1.DNA测序方法,依次包括如下步骤:
(1)在待测DNA的3’末端增加标签序列,形成含有标签序列的待测DNA;所述标签序列的核苷酸序列与测序引物的核苷酸序列反向互补;
(2)将所述含有标签序列的待测DNA和所述测序引物混合,形成5’末端双链主体单链形式的产物;
(3)完成步骤(2)后,将产物分别与dATP、dCTP、dTTP和dGTP混合,得到四个体系,分别将每个体系加入特异DNA聚合酶修饰的单分子器件,读取电信号,与其它三个体系的电信号显著不同的体系中的dNTP即为a1)或a2):
a1)所述待测DNA的3’末端的第一个核苷酸;
a2)所述待测DNA的3’末端的第一区段的核苷酸;所述第一区段由N个核苷酸组成,N为自然数且大于等于2。
2.DNA测序方法,依次包括如下步骤:
(1)在待测DNA的3’末端增加标签序列,形成含有标签序列的待测DNA;所述标签序列的核苷酸序列与测序引物的核苷酸序列反向互补;
(2)将所述含有标签序列的待测DNA和所述测序引物混合,形成5’末端双链主体单链形式的产物;
(3)完成步骤(2)后,将产物分别与dATP、dCTP、dTTP和dGTP混合,得到四个体系,分别将每个体系加入特异DNA聚合酶修饰的单分子器件,读取电信号,与其它三个体系的电信号显著不同的体系中的dNTP即为a1)或a2):
a1)所述待测DNA的3’末端的第一个核苷酸;
a2)所述待测DNA的3’末端的第一区段的核苷酸;所述第一区段由N个核苷酸组成,N为自然数且大于等于2;
(4)将前一步骤中与其它三个体系的电信号显著不同的体系的产物分别与dATP、dCTP、dTTP和dGTP混合,得到四个体系,分别将每个体系加入所述特异DNA聚合酶修饰的单分子器件,读取电信号,与其它三个体系的电信号显著不同的体系中的dNTP即为b1)或b2):
b1)所述待测DNA的3’末端的第二个核苷酸;
b2)所述待测DNA的3’末端的第二区段的核苷酸;所述第二区段由M个核苷酸组成,M为自然数且大于等于2。
3.DNA测序方法,依次包括如下步骤:
(1)在待测DNA的3’末端增加标签序列,形成含有标签序列的待测DNA;所述标签序列的核苷酸序列与测序引物的核苷酸序列反向互补;
(2)将所述含有标签序列的待测DNA和所述测序引物混合,形成5’末端双链主体单链形式的产物;
(3)完成步骤(2)后,将产物分别与dATP、dCTP、dTTP和dGTP混合,得到四个体系,分别将每个体系加入特异DNA聚合酶修饰的单分子器件,读取电信号,与其它三个体系的电信号显著不同的体系中的dNTP即为a1)或a2):
a1)所述待测DNA的3’末端的第一个核苷酸;
a2)所述待测DNA的3’末端的第一区段的核苷酸;所述第一区段由N个核苷酸组成,N为自然数且大于等于2;
(4)将前一步骤中与其它三个体系的电信号显著不同的体系的产物分别与dATP、dCTP、dTTP和dGTP混合,得到四个体系,分别将每个体系加入所述特异DNA聚合酶修饰的单分子器件,读取电信号,与其它三个体系的电信号显著不同的体系中的dNTP即为b1)或b2):
b1)所述待测DNA的3’末端的第二个核苷酸;
b2)所述待测DNA的3’末端的第二区段的核苷酸;所述第二区段由M个核苷酸组成,M为自然数且大于等于2;
(5)重复步骤(4),直至获得所述待测DNA的测序结果。
4.如权利要求1至3任一所述的DNA测序方法,其特征在于:所述测序引物的核苷酸序列如序列表中序列4自5’末端起第51至68位所示。
5.如权利要求1至4任一所述的DNA测序方法,其特征在于:所述特异DNA聚合酶满足如下条件:(1)具有DNA聚合酶的生物活性;(2)与所述单分子器件进行连接且仅有一个连接位点,提供该连接位点的氨基酸残基位于所述特异DNA聚合酶的构象变化区;(3)提供该连接位点的氨基酸残基在所述特异DNA聚合酶中仅出现一次。
6.如权利要求5所述的DNA测序方法,其特征在于:所述特异DNA聚合酶为b1)或b2)或b3):
b1)氨基酸序列是序列表中序列3所示的蛋白质;
b2)将序列表中序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质;
b3)将序列表中序列1所示的氨基酸序列自N末端起第907位的半胱氨酸残基替换为非半胱氨酸残基,第790位的亮氨酸残基变为半胱氨酸残基,得到的蛋白质。
7.权利要求1至6任一所述的DNA测序方法中所述特异DNA聚合酶。
8.用于DNA测序的试剂盒,包括权利要求1至6任一所述的DNA测序方法中所述特异DNA聚合酶。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括权利要求1至4任一所述的DNA测序方法中所述测序引物。
10.用于DNA测序的试剂盒,包括权利要求1至6任一所述的DNA测序方法中所述特异DNA聚合酶修饰的单分子器件。