本发明涉及保健食品领域，具体涉及一种桑黄保健酒的制作方法。
背景技术：
桑黄Sanghuangporus sanghuang是我国最为著名的药用真菌之一。 据《药性论》记载：桑黄味微苦，性寒，在我国传统中药中用于治疗痢疾、盗汗、血崩、血淋、脐腹涩痛、脱肛泻血、带下、闭经；《神农本草经》将桑黄描述为“久服轻身不老延年”，还有解毒、提高消化系统机能的作用。大量现代医学研究也证实，桑黄具有显著的抗肿瘤、增强免疫、抗氧化、降血糖等功效。其中，桑黄黄酮、三萜等醇溶性成分以及桑黄多糖等水溶性成分为其发挥作用的主要活性成分。
因桑黄野生资源日益枯竭，故目前桑黄类食品及保健食品的开发，多以液体发酵所的菌丝体或人工栽培子实体为原料。液体发酵生产周期短，但对设备及技术的要求较高，基础投资大；人工栽培子实体周期长，产量低，且需要较大的面积。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足，提供一种桑黄保健酒的制备方法。
技术方案
一种桑黄保健酒的制作方法，包括以下步骤：
（1）固体发酵培养：将桑黄液体菌种接种于固体发酵基质，于25-30℃恒温、避光静置培养；所述固体发酵基质含熟化谷物96-98%、硫酸钙1-2%和蔗糖1-2%，所述百分数为质量百分数；
（2）浸提：步骤（1）完成后，向步骤（1）的容器中加入45°以上白酒，用不带通气滤膜的盖子封口，进行浸提，得固液混合物；
（3）将固液混合物固液分离，所得上清液即为桑黄保健酒。
本发明是采用白酒对桑黄菌种的固体培养产物进行浸提而成。浸提对象不是桑黄菌种的液体培养菌丝体，而是固体培养菌丝体及残余固体培养基。虽然，固体培养与液体培养都是菌种培养中常用的培养方式；但是，与采用液体培养菌丝体作为浸提对象相比，采用固体培养菌丝体及残余固体培养基作为浸提对象，在其他操作条件相同的情况下，桑黄保健酒中的总黄酮、总三萜含量及抗氧化活性（DPPH自由基和羟自由基清除率）明显提高。
本发明通过实验研究还发现，采用不同的固体发酵基质（主要成分熟化谷物不同）进行培养，在相同的培养、浸提条件下，所得桑黄保健酒中的总黄酮、总三萜含量及抗氧化活性存在明显差异。采用不同固体发酵基质进行培养，培养时间、浸提方式的改变，对所得桑黄保健酒中不同活性物质的含量所产生的影响不同。有些固体发酵基质，随着培养时间的增长，所得桑黄保健酒中某些活性物含量会提高、另一些活性物质的含量会降低、还有些活性物质的含量是先提高后降低。总之，采用不同的固体发酵基质，培养时间、浸提方式的改变，对浸提液成分变化的影响是不同的、不确定的、没有规律可循的。具体来说，当固体发酵基质为荞麦时，培养20天、采用浸提15d的浸提方式，浸提液中的总黄酮含量可高达123mg/L；当固体发酵基质为谷子时，培养60天、采用浸提15d超声1小时的浸提方式，所得桑黄保健酒中的总三萜含量可高达1047mg/L。
上述制作方法，所述固体发酵培养的具体操作为：将固体发酵基质装至容器总体积的1/4—1/5后，用带有通气滤膜的盖子密封；然后用高压蒸汽灭菌锅，于121℃灭菌1.5-2小时；固体发酵基质温度降至30℃以下时，以40-60mL/kg的接种量接入桑黄液体菌种，于25-30℃恒温、避光静置培养。
上述制作方法，采用相同固体发酵基质、培养条件，浸提方法不同，所得桑黄保健酒中的含量不同，优选采用浸提15天、浸提15天超声1小时或超声1小时的方法。所述浸提15天超声1小时，是指浸提15天后再超声处理1小时，超声处理条件采用常规条件即可。
上述制作方法，优选的，所述谷物为谷子、高粱或荞麦。
上述制作方法，优选的，步骤（1）的培养时间为20天、40天或60天。
上述制作方法，优选的，所述谷物为荞麦，培养20天，浸提15d，以获得高总黄酮含量的浸提液。
上述制作方法，优选的，所述谷物为谷子，培养60天，浸提15d或浸提15d超声1小时，以获得高总三萜含量的浸提液。
上述制作方法：浸提时间可以延长至1年；也就是说步骤（2）加入白酒后保持原样室温放置，可长期浸提保存。
上述制作方法：将桑黄母种用液体培养基进行培养，得桑黄液体菌种；培养条件为常规条件，具体的可以是：温度22-30℃、避光振荡培养3-6天，摇床转速100-160r/min。
所述液体培养基采用常规液体培养基即可。
上述制作方法：所述熟化谷物是谷物经过熟化处理之后的产物；熟化处理方法采用常规方法即可；具体的可以采用以下步骤：谷物在自来水中浸泡，确保其吸水充足（通常需要浸泡12-24小时）；然后将吸水充足的谷物转入锅内，加水没过谷物3-5cm，加温至水沸，谷物煮制熟而不烂、无白心时捞出沥水；待表面水分沥干，即得熟化谷物。
本发明同已有技术相比有如下积极效果：
本发明所制备桑黄保健酒，集桑黄菌丝体及经固体发酵转化后谷物中醇溶性成分为一体，色泽金黄，香味浓郁，营养丰富，黄酮及三萜类成分含量高，具有良好的清除自由基、提高免疫等功效；本发明中桑黄固体发酵所用谷物、食品添加剂硫酸钙及蔗糖等材料均为天然或可食用材料，质量安全可靠；本发明所用原料为桑黄固体发酵产物，主要包括桑黄菌丝体及经发酵转化的谷物类培养料，相比单纯桑黄菌丝体，营养更加全面丰富，且易于被人体吸收；本发明所用浸泡原料中的谷物类材料，经白酒浸提后，使酒中的米香味更加浓郁，口感更佳。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细说明，但本发明所保护范围不限于此。
实施例1
本实施例涉及的一种桑黄保健酒的制备方法包括以下步骤：
（1）桑黄液体菌种的制备：
将桑黄母种无菌操作接种于液体培养基中进行震荡培养，培养条件为：温度27℃、摇床转速150r/min、避光振荡培养5天，即得桑黄液体菌种；所述液体培养基的组成为：玉米粉40g/L、葡萄糖25g/L、酵母抽提物10g/L、麸皮20g/L、KH2PO4 1.25g/L、MgSO4·7H2O 0.625g/L、去离子水余量；
（2）制备固体发酵基质：
分别选择带壳谷子（谷子，学名：Setaria italica）、带壳高粱、带壳荞麦作为带壳谷物；配方：带壳谷物98%，食品添加剂硫酸钙1%，蔗糖1%；所述％为质量百分数；
步骤包括：
1材料预处理：将带壳谷物在自来水中浸泡12小时，确保吸水充足；
2沸水煮制：将浸泡后吸水充足的谷物转入锅内，加水没过料面3-5cm，逐渐加温至水沸，谷物煮制熟而不烂，无白心时，即可捞出沥水；
3拌料：将沥干表面水分的谷物按照配方比例加入适量食品添加剂硫酸钙及蔗糖后，搅拌均匀；分别获得制备固体发酵基质1（所用谷物为谷子）、固体发酵基质2（所用谷物为高粱）、固体发酵基质3（所用谷物为荞麦）；
（3）发酵培养：选用240mL组培瓶，将固体发酵基质1装至容器总体积的1/4—1/5后，用带有通气滤膜的盖子密封；然后将组培瓶转移至高压蒸汽灭菌锅中，于121℃灭菌1.5-2小时；固体发酵基质1温度降至30℃以下时，以2-3mL/瓶的接种量接入桑黄液体菌种，于25-30℃恒温、避光静置培养20天；
（4）桑黄保健酒的制备：
1向发酵培养完成后的组培瓶中加入55°白酒200mL，用不带通气滤膜的瓶盖封口，混匀，静置浸提15d，得固液混合物；
2将固液混合物进行固液分离，收集上清液即为制备所得桑黄保健酒。
采用固体发酵基质1，依次改变培养时间、浸提方式，其他操作同上，检测所得桑黄保健酒中的活性物质含量，及对DPPH自由基和羟自由基清除率；结果如表1所示：
表1
实施例2
（1）发酵培养：选用240mL组培瓶，将固体发酵基质2装至容器总体积的1/4—1/5后，用带有通气滤膜的盖子密封；然后将组培瓶转移至高压蒸汽灭菌锅中，于121℃灭菌1.5-2小时；固体发酵基质2温度降至30℃以下时，以2-3mL/瓶的接种量接入实施例1制备的桑黄液体菌种，于25-30℃恒温、避光静置培养20天；
（2）桑黄保健酒的制备：
1向发酵培养完成后的组培瓶中加入55°白酒200mL，用不带通气滤膜的瓶盖封口，混匀，静置浸提15d，得固液混合物；
2将固液混合物进行固液分离，收集上清液即为制备所得桑黄保健酒。
采用固体发酵基质2，依次改变培养时间、浸提方式，其他操作同上，检测所得桑黄保健酒中的活性物质含量，及对DPPH自由基和羟自由基清除率；结果如表2所示：
表2
实施例3
（1）发酵培养：选用240mL组培瓶，将固体发酵基质3装至容器总体积的1/4—1/5后，用带有通气滤膜的盖子密封；然后将组培瓶转移至高压蒸汽灭菌锅中，于121℃灭菌1.5-2小时；固体发酵基质3温度降至30℃以下时，以2-3mL/瓶的接种量接入实施例1制备的桑黄液体菌种，于25-30℃恒温、避光静置培养20天；
（2）桑黄保健酒的制备：
1向发酵培养完成后的组培瓶中加入55°白酒200mL，用不带通气滤膜的瓶盖封口，混匀，静置浸提15天，得固液混合物；
2将固液混合物进行固液分离，收集上清液即为制备所得桑黄保健酒。
用固体发酵基质3，依次改变培养时间、浸提方式，其他操作同上，检测所得桑黄保健酒中的活性物质含量，及对DPPH自由基和羟自由基清除率；结果如表3所示：
表3
对比例1
（1）发酵培养：选用240mL组培瓶，将液体培养基装至容器总体积的1/4—1/5后，用带有通气滤膜的盖子密封；然后将组培瓶转移至高压蒸汽灭菌锅中，于121℃灭菌1.5-2小时；液体发培养基温度降至30℃以下时，以2-3mL/瓶的接种量接入桑黄液体菌种，于25-30℃恒温、避光静置培养；所述液体培养基的组成为：玉米粉40g/L、葡萄糖25g/L、酵母抽提物10g/L、麸皮20g/L、KH2PO4 1.25g/L、MgSO4·7H2O 0.625g/L、去离子水余量；
（2）桑黄保健酒的制备：
1向发酵培养完成后的组培瓶中加入55°白酒200mL，用不带通气滤膜的瓶盖封口，混匀，静置浸提，得混合物；
2将混合物中的菌球滤出即得制备所得桑黄保健酒。检测所得桑黄保健酒中的活性物质含量，及对DPPH自由基和羟自由基清除率；结果如表4所示。
表4
表1-4中的总三萜含量、总黄酮含量、DPPH自由基清除率、羟自由基清除率可以采用常规方法进行测定；本发明提供了其中一种测定方法：
一、桑黄保健酒中总三萜含量的测定
1、标准曲线的制作：以齐墩果酸为标准品进行三萜含量测定标准曲线的制作，520nm波长下测定吸光值，以齐墩果酸的质量为横坐标，吸光值为纵坐标制作标准曲线并获得线性公式：y=1.0821x-0.0023，R2=0.9995。
2、样品中总三萜含量的测定：准确取桑黄保健酒0.5mL于试管中，60℃水浴中挥干溶剂。加香草醛-冰乙酸0.2mL，高氯酸0.5mL混匀。60℃水浴20min，取出后冷却15min，再加入冰乙酸5mL混匀，520nm波长下测定吸光值，并根据线性公式计算样品中三萜含量，设置3个重复并求平均值。
二、桑黄保健酒中总黄酮含量的测定
1、标准曲线的制作：采用芦丁为标准品进行黄酮含量测定标准曲线的制作，510nm下测定吸光值。以反应体系中芦丁的质量为横坐标，吸光值为纵坐标制作标准曲线并获得线性公式：y=1.1303x-0.0016，R2=0.9937。
2、样品中黄酮含量的测定：准确取桑黄保健酒0.6mL于试管中，加入5% NaNO2溶液0.2mL，摇匀放置6min，再加入10% Al(NO3)3溶液0.2mL，摇匀放置6min，加入4%NaOH溶液2mL，再加入70%乙醇溶液定容至5mL，摇匀放置10min。以不加样液的组为对照，510nm下测定吸光值，并根据线性公式计算样品中黄酮含量，设置3个重复并求平均值。
三、桑黄保健酒清除DPPH自由基活性测定
（1）测定方法
3 mL反应体系中，分别加入1.5 mL桑黄保健酒和1.5 mL 2×10-4mol/LDPPH溶液，震荡混匀后，静置30 min，然后517 nm比色，记录吸光值Ai； Aj为不加DPPH的反应体系吸光值（由1.5 mL无水乙醇代替）；Ac为不加样液的反应体系吸光值（由1.5 mL H2O代替）；无水乙醇作为空白调零，每个样品均设3个重复进行测定。
（2）计算方法
DPPH自由基清除率 K=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%。
四、桑黄保健酒清除羟自由基活性测定
（1）测定方法
在4mL反应体系中，依次加入1 mL桑黄保健酒，1 mL 9 mM/L FeSO4，1 mL 9 mM/L水杨酸，1 mL 8.8 mM/L H2O2.，37℃水浴60 min后，10，000 rpm离心8 min，然后510 nm测定吸光值Ax；A0 为不加样液的体系吸光值（由1 mL H2O代替）；Ax0为不加H2O2.的体系吸光值（由1 mL H2O代替）；蒸馏水做空白对照，每个样品均设3个重复进行测定。
（2）计算方法
羟自由基清除率（%）= [A0-（Ax- Ax0）]/ A0×100%。