一种4′,7–二乙基射干苷元的纯化方法及制备方法与流程

本发明涉及药物领域，具体涉及一种4′,7–二乙基射干苷元的纯化方法及制备方法。

背景技术：

柯萨奇病毒(Coxsachie virus)是一种肠道病毒，分为A型和B型两种，病毒进入人体于咽部和肠粘膜细胞内繁殖后，可侵入血液形成病毒血症，再散布至中枢神经系统、呼吸道、心脏、肌肉、皮肤等处，可引起无菌性脑膜炎、出疹性发热病、急性心肌炎和心包炎、流行性肌痛、上感、疤疹性咽喉炎及婴儿腹泻等。

目前，临床尚无能有效治疗柯萨奇病毒的药物，常用病毒唑等抗病毒药物以及干扰素、营养性制剂、中药黄芪参麦注射液等对症保守治疗。

专利CN101723926A公开了4′,7–二乙基射干苷元的制备方法及抗柯萨奇病毒作用，其效果优于利巴韦林。但是，其制备方法中，样品未有溶解、过滤、析晶这一过程，只是用95％乙醇反复洗脱除去杂质，且采用测定方法为面积归一法，其含量不是真实的含量，其产品真实收率和纯度并不高，HPLC外标法含量测定为97.23％，炽灼残渣1.2％。

因此，为了改善产品收率，并且得到更高纯度的产品作为对照品进而控制其质量，目前亟需一种4′,7–二乙基射干苷元的纯化方法及制备方法。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供了一种4′,7–二乙基射干苷元的纯化方法，它包括以下步骤：

(1)将4′,7–二乙基射干苷元加热溶解在溶剂中，过滤，取滤液；所述溶剂选自二甲基乙酰胺或氯仿；

(2)向滤液中加入抗溶剂无水乙醇，冷却析晶，过滤；

(3)取过滤后的固体，采用步骤(1)中相同的溶剂重结晶；

(4)分离出晶体，干燥即得。

进一步地，所述溶剂与4′,7–二乙基射干苷元的体积重量比为5～10mL：1g。

进一步地，所述溶剂选自二甲基乙酰胺，二甲基乙酰胺与4′,7–二乙基射干苷元的体积重量比为10mL：1g，无水乙醇与4′,7–二乙基射干苷元的体积重量比为5mL：1g。

进一步地，所述溶剂选自氯仿，氯仿与4′,7–二乙基射干苷元的体积重量比为5mL：1g，无水乙醇与4′,7–二乙基射干苷元的体积重量比为10mL：1g。

本发明的纯化方法，通过工艺的筛选，尤其是加入抗溶剂无水乙醇这种析晶方式的特定选择，可以简便有效地制备得到高纯度的4′,7–二乙基射干苷元，可以作为对照品，为有效控制药品的质量提供了可靠的保障。

本发明还提供了一种制备4′,7–二乙基射干苷元的方法，它包括以下步骤：

(A)以射干苷元为原料，加入NaOH和乙基化试剂反应后得反应液；

(B)加酸，调整反应液的pH值至pH＝1～2，加水，过滤，纯化得4′,7–二乙基射干苷元。

进一步地，所述纯化是按照前述的纯化方法进行的。

进一步地，所述射干苷元与氢氧化钠的重量比为1:1。

进一步地，所述乙基化试剂选自碳酸二乙酯、碘乙烷、溴乙烷或硫酸二乙酯；优选硫酸二乙酯。

进一步地，步骤(A)中，所述反应的温度为100℃。

进一步地，所述酸为盐酸。

射干苷元为5，7，4′三羟基异黄酮化合物，有三个游离的酚羟基存在，烷基化(乙基化)反应理论反应产物有7个，另外射干苷元C环的氧键在强碱存在下易发生裂解成为查尔酮，从而使反应产物多达10余种。发明人在制备方法的摸索中，对反应过程用薄层层析跟踪，通过多次实验，证明射干苷元与氢氧化钠配料比为1:1时所得反应产物副产物少，目标产物4′,7–二乙基射干苷元得率高(薄层条件：固定相为硅胶GF₂₅₄，展开剂为氯仿：甲醇(10：0.5))。薄层层析图谱见图1，HPLC图谱见图2～5。

从图1中可以看出，射干苷元：氢氧化钠(1:1)时的反应产物的杂质最少。

从图2中可以看出，射干苷元：氢氧化钠(1:0.2)时产物有4个副产物，目标产物占总产物83.7％(面积归一化法)。

从图3中可以看出，射干苷元：氢氧化钠(1:0.5)时产物有3个副产物，目标产物占总产物87.9％(面积归一化法)。

从图4中可以看出，射干苷元：氢氧化钠(1:1)时产物有1个副产物，目标产物占总产物90.2％(面积归一化法)。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为不同配料比下反应产物的薄层图谱。从左至右依次为点1：射干苷元：氢氧化钠(1:0.2)时的反应产物(4个杂质斑点)；点2：射干苷元：氢氧化钠(1:0.5)时的反应产物(3个杂质斑点)点3：射干苷元：氢氧化钠(1:1)时的反应产物(1个杂质斑点)；点4：4′,7–二乙基射干苷元对照品。

图2为射干苷元：氢氧化钠(1:0.2)时反应产物的HPLC图谱。

图3为射干苷元：氢氧化钠(1:0.5)时反应产物的HPLC图谱。

图4为射干苷元：氢氧化钠(1:1)时反应产物的HPLC图谱。

图5为4′,7–二乙基射干苷元对照品的HPLC图谱。

具体实施方式

试剂来源为成都市科龙化工试剂厂，均为分析纯。

射干苷元为自制，含量>98％(面积归一化法)，具体见专利ZL 200910308146.1。

实施例1 4′,7–二乙基射干苷元的制备

称取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，碳酸二乙酯200mL，水浴回流反应2小时，取出，用适量36％盐酸中和至pH＝1～2，加水搅拌放冷，过滤，60℃减压干燥，得淡黄色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率50％，纯度60％(HPLC面积归一化法)。

实施例2 4′,7–二乙基射干苷元的制备

称取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，碘乙烷200mL，水浴回流反应30分钟，取出，用适量36％盐酸中和至pH＝1～2，加水搅拌放冷，过滤，60℃减压干燥，得淡黄色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率75％，纯度78％(HPLC面积归一化法)。

实施例3 4′,7–二乙基射干苷元的制备

称取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，溴乙烷200mL，水浴回流反应1小时，取出，用适量36％盐酸中和至pH＝1～2，加水搅拌放冷，过滤，60℃减压干燥，得淡黄色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率70％，纯度72％(HPLC面积归一化法)。

实施例4 4′,7–二乙基射干苷元的制备

称取射干苷元100g，加NaOH 100g，95％乙醇1000mL，硫酸二乙酯200mL，水浴回流反应30分钟，取出，用适量36％盐酸中和至pH＝1～2，加水搅拌放冷，过滤，60℃减压干燥，得淡黄色粉末，即4′,7–二乙基射干苷元，收率85％，纯度90％(HPLC面积归一化法)。

实施例5 4′,7–二乙基射干苷元的纯化

取上述实施例4制备的4′,7–二乙基射干苷元10g，加二甲基乙酰胺100mL 100℃加热溶解，趁热过滤，滤液加入无水乙醇50mL，摇匀，放置析晶，结晶过滤，粗晶加入二甲基乙酰胺80mL 100℃加热溶解，趁热过滤，滤液加入无水乙醇40mL，摇匀，放置析晶，得到淡黄色片状结晶，过滤，60℃减压干燥24小时，得4′,7–二乙基射干苷元5.5g，含量99.12％(HPLC外标法)。

实施例6 4′,7–二乙基射干苷元的纯化

取上述实施例4制备的4′,7–二乙基射干苷元10g，加氯仿50mL 70℃加热溶解，趁热过滤，滤液加入无水乙醇100mL，摇匀，放置析晶，结晶过滤，粗晶加入氯仿40mL70℃加热溶解，趁热过滤，滤液加入无水乙醇80mL，摇匀，放置析晶，得到淡黄色针状结晶，过滤，60℃减压干燥24小时，得4′,7–二乙基射干苷元7.0g，含量99.56％(HPLC外标法)。.

对比实施例1 4′,7–二乙基射干苷元的纯化

取上述实施例4制备的4′,7–二乙基射干苷元10g，加甲醇500mL 80℃加热溶解，趁热过滤，放置析晶，结晶过滤，粗晶加入甲醇400mL 80℃加热溶解，趁热过滤，放置析晶，结晶过滤，得到淡黄色粒状结晶，过滤，60℃减压干燥24小时，得4′,7–二乙基射干苷元5.0g，含量98.52％(HPLC外标法)。

对比实施例2 4′,7–二乙基射干苷元的纯化

取上述实施例4制备的4′,7–二乙基射干苷元10g，加乙醇400mL 80℃加热溶解，趁热过滤，放置析晶，结晶过滤，粗晶加入乙醇300mL 80℃加热溶解，趁热过滤，放置析晶，结晶过滤，得到淡黄色针状结晶，过滤，60℃减压干燥24小时，得4′,7–二乙基射干苷元6.0g，含量98.75％(HPLC外标法)。