一种花椰菜花球花梗长度的分子标记辅助选择方法与流程

文档序号:11126229阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种花椰菜花球花梗长度的分子标记辅助选择方法,其特征在于该方法按如下步骤进行:

1)待检测材料准备:将待检测的花椰菜材料按照常规方法播种、育苗,并分单株编号;于2-3片真叶期取各单株叶片按照常规CTAB方法分别提取基因组DNA,-20℃保存,备用;

2)待检测样品基因组DNA的PCR扩增:利用特异引物组合对待检测样品的基因组DNA分别进行PCR扩增,特异引物组合中上游引物:5’- CAAATTTGTTTCGAAGTGATTCT -3’;下游引物 :5'- TGGATGGAGTTCA A ATCTTTT -3’;反应总体积20μL,具体体系如下:2.5 mmol/L上述引物,0.2 mmol/L dNTPs,1 U Taq酶,2mmol/L MgCl2,1×扩增缓冲液,基因组DNA 50 ng,加dd H2O至20μL;热循环程序为:94℃预变性2 min,1个循环;94℃变性1min,55℃复性30 s,72℃延伸45 s,35个循环;72℃延伸10min;4℃保存;

3)PCR产物的酶切反应及电泳检测:将2)中的PCR产物利用限制性内切酶Mae I在37℃条件下酶切3 h,酶切体系含 PCR 产物 7μL, 10×buffer 1μL,1 U Mae I,加dd H2O至10μL;酶切后将其产物在1.2% 琼脂糖凝胶上进行电泳分离,溴乙锭显色;

4)待检测样品花球花梗长度的鉴定与筛选:依据3)中凝胶条带模式,显示为169bp的样品视为含有长花梗位点基因型的材料予以保留,而显示为135bp的样品则视为不含长花梗位点基因型的材料予以剔除;将入选幼苗定植于大田,按照常规花椰菜栽培措施进行田间管理;花球成熟时用游标卡尺测量花球最下部4个不同分枝方向的花梗长度,取平均值作为该株的花梗长度值,淘汰其中花梗长度达不到预期值的短花梗植株,对花梗长且其它农艺、经济性状好的植株予以进一步繁殖。

2.一种检测花椰菜花球花梗长度的特异引物组合,其特征在于该引物组合中上游引物:5’- CAAATTTGTTTCGAAGTGATTCT -3’;下游引物 :5'- TGGATGGAGTTCAAATCTTTT -3’。

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