026] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0027] 下述实施例中待测药物为Nicardipine，其化学结构式如下：
[0028]
其为drug bank产品，产品目录号为 DB00622(APRD00088)。
[0029] 下面实施例中的人非小细胞肺癌细胞NCI-H524和人小细胞肺癌细胞NCI-H446、 人肝癌细胞SNU-449和人肺癌细胞NCI-H810的出处如下：。
[0030]
[0031] 下面实施例中的主要的仪器及耗材
[0032] DMSO(from Sigma, Cat. No. D4540)
[0033] 96-well 白色底透细胞培养板（from Corning, Cat. No. 3610)
[0034] CellTiter Glo 试剂盒（from Promega, Cat. No. G7573)
[0035] Doxorubicin 阳性药（from MCE, Cat. No. HY-I5I42)
[0036] Fetal Bovine Serum(from Gibco, Cat#10099141)
[0037] 100mm 培养皿（from Corning, Cat#430167)
[0038] RPMI-1640medium(from Gibco, Cat#A1049101)
[0039] DMEM medium(from Gibco, Cat#l1995081)
[0040] DMEM/F12medium(from Gibco, Cat#l1330057)
[0041] EMEM medium(from Gibco, Cat#10370021)
[0042] Mutidrop 384 细胞分液器（Thermo, Cat#5840150)
[0043] EnSpire 多功能读板机（Perkin Elmer, Cat#2300_001M)
[0044] 实施例1、CELLTITER-GL0检测Nicardipine抗非小细胞肺癌
[0045] -、待测孔板的制备
[0046] 1、细胞铺板
[0047] a)配制各个细胞所需完全培养基
[0048] b)实验开始前，确认标记在IOOmrn培养皿上的药筛细胞名字，培养基以及传代时 间，代次等信息，确保实验无误。
[0049] c)贴壁细胞操作参考步骤d)到i)，悬浮细胞操作参考步骤j)到1)。
[0050] d)无菌操作时利用真空泵吸取细胞培养基。
[0051] e)用2ml的无菌PBS溶液润洗细胞表层，再用真空泵吸出PBS废液。
[0052] f)向培养皿轻轻加入 Iml 0· 25% (w/v) Trypsin-0. 038% (w/v) EDTA 溶液消化细 胞，轻轻混匀几下，溶液覆盖住细胞表层，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，在细胞将要 脱落时终止胰酶消化作用。
[0053] g)向培养皿中加入5ml 37°C预热好的完全培养基，用移液管轻轻吹打细胞，使其 从培养皿底部脱落下来。
[0054] h)将此细胞悬液转移到15ml或50ml无菌离心管中，1000 rpm离心5min。
[0055] i)利用真空泵无菌操作吸出上清培